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【摘要】 目的 探讨冠心病患者血浆sOX40L和血清基质金属蛋白酶-9（MMP-9）变化水平及其与动脉粥样硬化易损斑块的关系。 方法 采用酶联免疫吸附法检测sOX40L、MMP-9。所有患者均行冠状动脉造影,计算冠状动脉病变形态积分并与sOX40L，MMP-9水平进行相关分析。 结果 急性冠状动脉综合征(ACS)组sOX40L及MMP-9水平显著高于稳定型心绞痛(SAP) 组和正常组(P<0.05)，而后两组间差异无统计学意义(P>0.05);ACS 组冠状动脉狭窄病变形态积分明显高于SAP 组和正常组(P<0.05)，后两组间病变积分差异无统计学意义(P>0.05);ACS 组sOX40L及MMP-9水平均与冠状动脉造影狭窄病变形态积分有明显相关性(P<0.05)。 结论 冠心病患者sOX40L及MMP-9水平升高可能提示斑块不稳定，可有效判断冠状动脉病变程度预测急性冠状动脉事件的发生。
【关键词】 急性冠脉综合征； sOX40L；基质金属蛋白酶-9
Significance of determination of sOX40L and matrix metalloproteinases-9 in patients with coronary artery disease.
ZHANG Hao, REN Guo-qing WANG Yi-bin.
(Department of Cardiology, Jiangbin Hospital Affiliated to Jiangsu University, Zhenjiang 212001, Jiangsu , P. R.China)
Abstract: Objective To explore the relationship between sOX40L, MMP-9 and stability of coronary atherosclerotic plaque in patients with coronary heart disease (CHD). Methods The morphology of plasma sOX40L and MMP-9 were determined with ELISA.. All patients were identified with coronary angiography (CAG) . All coronary stenoses with ≥ 50% diameter reduction were assessed by angiographic coronary stenosis morphology. Results (1) the level of serum sOX40L and MMP-9 in ACS group were significantly higher than SA and control groups ( P < 0.05) . But there was no significant difference between SA group and control group( P>0.05) ;(2) the score of angiography morphology of coronary lesions in ACS group was significantly higher than that of SA and control groups ( P < 0.05). But there were no significant difference between SAP group and control group ( P >0.05);(3) the levels of sOX40L and MMP-9 were correlated with the coronary severity scores (r1 =0.52 p<0.05, r2 =0.41 p<0.05).(4) Correlation analysis suggested the levels of sOX40L were positively correlated with MMP-9 (p<0.05). Conclusion The elevated levels of serum sOX40L, MMP-9 in ACS suggested that they may enhance the inflammation , aggravate the development of atherosclerosis and mediate the plaque destabilization . They can be served as a valuable marker for evaluating the degree of coronary artery pathology and forecasting clinical risk in ACS.
Key words: Acute coronary syndrome; sOX40L ; Matrix metalloproteinases-9
冠心病是一种慢性炎症性疾病，冠状动脉内不稳定粥样斑块，即易损斑块的纤维帽破裂、继发血栓形成是引起急性冠脉综合征的主要发病机制[1]。因此，揭示炎症及炎症因子与ACS的关系，判断不稳定斑块,预测急性冠状动脉事件的发生是当今研究的热点。OX40L是目前在动物实验中证据最充分的动脉粥样硬化易感基因。有研究报道，冠心病尤其是ACS患者血浆中sOX40L水平较正常人升高。人群中的基因多态性研究也表明OX40L 与急性心肌梗死和冠心病相关[2,3]。但对OX40L与冠心病不稳定斑块及急性冠状动脉事件的关系未见报道。本研究观察不同类型冠心病患者血浆中sOX40L和MMP-9水平及其与冠状动脉狭窄病变形态积分的关系。旨在进一步明确sOX40L与MMP-9在冠状动脉病变发生、发展及急性冠状动脉事件预测中的临床意义。
