DCSI对大鼠脑缺血再灌注损伤后能量代谢的影响

【摘要】  目的：研究小牛血清去蛋白注射液(DCSI)预处理对于大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)后能量代谢的影响。方法：将40只大鼠随机分为4组，每组大鼠伤前腹腔注射DCSI或生理盐水连续7d后制造大鼠脑缺血再灌注损伤模型。伤后90min取样，测脑组织中ATP、ADP 及AMP 含量并计算能荷（EC）。结果：与假手术（SHAM）组相比，CIRI组脑组织ATP、ADP、AMP含量及能荷下降，而DCSI逆转上述变化，且高剂量作用更加明显。结论：DCSI可以改善大鼠脑缺血再灌注损伤后的能量代谢障碍。

【关键词】  小牛血清去蛋白注射液；脑缺血再灌注损伤；能量代谢

本研究使用小牛血清去蛋白注射液(DCSI)对大鼠脑缺血进行预处理，观察再灌注损伤(CIRI)后能量代谢变化，现报告如下：

　　1  材料与方法

　　1.1  材料及器械 

　　SD大鼠40只，毛细管区带电泳仪、Modular全自动生化分析仪、紫外分光光度仪。DCSI；ATP、ADP及AMP分析纯试剂。

　　1.2 实验方法

　　1.2.1 实验分组及伤前给药 

　　将40只大鼠随机分为4组：假手术(SHAM)组、CIRI组、DCSI高和低剂量组。各组大鼠分别给予腹腔注射等容积药物：DCSI高剂量组和低剂量组分别给予DCSI 60mg/kg和30mg/kg；SHAM组和CIRI组给予生理盐水，每日1次连续7d。

　　1.2.2 大鼠脑损伤模型的制备 

　　参照Longa线栓法制造大鼠CIRI模型。将大鼠麻醉、固定,颈正中切口，分离右侧颈总动脉直至颈内动脉分叉部；结扎颈外动脉，在结扎线近端剪一小口。采用直径0.23mm带线栓的尼龙丝线，从小口插入，线栓进入颈内动脉18～20mm，感觉有阻力时停止，结扎颈外动脉近心端，90min后抽出尼龙丝线18～20mm，将线尾埋在皮下；缝合切口。SHAM组大鼠只切开颈部皮肤并暴露颈动脉，不插入线栓。

　　1.2.3 样本的采集、制备及数据测定 

　　CIRI后90min将大鼠迅速断头取脑，于右侧大脑半球取约200mg脑组织，制成脑组织匀浆，采用毛细管区带电泳仪测定ATP、ADP、AMP含量。能荷值(EC) 按公式推算:EC=(ATP+ADP/2)/(ATP+ADP+AMP)。

　　1.3 统计学处理 

　　所有数据均以（±s）表示。采用SPSS14.0 for windows统计软件包进行Oneway-ANOVA分析，组间比较用SNK-q检验，P＜0.05代表差异具有显著性。

　　2 结果

    CIRI组脑组织ATP、ADP及AMP含量及EC值均低于SHAM组，DCSI低剂量组低于高剂量组，两者均高于CIRI组。各组间差别具有显著性（P均＜0.05），见表1。表1  各组大鼠脑组织中ATP、ADP和AMP含量及EC值(略）注：★ P＜0.05与A相比，▲P＜0.05与B组比，■P＜0.05与D组比

　　3 讨论

    CIRI以后，脑血流量减少、脑细胞缺血缺氧、线粒体能量代谢途径改变、大量自由基产生。以上结果必然会导致氧化磷酸化受阻，高能磷酸化合物形成减少［1］。充足的ATP
供应是离子泵得以正常运转的前提，Ca2+-Mg2+泵失灵所导致的细胞内Ca2+超载是许多原因引起细胞损害的“最后共同通路”［2］。本实验结果显示，反映能量代谢的几个指标ATP、ADP及AMP含量及EC值CIRI组均较SHAM组明显降低。
　　DCSI低剂量组比CIRI组有所提高，高剂量组更高。这说明DCSI能有效改善细胞的能量代谢，对大鼠脑CIRI具有保护作用。其作用机制可能为：①促进脑组织对氧的摄取和利用，激活有氧代谢途径。杨育红等［3］在缺氧再给氧的条件下培养心肌细胞，结果表明DCSI可明显增加细胞的存活率及波动频率。②促进糖的转运和利用。韩永卿等［4］在亚理想环境下培养心肌细胞，用液闪计数仪计数进入心肌细胞中D-［6-3H］葡萄糖的数量，结果发现DCSI组的液闪计数明显高于对照组，说明DCSI可以促进心肌细胞对葡萄糖的摄取。研究表明，DCSI中含有磷酸肌醇寡糖(IPOs)，它与胰岛素的第二信使肌醇磷酸聚糖有许多共同点，故可激活细胞膜上的磷脂酶C，后者是磷脂酰肌醇循环的关键酶，而磷脂酰肌醇循环是调整GluT的重要信号传递系统。IPOs正是通过这种拟胰岛素效应而激活胞浆膜上的GluT, 进而促进葡萄糖由外周向细胞内转运。

【参考文献】
  ［1］Lifshitz J，Friberg H，Neumar，RW,et al.Structural and functional damage sustained by mitochondria following traumatic brain injury in the rat:evidence for differentially sensitive populations in the cortex and Hippocampus［J］.Cereb Blood Flow Metab，2003,23(2):219-231.

　　［2］Bano D,Nicotera P.Ca2+ signals and neuronal death in brain ischemia［J］.Stroke，2007,38(Suppl 2):674-676.

　　［3］杨育红,娄凤霞,王洪新.小牛血去蛋白提取物注射液对培养的心肌细胞缺氧再给氧损伤的保护作用［J］.中国临床药理学与治疗学，2004,9(4):434-437.

　　［4］韩永卿,于洪儒,王洪新.小牛血去蛋白提取物对体外培养心肌细胞的增生作用［J］.中国生化药物杂志，2003,24(5):232-235.

作者单位：盘锦市第二人民医院神经外科，辽宁 盘锦 124000