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【摘要】 目的 了解淫羊藿和人参须组成的羊参口服液对D-半乳糖致亚急性衰老模型大鼠睾丸的影响。 方法 33只3月龄雄性SD大鼠随机分为正常对照组、模型组、羊参口服液用药组。模型组用D-半乳糖连续皮下注射(100 mg／kg/d，共90d)造成亚急性衰老大鼠模型，羊参口服液用药组用D-半乳糖同样方法造模后，灌胃给予羊参口服液（1ml/100g，共90d）。实验结束后计算睾丸脏器系数,检测睾丸组织中SOD的含量、MDA含量,HE染色观察睾丸生精小管的形态结构。 结果 衰老大鼠睾丸组织SOD含量明显下降，MDA含量明显升高(与正常大鼠相比较P<0.05)，睾丸生精小管管腔变狭窄，生精细胞层数减少、细胞稀疏。羊参口服液组可明显抑制衰老大鼠睾丸组织SOD含量的下降及MDA含量的升高，并能明显改善衰老大鼠睾丸生精小管的形态结构。 结论 羊参口服液可明显改善衰老大鼠睾丸的功能，具有一定延缓衰老的作用。
【关键词】 淫羊藿；人参须；大鼠；衰老模型；睾丸；超氧化物歧化酶；丙二醛
Effect of Yangshen oral solution on change of testes in D - galactose-induced aged rats.
LI Bin,WU Tie, ZHANG Xin-le, et al.
( Department of Pharmacology of Guangdong Medical College, Zhanjiang 524023, Guangdong, P. R. China )
Abstract : Objective To study the effect of Yangshen oral solution included epimedium brevicornum ginseng on the changes of testes in D - galactose - induced rats .Methods Thirty Sprague-Dawley male rats at age of 3 months were randomly divided into three groups ,including a control group ,a model group , and a Yangshen oral solution group ,Animals except control group were in hypodermy injecteded D-galactose 100 mg／kg per day continually for three months. Rats in Yangshen oral solution group were intragastrically perfused of Yangshen oral solution 1ml/100g at the same time. The concentrations of SOD and MDA in left testis was detected MDA after stained with HE and the pathological changes occurred in tissue of testicle were also investigated . Results The level of SOD was markedly decreased and levels of NOS, MDA were significantly increased in the model group (vs control group P < 0.05) . Yangshen oral solution could inhibit the decrease of level of SOD and the the increase of level of MDA in aged rats in addition to improve the morphological structure of senminiferous tubule of testicle. Conclusion Yangshen oral solution can obviously improve the fuction of testis in ageing rats induced by D- galactose and delay the ageing progress of the rats .
