电针对睾丸功能损害肾阳虚型大鼠作用的实验研究

关键词 睾丸/电针效应 肾阳虚/电针疗法 动物/实验研究

男性不育症，是临床难治疾病之一，且有逐年增多的趋势。治疗男性不育症，已成为世界性普遍重视的课题。对于睾丸生精功能障碍所致的男性不育症，祖国医学认为:肾阳虚，精气衰少，“阳虚无子”是造成男性不育症最常见的原因之一。有资料显示，针灸治疗男性不育症确有疗效，且疗效快捷，安全无害，历代针灸医家也积累了许多宝贵的经验。为探求电针治疗男性不育症的作用机制，为其推广应用提供客观实验依据，拟对笔者导师姚康义教授治疗男性不育症的临床经验要穴关元和中极穴进行实验性综合评价。

1 材料与方法

1.1 动物分组与模型建立方法 选取体重250g左右的60只二月龄Wistar系健康雄性大鼠。首选进行称重标号，然后采用完全随机方法将其分为四级，每组15只;再采用占阄法决定哪一组为正常组，哪三组进行造模。造模后，再用占阄法定出模型Ⅰ组（作治疗前对照），模型Ⅱ组（作治疗后对照），电针治疗组（作电针治疗）。将要造模的三组大白鼠均按腺嘌呤30mg/100g体重的剂量，将腺嘌呤与1.5ml蒸馏水混匀后，以灌胃法灌喂大鼠，每日1次，连续30日;正常组大鼠则灌喂等量蒸馏水作对照 ^［1，2］ 。

1.2 治疗方法 取穴方法:由剑突软骨尖至耻骨联合上缘中点的连线之中点为神阙穴，然后仿人类任脉经穴分寸，将神阙穴与大鼠耻骨联合上缘中点的连线分为5寸，大鼠的神阙穴下3寸为关元穴，下4寸为中极穴 ^［3］ 。电针治疗方法，由于大鼠的电针关元和中极穴相距较近，故每次取关元和中极穴作为一电极，另一电极连在大鼠阴囊尖部。定取穴位后，用图钉型揿针刺入二穴位中，用G-6805电针仪给予电刺激，每次15min，强度以肢体发生轻微抖动为度，频率为3～4Hz连续波 ^［4］ 。每日上午治疗1次，10日为1疗程，间歇5日再进行下一疗程，共治疗2个疗程。

1.3 标本采取时间和方法 造模30天后，对四组大鼠分别称重并记录。用抽签法定出每组10只大鼠，使每组例数相同，便于齐同对比，便于统计运算。在电针治疗前将正常组和模型Ⅰ组采取标本并处死。在电针治疗两个疗程（1个月）后，将电针组和模型Ⅱ组采取标本并处死。取血，用颈静脉取血法，而后静置、离心。吸取血清并作标记，低温保存，备查。同时，用抽签法决定摘取大鼠一侧附睾和睾丸;取附睾剪碎后溶于2ml生理盐水中，立即送检，其间温度应保持在35℃左右，以保证精子计数、活率和活力检测的准备性和可靠性。取睾丸测其弹性、重量和容积后，将其置于Bouins液中固定送检。

1.4 观察指标及其方法 （1）症状体征、体重:在造模和治疗期间观察各组大鼠的神态、活动、对外界反应，毛色、肥瘦、体重等等的变化;在造模后和治疗后分别称其体重并作记录。称重用电子天平，重量单位是g。（2）睾丸的弹性:用抽签法摘取左侧睾丸后，用压陷式眼压计测睾丸的压力，并将其换算成kPa压力单位。（3）睾丸的重量:测完睾丸的弹性后，随即用架盘药物天平称取睾丸的重量，单位是g。（4）睾丸的容积:测完重量后，随即将睾丸放入盛有生理盐水的广口小量桶中，读出水面上升的刻度，即为睾丸的容积，单位是ml。（5）睾丸的组织学检查，将测完容积的睾丸取出后，即放入盛有Bouin’s液的小瓶子中进行固定。注意:将睾丸白膜用刀片切开数个刀口，以便固定液能够渗透到睾丸组织中去;固定液不少于组织块总体积的4倍;固定时间为24～48h。然后，水洗、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、HE染色、封固。用光学显微镜观察睾丸曲细精管形态与精子发生状态，对睾丸的生精功能进行组织学评价。（6）附睾中精子的数量，活率与活力:将大鼠处死后，迅速解剖剥取左侧附睾，剪碎溶于2ml生理盐水中。参照人类精液常规分析方法。精子的数量，用细胞计数器法进行精子计数，最后算出每ml中的精子数，单位是10 7 /ml。精子的活率，用活精子和死精子的染色法，数200个精子测出活精子百分率（%）。精子的活力;采用精子穿透试验，测定精子前向运动的速度。方法是:用一根长10cm，直径1.2mm的毛细玻璃管，管内充满等渗葡萄糖液，将毛细玻璃管置于底部含有一滴精液的玻璃试管内，并保留在恒温器内30min，然后，将玻璃管置于显微镜下观察精子前向运动的最远距离，即为精子在30min内的运动速度，单位是mm/h。（7）内分泌激素:取血清，用放射免疫法（RIA）测定睾丸酮（T）促卵泡生长激素（FSH），促黄体生成激素（LH）的水平。

