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【摘要】 目的 建立罗汉果鱼肝油中罗汉果TLC定性及鱼肝油UV定量的方法。 方法 采用薄层色谱法（TLC）对方剂中罗汉果进行定性鉴别以及采用紫外分光光度（UV）法测定特定波长的吸光度并按校正的吸光度计算鱼肝油中维生素A的含量。 结果 罗汉果薄层色谱斑点清晰、专属性强；维生素A在8.5～15.8单位/ml内与校正吸光度呈良好的线性关系（r=0.9997）。平均回收率为101.5%，RSD=0.97%。 结论 所建立的标准可用于罗汉果鱼肝油的质量控制。
【关键词】 罗汉果鱼肝油 薄层色谱法 维生素A 紫外分光光度法 质量标准
罗汉果鱼肝油主要由罗汉果和鱼肝油2味中药组成，具有清热润肺、化痰止咳的功效［1］；用于初期肺结核、支气管炎、喉痛咳嗽、软骨病、夜盲症等；对因缺乏维生素A、D引起的症状亦有治疗作用；长期以来为年老体衰、病后体弱者及妇女、小孩增进健康的营养滋补剂。为控制本品质量，本文分别采用薄层色谱法对方中罗汉果进行定性鉴别和采用紫外分光光度法对鱼肝油中的维生素A进行定量测定。方法简便准确、重复性好，适用于本制剂的质量控制。
1 材料与方法
1.1 材料 BS210S型赛多利斯电子天平（d=0.1mg，北京）；UV-8型三用紫外灯（无锡科达仪器厂）； UV-160岛津紫外分光光度计;硅胶G（青岛海洋化工厂），化学试剂均为色谱纯或分析纯，购于广州化学试剂厂。维生素A的植物油溶液（批号：20060702；含量：82.04 万单位/g），由东北制药总厂巴斯夫（沈阳）维生素有限公司提供；罗汉果对照药材（批号：120197-200402）；由中国药品生物制品检定所提供。罗汉果鱼肝油样品及阴性对照样品由海南省水产加工厂提供。
1.2 方法
1.2.1 罗汉果的样品处理及TLC鉴别 取样品200g，加水150ml，搅拌溶解，移入分液漏斗中，加醋酸乙酯150ml提取，分取醋酸乙酯，置水浴上蒸干，残渣加乙醇20ml使溶解，滤过，滤液加中性氧化铝（100～200目）2g，振摇2min，滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品溶液。取与供试品相应量的罗汉果阴性样品，按供试品溶液制备方法制成阴性对照溶液；另取罗汉果对照药材1g，加水100ml，煮沸，保持微沸50min，用脱脂棉滤过，滤液加醋酸乙酯40ml提取，自“分取醋酸乙酯”起，同法操作，作为对照药材溶液。吸取上述3种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯–甲酸–冰醋酸–水（37：2：2：4）为展开剂展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。
1.2.2 维生素A的样品处理及UV含量测定 取维生素A的植物油溶液（含量：82.04 万单位/g）0.0185g，精密称定，置皂化瓶中，加乙醇30ml与50%（g/g）氢氧化钾溶液3ml，置水浴中煮沸回流30min，冷却后，自冷凝管顶端加水10ml冲洗冷凝管内部管壁，将皂化液移至分液漏斗中（分液漏斗活塞涂以甘油淀粉润滑剂），皂化瓶用水80ml分3次洗涤，洗液并入分液漏斗中，用乙醚振摇提取4次（60、40、40、40ml），每次振摇约5min，合并乙醚液，用水洗涤数次，每次约100ml，洗涤时缓缓旋动，直至水层遇酚酞指示液不再显红色，乙醚液用铺有脱脂棉与无水硫酸钠的滤器滤过，滤器用乙醚洗涤，洗液与乙醚合并，放入250ml量瓶中，用乙醚稀释至刻度，摇匀，即得。（维生素A浓度： 60.71单位/ml）。精密量取3.5ml、4.0ml、4.5ml、5.0ml、5.5ml、6.0ml、6.5ml于25ml量瓶中，挥去部分乙醚后，置减压干燥器中，抽干，迅速加异丙醇溶解并稀释至刻度，制得对照品溶液;另取测试品约2.5g，精密称定，置分液漏斗中，加水20ml, 氨试液4ml, 乙醇5ml,振摇数分钟，用乙醚提取3次（60、50、40ml），合并乙醚提取液，置皂化瓶中，低温蒸干，按上述自“加乙醇30ml与50%(g/g)氢氧化钾溶液3ml”起，同法制备，即得供试品溶液。
