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【摘要】 目的 评价辣椒素体外抗氧化活性。方法 测定其对大鼠肝匀浆脂质过氧化、超氧化物歧化酶（SOD）、1，1-二苯基-2-苦基肼（DPPH）自由基的影响。结果 辣椒素抑制大鼠肝匀浆脂质过氧化水平，IC 50 为34.6μg/ml，阳性对照叔丁基甲氧基苯酚（BHA）及维生素E（VE）IC 50 分别为40.4、127.2μg/ml。辣椒素提高SOD活性，EC 50 为88.6μg/ml，而BHA EC 50 为76.4μg/ml。另外，辣椒素具有一定的清除DPPH自由基的作用，EC 50 为669.9μg/ml。BHA EC 50 为19.9μg/ml。结论 辣椒素通过提高抗氧化酶SOD活性及质子供体作用，体外抑制脂质过氧化，具有体外抗氧化活性。
关键词 辣椒素 抗氧化 大鼠 脂质过氧化 超氧化物歧化酶
Free radical scavenging effect of capsaicin Yang Weimin，Liu Jikai，Xiang Zhimin，et al.
Yunnan Pharmacological Laboratories of Natural Products，Kunming Medical College，Kunming650031.
【Abstract】 Objective To investigate the free radical scavenging activity of capsaicin in vitro.Methods The rat liver homogenate lipid peroxidation inhibitory activity，superoxide dismutase（SOD）activity，and1，1-dipheny-2-picrylhydrazyl（DPPH）free radical scavenging activity were determined.Results Capsaicin inhibited lipid peroxiˉdation in rat liver homogenate with IC 50 values of34.6μg/ml compared with butylated hydroxyanisole（BHA，IC 50 40.4 μg/ml）and vitamine E（VE，IC 50 127.2μg/ml）.Capsaicin increased SOD activity with EC 50 values of88.6μg/ml and BHA（EC 50 76.4μg/ml）as control.It scavenged DPPH radical scavenging with EC 50 values of669.9μg/ml compared with control BHA（EC 50 19.9μg/ml）.Conclusion The results suggested the capsaicin possessed free radical scavengˉing activity mainly due to its effect on the antioxidant enzyme.
Key words capsaicin antioxidative activity ratlipid peroxidation superoxide dismutase 自由基（Free radical，FR）是指带有不配对电子的分子、原子团或基团，包括氧自由基、氮自由基等，其中与医学关系密切的是氧自由基（OFR，也称活性氧），主要包括超氧阴离子和羟自由基。由于体内获得电子的过程大多数发生在氧原子或氧分子上，因此在代谢过程中产生的自由基多数为氧自由基 ［1，2］ 。
FR检测方法分直接检测法与间接检测法。直接检测法目前只有电子自旋共振（ESR）技术，但仪器昂贵，应用受限。目前一般通过检测FR的相关酶（如SOD、CAT、GSH-Px）或FR代谢产物（如脂质过氧化产物MDA）间接检测FR水平 ［3］ 。自由基与众多不同类型疾病病理过程有关，例如心肌缺血、脑缺血、动脉粥样硬化、糖尿病、炎症、肿瘤初始期及衰老等 ［1～3］ 。这些疾病可被自由基清除剂等抗氧化物所改善，因此抗氧化物质一直受到关注 ［4～6］ 。
辣椒素（capsaicin）是辣椒中产生刺激性辣味的活性成分，1846年被化学分离，近年被克隆的辣椒素受体被命名为香草类物质受体（vanilloid receptors，VR）.近数十年来，辣椒素制剂一直被用于治疗神经病理性疼痛或痒、炎症及膀胱反射亢进等疾患 ［7］ 。本文重点研究辣椒素的抗氧化活性。