1 资料与方法
1.1 对象 收集2007年06月～2008年6月江苏大学附属医院心内科收治的冠心病患者。其中ACS组80例、男45例，女35例，平均年龄(62.7±6.5)岁；稳定性心绞痛(SAP)组60例 ，男35例，女25例，平均年龄(61.5±3.6)岁；对照组为经CAG排除CHD32例，男20例，女12例，平均年龄(58.2±4.7)岁。入院后收集患者一般资料，均行相关辅助检查，并抽血待测。以上病例均行冠脉造影检查明确，并均排除细菌、病毒感染；哮喘，肿瘤、心脏瓣膜病、心肌病、心功能不全、周围血管疾病或血栓性疾病、免疫结缔组织疾病、严重贫血、出血性疾病和严重心、肝、肾功能不全以及合并脑卒中，高热者。近期使用过抗炎溶栓等药物治疗或3个月内有手术、创伤史者。
1.2 方法
1.2.1 标本处理 AMI病人入院即刻取血，余病人取清晨空腹肘静脉血10ml入乙二胺四乙酸( EDTA)抗凝管,摇匀,3000 r/min离心10min,分离上清血浆待测。同时采静脉血测定血脂，肝肾功能等生化指标及常规血细胞分析。
1.2.2 sOX40L测定 采用测定血浆sOX40L，试剂盒由美国ADL公司出品,其检测灵敏度为1.0pg/ml。
1.2.3 MMP-9测定 采用酶联免疫吸附法(ELISA)，试剂盒购于英国Bio-source公司出品。
1.2.4 所有患者住院期间均行冠状动脉造影检查,多体位投照由两位经验丰富的副主任医师将狭窄程度≥50 %并<100%的冠状动脉斑块进行形态学分型,病变分为3型[4-5]。Ⅰ型、Ⅲ型记1分、Ⅱ型记3 分。将各病变分数累加即为其冠状动脉狭窄病变形态积分。
1.3 统计学方法 采用SPSS11. 0统计分析软件包进行统计学处理。计量资料用均数±标准差(x±S)表示,组间均数差异的显著性分析采用单因素方差分析检验(one- way ANONA) ,并用pearson相关分析方法来分析两组数据间的相关性。
2 结果
2.1 一般资料 三组之间年龄、性别、冠心病危险因素，肝肾功能和大部分服用药物差异均无统计学意义(P＞0.05),见表1。
表1 三组病例一般资料比较（略）
2.2 sOX40L、MMP-9和冠状动脉病变形态积分 ACS组显著高于SAP组以及对照组,有统计学意义(P<0.05) ;二者在SAP组与对照组间比较有升高趋势,但未达显著性差异(P>0.05) 。CS 组冠状动脉狭窄病变形态积分明显高于SAP组和正常组,差异有统计学意义(P< 0.05)。
表2 三组病例sOX40L、MMP-9、冠状动脉狭窄病变形态积分比较（略）
* 与SA组及对照组比较P<0.01 ；△与对照组比较P<0.05
2.3 sOX40L及MMP-9与冠状动脉病变形态积分相关性分析 sOX40L与冠状动脉狭窄病变形态积分呈明显正相关（r = 0.52,P<0.01，见图1）；MMP-9与冠状动脉狭窄病变形态积分呈明显正相关(r=0.41,P<0.01)；sOX40L与MMP-9呈明显正相关(r=0.46,P<0.01，见图2)
图1 sOX40L与冠脉狡窄病变形态积分关系（略）
图2 MMP-9相关性（略）
3 讨论
目前认为, 冠脉病变的严重程度主要由斑块的稳定性而非大小决定，ACS发生的病理基础是动脉粥样斑块的稳定性下降,而炎症是易损斑块的最显著特征之一。浸润的炎细胞以巨噬细胞，泡沫细胞，激活的T淋巴细居多。在不稳定斑块中常可见与平滑肌细胞，巨噬细胞，T淋巴细胞有关的基质降解增加。MMPs 可降解纤维帽使其变薄、破裂。进而脂质核心中的大量促凝物质与血流接触而形成血栓导致ACS的发生。已有研究证实MMPs在UA和AMI患者显著增高[6]。在本研究发现ACS组患者血清MMP-9水平明显高于对照组,且和冠状动脉狭窄病变形态积分显著正相关。说明MMP-9活性与斑块不稳定性关系密切。
OX40L又称CD252、TNFSF4,系OX40的配体，属肿瘤坏死因子(TNF)家族成员，为Ⅱ型跨膜糖蛋白;几乎在所有参与动脉粥样硬化的细胞中(内皮细胞、淋巴细胞、巨噬细胞以及平滑肌细胞)都有表达，而且在炎症组织中也有较多的表达[7]。OX40与OX40L结合后,通过抑制细胞凋亡,对于促进活化后T 细胞的存活、增殖起到了重要的作用[8] 。国外研究表明，OX40/OX40L系统在动脉粥样硬化的发生发展中起重要作用[2，9]。然而关于OX40/OX40L系统在ACS 中的作用资料甚少。本研究发现ACS组患者血清sOX40L与MMP-9水平明显高于对照组,相关分析显示，sOX40L与MMP-9水平呈显著正相关，并且血浆sOX40L及MMP-9水平与冠状动脉狭窄病变形态积分显著正相关。国内有学者证实研究已经证实血浆sOX40L 与冠脉危险分数没有相关性[10]。提示血清sOX40L和MMP-9水平高低和冠脉斑块的稳定性相关。ACS的发生与冠状动脉狭窄程度无关,而是与斑块稳定性和继发血栓的形成密切相关。推测其原因可能是OX40/OX40L激活了淋巴细胞、巨噬细胞，一方面通过细胞内信号转导促进MMP-9的合成，另一方面促进T细胞的产生多种细胞因子及炎症趋化因子从而加速炎症反应导致不稳定斑块破裂。
最近，严金川等研究发现[11]，OX40L 在ACS患者血小板上表达明显高于SAP及正常人，并且与血清MMP-9水平正相关。表明OX40-OX40L可以通过激活炎症反应和促凝血途径，促使斑块的破裂和血栓的形成。因此，推测 OX40/OX40L共刺激信号通路可能和MMP-9共同参与并放大了斑块内的炎症反应，介导斑块由稳定向不稳定转变，从而诱发ACS的发生。
综上所述, ACS患者血浆sOX40L 、MMP-9水平与ACS不稳定斑块的的发生、发展有关。0X40 /OX40L系统在不稳定斑块的破裂中可能是一个中心机制。sOX40L 可发展为新的炎症指标来早期预测易损斑块。
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