Key words : Ginseng ; Epimedium brevicornum ; Rat ; Ageing model ;Testis ;SOD ;MDA
衰老是指生命过程中发生组织结构与生理功能的某些退行性变而逐渐趋向死亡的现象,可导致机体功能下降,适应力与抵抗力减退,个体存活力下降，具体表现在许多组织器官（睾丸）的变化和机体各方面生理功能的衰退。近年来,中外学者通过给大鼠注射大剂量D-半乳糖制作了亚急性衰老动物模型,并将此模型运用到衰老研究,特别是抗衰老中药的筛选研究。现代研究表明,D-半乳糖可导致多种组织细胞发生衰老样变化,它通过两个方面导致衰老,D-半乳糖是还原性糖,在机体醛糖还原酶的作用下,半乳糖生成半乳糖醇,不能进一步代谢,堆积在细胞中,最后导致细胞渗透压升高,细胞老化加速[1]；在反应中还生成大量的氧自由基,机体氧自由基含量升高,细胞衰老加速[2]。人参须为名贵中药材、五加科植物人参的细支根及须根,亦有益气活血之功效。有研究发现,人参的主要有效成分人参皂苷对老年大鼠有一定抗衰老作用[3],但由于价格昂贵,从人参中提取皂苷成本较高。人参须价格一般仅为人参的1/l0～1/2,而其总皂苷的含量甚至可以高于人参中皂苷的含量[4]。淫羊藿(别名仙灵脾，来源于小檗科淫羊藿属(Epimdium)的多种植物，具有补肾壮阳，益精起萎，强腰固冲作用。现代药理研究表明，淫羊藿能增加心脑血管血流量，促进造血功能、免疫功能及骨代谢，具有抗衰老、抗肿瘤等功效。本研究通过D-半乳糖制作亚急性衰老大鼠模型，并予羊参口服液治疗，检测睾丸脏器系数、睾丸组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD）和丙二醛(malondialedhyde, MDA)的含量，观察羊参口服液对衰老大鼠睾丸抗氧化指标及显微结构的影响，了解羊参口服液对大鼠睾丸的抗衰老作用，为其防治男性睾丸衰老提供药理学依据,现报道如下。
1 材料与方法
1.1 材料 选用SPF级的3月龄雄性SD大鼠共33只，体重（208±28）g。由广东省实验动物中心提供,广东省实验动物证编号:粤监证字2006A015,北京产大鼠维持期全价饲料饲养,自由摄食、摄水;人参须水提液（人参须,粉碎,用贝利微粉机进行微粉化，煎煮3次，每次2h，过滤,合并三次滤液,浓缩至100% (1g生药/ml)浓度）；淫羊藿提取液（淫羊藿粉碎,用贝利微粉机进行微粉化煎煮3次，每次2 h，过滤,合并三次滤液,浓缩,至100% (1g生药/ml)浓度）；羊参口服液（由人参须水提液和淫羊藿提取液按1：1配制而成）。MDA试剂盒、SOD试剂盒均购自南京建成生物工程研究所，D-半乳糖购自上海化学试剂二厂；AE240电子天平(梅特勒-托利多仪器公司上海分公司), Y-FL型荧光显微镜(Nikon Japan)，ELX800 型酶标仪（美国B IO-Tek公司)，JI-80-2B台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。
1.2 方法
1.2.1 动物分组 将33只大鼠随机分为3组：正常对照组13只、模型组、羊参口服液用药组各为10只。正常对照组大鼠用生理盐水皮下注射（0.5ml/100g/d，共90d），另外2组均用D-半乳糖连续皮下注射(100 mg／kg/d，共90d)制作亚急性衰老大鼠模型，同时羊参口服液用药组大鼠给予羊参口服液（1ml/100g）灌胃。
1.2.2 观察指标及方法 脏器系数、睾丸组织SOD活性和MDA含量和睾丸生精小管形态结构的观察按相关方法进行。
1.2.3 统计学处理 本研究中，正态分布的计量资料以均数±标准差(x±s)表示，两组间比较采用t检验，以双侧P值<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 大鼠体重与睾丸脏器系数 各组大鼠体重与睾丸脏器系数见表1。
表1 各组大鼠的体重与睾丸脏器系数（略）
△：与模型组相比，P<0.05. ★： 与正常组相比，P<0.05.■：与正常组相比，P<0.01。
由表1可见，模型组衰老大鼠的睾丸脏器系数低于正常对照组，且差异有统计学意义(P<0.05)，羊参口服液组大鼠睾丸的脏器系数高于模型组，且差异有统计学意义(P<0.05)。
2.2 大鼠睾丸组织SOD和MDA的含量 各组大鼠睾丸组织SOD和MDA的含量见表2。
表2 大鼠睾丸组织SOD和MDA的含量 （略）
△：与模型组相比，P<0.05。