1 材料与方法
1.1 动物 雌性SD大鼠，体重200～250g，由昆明医学院动物科提供。
1.2 药物 辣椒素、硫代巴比妥酸（TBA）、1，1-二苯基-2-苦基肼（DPPH）、黄嘌呤、黄嘌呤氧化酶由Sigma公司提供。其他试剂均为分
析纯级。辣椒素溶于二甲亚砜（DMSO）中。
1.3 大鼠肝匀浆制备 参照文献制备大鼠肝匀浆 ［8］ 。肝脏取出后迅速置于冰生理盐水（NS）中冷存，将其经门静脉灌注冰NS清洗，然后用匀浆器制备匀浆，1g肝组织加入9ml0.86%NaCl溶液。经3000g、10min离心后取上清液即为10%大鼠肝匀浆。
1.4 脂质过氧化水平测定 采用改进硫代巴比妥酸法（TBA法）测定脂质过氧化代谢产物丙二醛（MDA），从而评价脂质过氧化反应水平 ［8，9］ 。在试管中加入6mM抗坏血酸（60μl），5%大鼠肝匀浆（4.0mg蛋白质/ml，600μl），30μl受试药溶液，通过加入4mMFeCl 3 （30μl）启动脂质过氧化反应。反应液置于37℃恒温水浴30min，加入20%三氟醋酸（TCA，500μl）终止反应。然后经3500g、10min离心，取出上清液（1ml），加入0.67%（W/V）TBA（500μl）混合，于沸水中加热10min。冷却后，用紫外-可见分光光度计测定532nm波长下吸收度值。脂质过氧化抑制率按下列公式计算:［1-（T-B）/（C-B）］×100%，其中T、C、B分别为受试药管、溶媒对照管及未经脂质过氧化反应（反应零点）对照管吸收度值。
1.5 SOD活性测定 采用黄嘌呤/黄嘌呤氧化酶系统产生超氧阴离子，氧化羟胺产生亚硝酸盐，后者在对氨基苯磺酸及甲萘胺作用下呈紫红色 ［10，11］ 。在试管中加入下列试剂:50mM磷酸盐缓冲液（pH7.8，250μl），纯水（100μl），10mM盐酸羟胺（25μl），7.5mM黄嘌呤（25μl），23.4U/ml黄嘌呤氧化酶（25μl），1%肝匀浆（0.8mg蛋白质/ml，10μl）及25μl受试药。经37℃恒温水浴30min，加入3.3g/L对氨基苯磺酸（250μl）及10g/L甲萘胺（250μl）。测定550nm波长下吸收度值。SOD活性按下列公式计算:［1-（T-B）/（C-B）］×100%，其中T、C、B分别为受试药管、溶媒对照管及反应零点对照管吸收度值。
1.6 DPPH自由基清除活性测定 参照文献报道方法 ［12，13］ ，于试管中加入受试药DMSO溶液（20μl）及150μM DPPH乙醇溶液（980μl），混匀。于室温下放置30min后测定517nm波长下吸收度值。DPPH自由基清除活性按下列公式计算:［1-（Ai-Aj）/Ac］×100%，其中Ai、Aj、Ac分别为受试药管、受试药对照管（含受试药及乙醇，但不含DPPH）及DPPH对照管（含DPPH及DMSO，但不含受试药）吸收度值。1.7 统计学处理 数据表示为ˉx±s。IC 50 及EC 50 按非线性回归方法计算。
2 实验结果
2.1 辣椒素抑制大鼠肝匀浆脂质过氧化反应 辣椒素抑制大鼠肝匀浆中非酶性Fe 2+ -抗坏血酸系统诱导的脂质过氧化反应，IC 50 及95%可信限为34.6（13.9～86.5）μg/ml，而阳性对照BHA及VE IC 50 及95%可信限为40.4（27.1～58.9）、127.2（92.2～157.7）μg/ml（见图1）。
图1 辣椒素对大鼠肝匀浆脂质量过氧化反应的抑制作用
注:数据表示为ˉx±s，n=6。（下同）图2 辣椒素增强大鼠肝匀浆SOD酶活性。 2.2 辣椒素增强大鼠肝匀浆SOD酶活性 辣椒素具有提高SOD活性，清除超氧阴离子自由基作用，其EC 50 及95%可信限为88.6（77.9～100.8）μg/ml，而BHA（阳性对照）为76.4（68.4～85.4）μg/ml（见图2）。
2.3 辣椒素清除DPPH自由基作用 辣椒素具有一定的DPPH自由基清除作用，其EC 50 及95%可信限为669.9（530.2～743.6）μg/ml，而阳性对照BHA为19.9（9.8～33.3）μg/ml（见图3）。DPPH自由基清除属自由基质子型清除，是众多抗氧化机制中的一种。图3 辣椒素清除DPPH自由基活性。
3 结论与讨论
本研究证明辣椒素具有较强的抑制脂质过氧化活性，增强SOD活性，以及一定的DPPH自由基清除活性。结果提示辣椒素通过提高抗氧化酶活性及质子-供体机制，从而具有清除自由基的抗氧化活性。而辣椒素的抗氧化作用可能与其在动物体内的生物活性有关。
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作者单位:1650031昆明医学院云南省天然药物药理重点实验室 2650204云南昆明中国科学院昆明植物所