广西健康青年H9、H6亚型禽流感病毒血清抗体调查

【摘要】  目的 调查广西医科大学2007年新生中H9、H6亚型流感病毒的抗体水平，以了解广西健康青年是否已受到H9、H6亚型禽流感病毒感染。 方法 广西医科大学2007级新生血清168 份，通过HI 实验进行抗体检测。 结果 以HI抗体滴度≥1∶10为流感病毒抗体阳性，H9 亚型抗体阳性率13.69%；有两份H6 亚型抗体阳性。 结论 广西健康青年人群已受到禽流感H9亚型病毒株的感染，H6 亚型也可能感染了人群。

【关键词】  禽流感病毒 H9 H6 抗体 血凝抑制试验

禽流感是由禽流感病毒引起的一种急性传染病,主要发生在禽类。目前证实能感染人类的3种亚型禽流感病毒有H5N1、H7N7和H9N2，其中H9N2亚型为低致病性禽流感病毒。1966年,首次从火鸡中分离得到H9N2［1］，在我国，1994年首次自鸡分离出H9N2亚型禽流感病毒［2］，至今，H9N2亚型已在家禽中建立稳定的种系，广泛分布在世界各地［3］。1998 年郭元吉等［4］发现禽H9N2亚型流感病毒能感染人类,此后陆续有发现禽流感H9N2感染人的病例的报道，H9N2在人群中的隐性感染率也比较高［3］。对潮汕地区健康青年H9N2感染调查中发现，H9N2隐性感染率非常之高［5］。H6亚型流感病毒虽属于低致病性流感病毒，过去仅引起鸟禽感染，最近有文献报道H6亚型流感病毒有向人群中传播的趋势［6］。这就提示我们,由于人与禽类的接触比较密切，原来在动物间存在并传播的疾病,传染给人并对人类造成重大伤害的可能性越来越大。那么，广西健康青年人群是否已受到H9、H6亚型流感病毒的感染呢？为此我们对广西健康青年进行禽流感病毒H9N2、H6N1血清抗体调查，以期了解广西健康青年人群禽流感病毒感染及抗体保护状况。现将结果报告如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  血清采集  采集2007级广西医科大学广西籍新生血样168份, 血清分离后置-20℃冰箱保存待检。

　　1.2  抗原

　　1.2.1  病毒株  Qa/GX/2645/2005（H9N2）和DK/GX/3459/2005(H6N1)由广西医科大学微免教研室提供，这两种亚型病毒经9～11d龄鸡胚尿囊腔传代 ,H9N2红细胞凝集滴度为1:2048，H6N1红细胞凝集滴度为1:64。

　　1.2.2  4个血凝单位的调制和再确认  根据各亚型病毒的HA滴度稀释病毒,然后确定所稀释病毒是否为4个血凝单位做HA试验,结果表明稀释病毒准确。

　　1.3  血凝抑制试验

　　1.3.1  血清预处理  (1)去除非特异性抗体：在 200μl 霍乱弧菌滤液中加入血清 50μl，混匀后于 37℃水浴箱放置12～18h,再于56℃水浴箱放置50min，即得到1∶5稀释血清；(2)除正常血凝素：在上述1∶5 稀释血清250μl 中加入20%鸡RBC 25μl,混匀后置于37℃水浴箱30min，2 000r/m离心3min，取上清液置于4℃冰箱保存待用。处理后的血清稀释度为1∶5。从168份血清中随机抽样15份,测定其有无非特异性的血凝现象,以排除假阳性,结果发现无。各亚型病毒各检测168份。

　　1.3.2  HI试验测血清抗体  取一洁净96孔塑料板 ,每孔加入25μl PBS，于第1孔内加入经处理的1∶5稀释血清25μl,吹吸3次后 ,取25μl加入第2孔内,顺次作倍比稀释至 1∶1 280，每孔加入4 个血凝单位的抗原应用液25μl。在塑料板的1孔中加入 1：10 血清及 PBS各25μl作为血清对照孔，另取1孔加入50μl PBS作为鸡血球对照孔。混匀，室温静置40min后,每孔均加入1%鸡RBC悬液25μl, 混匀后室温静置60min，在相同条件下观察结果。判定结果以能完全抑制红细胞凝集的最大血清稀释度为血凝素抗体滴度。以HI抗体滴度≥1∶10 为H9、H6亚型流感病毒抗体阳性。

　　2  结果

　　2.1  血清抗体调查  168份被检血清中, 23份H9亚型抗体阳性,阳性率为13.69%，2份H6亚型抗体阳性，阳性率为1.2%。

　　2.2  H9亚型禽流感病毒血清抗体滴度的分布  在健康入学新生中，H9亚型的流感病毒的抗体阳性率达13.69%，而≥1∶40者占阳性数的43.49%，几乎占一半，抗体滴度较高，不同个体抗体效价差异较小,见表1。

　　表1  168份H9亚型抗体阳性血清中不同抗体滴度的分布（略）

　　Table 1  The distribution of titer for H9 subtype antibody in 168positive serum samples