由表2可见，与正常对照组大鼠相比，模型组衰老大鼠睾丸组织中SOD的含量明显降低，且差异有统计学意义(P<0.05)；羊参口服液组SOD的含量高于模型组，且差异有统计学意义(P<0.05)，说明羊参口服液可以明显抑制衰老大鼠睾丸组织SOD活性的下降。
与正常对照组大鼠相比，模型组衰老大鼠睾丸组织中MDA的含量明显升高，且差异有统计学意义(P<0.05)；羊参口服液组MDA的含量低于模型组，且差异有统计学意义(P<0.05)，说明羊参口服液可以明显抑制衰老大鼠睾丸组织MDA的含量的增高。
2.3 大鼠睾丸组织形态学观察 正常对照组大鼠睾丸组织见图1，模型组衰老大鼠睾丸组织见图2，羊参口服液组大鼠睾丸组织见图3：
图1 正常对照组（HE×100）（略）
图2 模型组（HE×100）（略）
图3 羊参口服液组（HE×100）（略）
由图1可见，正常对照组大鼠睾丸组织中生精小管界膜完整，无增厚及纤维化；生精小管内可见排列整齐的各级生精细胞和支持细胞，管腔内可见精子，间质细胞的数目和形态无异常改变。由图2可见，模型组衰老大鼠睾丸生精小管形态结构发生明显变化，生精小管基膜部分增厚，变得不完整；基膜内生精细胞的排列还基本正常，但生精细胞层数减少，细胞稀疏，由于上皮突入管腔或各级生精细胞脱落，使管腔变狭窄。支持细胞和间质细胞未见异常改变。这可能是D-半乳糖对大鼠睾丸产生毒性作用，使睾丸结构发生变化。由图3可见，羊参口服液组大鼠睾丸生精小管的形态结构较模型大鼠明显恢复，基膜趋于完整，生精细胞层数增多，但与正常大鼠睾丸相比，仍显生精细胞较稀疏。
3 讨论
D-半乳糖是目前公认的致衰老物质，D-半乳糖致衰老模型基于衰老的代谢学说而复制的衰老模型。该模型因造模周期短、模型稳定,被广泛应用于与衰老有关的各种实验研究，已成为抗氧化、延缓衰老药物及保健食品筛选的常用动物模型[5]。罗红梅等发现D-半乳糖可导致雄性大鼠原发性骨质疏松和血清睾酮含量降低以及睾丸结构发生改变[6，７]研究表明, 正常机体内SOD能清除自由基, 减少脂质过氧化物的产生。随着衰老的进程,机体抗氧化能力减弱, 清除自由基的启动因子-SOD活性降低,使自由基的链式反应受到抑制, 过多地氧化不饱和脂肪酸生成脂质过氧化物MDA。SOD含量减少或活性降低以及MDA含量的增高被认为与细胞的衰老、实质脏器功能减退乃至整个机体的衰老进程都有着密切的关系［8，9］。通过MDA 的测定可以反映机体内脂质过氧化的程度,间接地反映出细胞损伤的程度, SOD是机体内源性抗衰老物质,可以通过歧化作用清除体内氧自由基,从而减少脂质过氧化反应,维持生物膜结构及其功能, 其活性的高低间接反映了组织抗氧化的能力，SOD和MDA含量的测定被公认是抗衰老药物研究的重要指标之一[3]。
本实验通过在一定时间内连续注射D-半乳糖,使机体细胞内D-半乳糖浓度升高,引起细胞肿胀,代谢紊乱,破坏并消耗机体抗氧化防御系统,使自由基脂质过氧化反应加剧,过氧化脂质增多,各器官系统功能减退,出现与自然衰老相似的生理生化改变。本实验结果显示：模型组大鼠睾丸的形态结构发生明显变化，睾丸组织中SOD含量低于正常对照组、MDA的含量高于正常对照组，表现出明显的衰老特征，说明本研究大鼠的亚急性衰老模型造模成功。羊参口服液用药组睾丸的形态结构趋于恢复，睾丸组织中SOD含量高于模型组，MDA的含量低于模型组，说明羊参口服液可以通过提高睾丸SOD 活性和降低MDA含量而提高整个机体的抗氧化能力,维持自由基代谢的平衡, 减少脂质过氧化， 从而有效地抑制由细胞氧化诱导的细胞凋亡,显著改善或调整衰老细胞的新陈代谢，延缓衰老的进程，可作为保健制品的原料,具有广阔的开发利用前景。
【参考文献】
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［6］ 罗红梅,崔燎,吴铁,等.D-半乳糖对雄性大师腰椎骨密度和血清睾酮含量的影响［J］.中国临床药理学与治疗学，2005，Jun;10(6):670~2.
［7］ 罗红梅,崔燎,吴铁.等.D-半乳糖致雄性大鼠骨和睾丸微细结构的变化.中国新医药.2004，3(2):15~7.
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［9］ Inal ME, Kanbak G, Sunal E. Antioxidant enzyme activities and malondialdehyde levels related to aging.Clin Chim Acta 2001;305(1-2):75~80.
作者单位：