1.5 统计学处理方法 本实验计量资料结果均用^ˉx±s表示。体重指标的显著性检验;建模后三组动物与建模前的体重对比，电针组治疗后与治疗前的体重对比，用配对资料t检验，电针组与模型Ⅱ组体重对比，用成组资料的t检验。睾丸的弹性，重量和容积指标;附睾精子的数量、活率和活力指标;血浆T、LH、FSH等等指标，每一指标组间的显著性检验用F检验;每一指标各组间的两两比较用q检验。显著性水准及结果的判断，按通用的假设检验标准:（1）P>0.05，表示差异无显著性;（2）0.01<P<0.05，表示差异有显著性;（3）P<0.01，表示差异有非常显著性。

2 观察结果

2.1 各组症状体征体重的比较 建模动物自灌喂腺嘌呤第5～7天起，出现恶寒卧，活动减少，精神萎靡，反应迟钝，体毛干枯不齐、稀疏、脱落、消瘦、体重减轻，尾部苍白等等一系列耗竭虚损症状，诸症随喂药日数的增加而加剧。

表1 各组大鼠体重（g）变化与比较

注:建模后的三组与建模前对比;电针组治疗后与治疗前对比;电针组与模型Ⅱ组对比: ˇˇ P<0.05， ˇ P<0.01。

各组体重变化与比较见表1。喂药30天后除正常组大鼠的神态如常，体重有所增加外，其余各组大鼠体重均比建模前明显下降（P<0.05）;治疗后，电针组大鼠的神态明显改善，体重比治疗前显著增加（P<0.01）。模型Ⅱ组大鼠神态与体重的恢复程度远远不如电针组，两组间体重的差异有非常显著性（P<0.01）。

2.2 各组睾丸的弹性、重量和容积的比较 各组大鼠睾丸的弹性、重量和容积测量结果比较见表2。

表2 各组睾丸的弹性、重量、容积的结果比较

注:模型Ⅰ组与正常组对比，电针组与模型Ⅱ组对比: △ P>0.05， ˇ P<0.05， ˇˇ P<0.01。

由表2可以看出，模型Ⅰ组睾丸的弹性、重量、容积均比正常组显著降低（P<0.01和P<0.05）;电针组睾丸的弹性，容积比模型Ⅱ组显著性提高（P<0.01和P<0.05），电针组睾丸的重量和模型Ⅱ组对比差异无显著性（P>0.05）。

2.3 各组睾丸组织学观察比较 模型Ⅰ组睾丸呈萎缩状态，大部分曲细精管退变严重，无细胞可见;生殖上皮变薄，管腔内精子数目明显减少。正常组睾丸组织学未见异常，曲细精管内精子发生完全，各级生精细胞排列规整，处在不 同发育阶段的精细胞沿壁排列成层，精原细胞紧贴曲细精管基膜部最内层，越是分裂后阶段的越接受管腔，生成的精子就脱落进入管腔。

电针组睾丸组织近似正常，大部分曲细精管内精子发生良好，精子数目稍减少，部分生殖上皮稍减少，生殖上皮较模型Ⅱ组丰厚，排列稍混乱。模型Ⅱ组睾丸组织萎缩及曲细精管退化的程度较模型Ⅰ组为轻，精子数目中度减少，极个别曲细精子管退变，生殖上皮缺如。各组睾丸组织切片见图1～4。

图1 正常组睾丸组织切片

图2 模型Ⅰ组睾丸组织切片

图3 电针组睾丸组织切片

2.4 精子的数量、活率与活力 各组附睾中精子的数量（N），精子活率（M）与精子运动速度（V）的检测结果与比较见表3。图4 模型Ⅱ组睾丸组织切片图

表3 精子数量（N）活率（M）和运动速度（V）的结果比较

注:模型Ⅰ组与正常组对比，电针组与模型Ⅱ组对比; ˇˇ P<0.01。

由表3可以看出，模型Ⅰ组的N、M、V均比正常组显著降低（P<0.01）;电针组N、M、V均比模型Ⅱ组显著提高（P<0.01）。