　　3  讨论
   
　　一般的情况下，大多数禽流感病毒并不感染人类，而H9亚型禽流感病毒能自然感染人，可能机制为：H9N2亚型AIV有与人流感病毒相同的受体，除此之外，禽H9N2亚型在神经氨酸酶的红细胞吸附位点与人H2N2亚型和H3N2亚型流感病毒存在相似的突变，与其他禽流感病毒不同，这种糖蛋白表面的特征增加了感染人的倾向［7］。目前资料显示，无论我国南方还是北方的人群中，均已受到H9亚型毒株的感染［4］。2001年潮汕地区健康青年H9亚型流感病毒抗体阳性率为37.2%［5］，2002年上海市人群H9 亚型流感病毒抗体阳性率为7.56%［8］， 2002年深圳地区一般人群血清中的亚型流感病毒抗体阳性率为26%［9］，2004年对珠海普通人群血清中H9亚型流感病毒抗体阳性率为9.65%［10］, 2006年广州市一般人群H9 亚型流感病毒抗体阳性率为2.2%［11］。而我们本次对广西健康青年进行的血清学调查发现，血清中 H9 亚型禽流感病毒 抗体阳性率为13.69%，与珠海普通人群感染率相似，说明广西健康青年人群也已经受到禽流感H9 亚型病毒的感染。此次调查对象为健康青年人群，与潮汕地区健康青年人群调查比较，但感染率不如他们高，可能由于样本量小，掩盖了地区、接触动物种类等造成的差异。本次调查发现H9亚型禽流感病毒抗体效价较高，对青年人群有一定的免疫保护作用。
   
　　鹌鹑在H9N2跨种属传递过程中可能扮演着重要的中间宿主角色［3］，1999年香港H9N2感染事件的发生正是由鹌鹑H9N2毒株直接感染人所致［12］，我们本次调查选取的H9N2病毒株是从鹌鹑分离出来的，所以本病毒株具有代表意义。
   
　　和H9N2一样， H6亚型流感病毒也存在感染人类的可能性［6］，为此我们同时进行H6亚型流感病毒的血清学抗体调查。结果只有两份H6 亚型抗体阳性，但抗体滴度较低。是否人群已受到H6亚型流感病毒的感染？应进一步扩大样本量进行调查，予以证实。
   
　　H9亚型虽不像H5和H7那样具有高致病性，但也不可忽视。在过去的10年中，这两种病毒都发生过从野生水生动物向家养禽类传播，进一步感染人的事件［13，14］，而且禽畜与人类生活的密切关系，对于禽流感病毒潜在的可引起人类流感流行的危险性，必须引起高度重视。虽然目前H9亚型禽流感目前尚不具备在人与人之间传播的能力, 但在抗原漂移和抗原转变的共同作用下,禽流感病毒表面的糖蛋白HA和NA通过不断进化获得更高的识别唾液酸、膜融合等活性，具备了感染人类细胞并在人体内有效复制的能力，就会对人体细胞、组织直接产生形态结构和功能的损伤［15］。人类必须对此保持高度警惕。因此，有必要加强对人群低致病性禽流感病毒感染状况的监测。

【参考文献】
  　　［1］ Homme PJ, Easterday BC. Avian influenza virus infections. I. Characteristics of influenza A-turkey-wisconsin-1966 virus［J］. Avian Dis,1970,14(1):66～74.

　　［2］ Guo YJ,Krauss S, Senne DA, et al. Characterization of the pathogenicity of the member of the newly established H9N2 influenza virus lineages in Avian［J］.Virology,2000,269(1):278～288.

　　［3］ 陆海融，樊晓晖. 禽流感病毒H9N2的研究进展［J］.广西医学，2005，27(5)：699～701.

　　［4］ 郭元吉，李建国，程小雯，等. 禽H9N2亚型流感病毒能感染人的发现［J］.中华实验和临床病毒学杂志，1999，13(2)：105～108.

　　［5］ 梁庆，李景东，陈庞洲，等. 潮汕地区健康青年H9、H6、H5亚型甲型流感病毒血清抗体调查［J］.汕头大学医学院学报，2003，16(2)：107～108.

　　［6］ Chin PS, Hoffmann E, Webby R, et al.Molecular Evolution of H6 Influenza Viruses from Poultry in Southeastern China: Prevalence of H6N1 Influenza Viruses Possessing Seven A/HongKong/156/97 (H5N1)-Like Genes in Poultry［J］. J. Virology, 2002,76(2):507～516.

　　［7］ Matrosovich MN, Krauss S，Webster RG. H9N2 influenza a viruses from poultry in Asia have human virus -like receptor specificity［J］. Virology, 2001, 281(1):156～162.

　　［8］ 孔利群,高烨,蒋杰辰,等.上海市人群甲型流感病毒H1、H3、H5、H9抗体血清学监测［J］. 上海预防医学杂志，2003，15(1)：10～12.

　　［9］ 程小雯，刘建军，何建凡，等.深圳地区人和鸡群中H9N2亚型流感病毒病原学和血清流行病学调查［J］.中华实验和临床病毒学杂志，2002，16(4)：319～321.

　　［10］ 马洪波，叶立青，谭华，等.珠海口岸出入境人员人间禽流感病毒抗体水平［J］.中国国境卫生检疫杂志，2004，27(4)： 202～203.

　　［11］ 鲁恩洁，刘远，陈艺韵，等. 2006年广州市职业人群禽流感监测分析［J］.热带医学杂志，2007，7(9)：923～924.

　　［12］ U.S.CDC. Basic Information About Avian Influenza (bird Flu)［EB/OL］,http://www.cdc.gov/flu/avian /facts.htm,2004-01-29/2004-01-30.

　　［13］ Webby RJ, Webster RG. Are we ready for pandemic influenza?［J］.Science,2003, 302(28):1519～1522.

　　［14］ Suzuki Y. Sialobiology of influenza molecular mechanism of host range variation of influenza viruses［J］. Biol Pharm Bul, 2005,28(3):399.

　　［15］ 秦成峰，鄂德. 人类禽流感的发病机制、临床特征与防控策略［J］. 解放军医学杂志， 2006，31(1)：81～82.

作者单位：广西医科大学,广西 南宁 530021