2 结果
2.1 罗汉果的TLC鉴别图谱 按“1.2.1”项下操作的供试品色谱中,在与罗汉果对照药材色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点；阴性对照品溶液色谱中，在与罗汉果对照药材色谱相应的位置上，无相应的斑点。色谱详见图1。
2.2 维生素A的含量测定(UV)方法学验证
2.2.1 线性关系考察 取“2.2.1”项下制备的对照品溶液，照分光光度法测定［3］，测得对照品溶液最大吸收波长（λmax）为325nm,并在300、310、325、334nm四个波长处分别测定上述对照品溶液的吸光度，以A325(校正)=6.815A325-2.555A310-4.260A334计算校正吸光度,结果详见表1。
图1 罗汉果的TLC（略）
1.阴性对照；2～4.供试品；5～6.罗汉果对照药材
表1 对照品溶液各波长处的吸光度（略）
以维生素A的浓度为横坐标，校正吸光度为纵坐标绘制标准曲线, 回归方程为Y=0.056X+0.0057（ r=0.9997），结果显示，维生素A浓度在8.5～15.8单位/ml范围内线性关系良好。
2.2.2 精密度试验 精密称取同批号样品，按“1.2.2”项下方法制备供试品溶液，照“2.2.1”项下方法测定，计算，重复测定6次。结果RSD=0.7%。表明仪器精密度良好。
2.2.3 重现性试验 取样品6份（批号：061022），分别精密称定，按“1.2.2”项下方法制备供试品溶液，照“2.2.1”项下方法测定，计算，结果平均含量为232.4单位/g，RSD=0.8%。 表明重现性较好。
2.2.4 稳定性试验 精密称取同一份样品，按“1.2.2”项下方法制备供试品溶液，照“2.2.1”项下方法操作，于0、4、8、12、24h测定并计算，RSD=0.45%。表明供试液在24h内稳定。
2.2.5 加样回收率试验 采用加样回收法，取同一批样品（批号：061022；含量：232.4单位/g）约1.3g，共6份，精密称定，分别精密加入一定量的维生素A对照品溶液，按“1.2.2”项下方法制备供试品溶液，照“2.2.1”项下方法测定，计算，结果详见表2。
表2 加样回收率试验结果（略）
2.2.6 样品含量测定 取3批(批号：061101、061102、061103）样品，按“1.2.2”项下方法制备供试品溶液，照“2.2.1”项下方法测定，计算，结果3批样品中维生素A的含量分别为229单位/g、223单位/g、232单位/g。
3 讨论
罗汉果药材的化学成分主要为黄酮苷类和糖类［2］,但复方制剂中有关罗汉果成分的鉴别少有报道,且目前国内尚无罗汉果对照品作为对照物,故本文以罗汉果药材为对照,用中性氧化铝进行样品的纯化分离,经过预试验筛选,确定正文“1.2.1”中的色谱系统，操作简便，罗汉果TLC图谱清晰，专属性强。
选择分光光度法测定维生素A含量时，因本品为复方制剂，供试品中干扰测定的杂质较多，参照有关文献［3］，按本文“1.2.2”及”2.2.1”项下测定,阴性对照样品在相应的波长处无吸收,表明阴性对照无干扰。
供试品含量测定提取分离时,加入了氨试液,使样品中罗汉果杂质成分易溶解于水溶液,维生素A在乙醚提取液中能够提取完全,测定方法准确可靠。
【参考文献】
［1］ 周欣欣,宋俊生.罗汉果及罗汉果提取物药理作用的研究［J］.中华中医药学刊,2004,23(9):1723～1724.
［2］ 黎海彬，王邕，李俊芳,等.罗汉果化学成分与应用［J］.食品研究与发,2006,27(2):85.
［3］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)［S］.2005年版.北京:化学工业出版社,2005:附录Ⅶ.
作者单位：海南省药品检验所,海南 海口 570216