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【摘要】 目的 了解广州地区各类人群的SARS病毒抗体的检出情况及SARS患者抗体产生的规律。 方法 用酶联免疫吸附试验（ELISA）对各类人群的血清进行SARS病毒抗体的检测，并对45例SARS患者追踪1年半。 结果 SARS病毒抗体阳性率分别是:临床确诊SARS患者44.5%（105/236）;临床SARS疑似病例和发热查因的其他病例7.4%（10/135）;正常体检人群1.0%（1/105）;其他疾病2.5%（2/80）;医院工作人员5.7%（29/505）。对45例SARS患者追踪1年半，SARS-IgG抗体的滴度仍维持较高的水平。5例SARS患者血清及她们的新生婴儿脐血清的SARS-IgG的滴度非常接近，出生3个月后，母亲SARS-IgG的滴度还维持在高水平，而婴儿的滴度下降较快，2例呈弱阳性，4例呈阴性。 结论 SARS病毒IgM抗体消失较早，发病60天后检测不到，是近期感染的标志。IgG持续时间较长，1年半仍维持较高的水平，是近期或曾经感染的标志。暂未发现母婴垂直传播病例。医院的SARS感染率远高于正常人群，且可能存在隐性感染。
关键词 SARS病毒 酶联免疫吸附试验 血清 抗体 流行病学
The detection and trace to serum antibodies of the patients infected with SARS Coronavirus or clinical probable cases and normal populations in the hospital
Tan Yizhou，Tang Yangbo，Liu Lier，et al.
Clinical Laboratory，The Eighth People's Hospital of Guangzhou，Guangzhou510060.
【Abstract】 Objective To investigate the detection instance of SARS Coronavirus antibodies（SARS-IgG-Ab and/or IgM-Ab）in different population groups and the production rules of SARS Coronavirus antibodies from SARS patients in Guangzhou area.Methods The serum SARS-IgG-Ab and IgM-Ab in different population groups were detected by enzyme linked immunoadsorbed assay（ELISA），and the SARS-IgG-Ab of45SARS pa-tients was traced for a half past year.Results The positive rate of SARS-IgG-Ab and IgM-Ab in different popu-lation groups were embraced:105/236of clinical probable cases;10/135of suspect cases and other fever cases;1/105of normal populations;2/80of other diseases;29/505of medical staff.The SARS-IgG-Ab of45patients traced for a half pass year and were found that concentration of the antibody still stayed at continuously high level.The concentration of SARS-IgG-Ab in5SARS mothers was very closed to their neonates when they were just born.However，the concentration of SARS-IgG-Ab in their mothers still stayed at high level，but the level of antibody in the babies went back quickly，2of them were weak positive and4of them were negative after3months.Conclusion SARS-IgM-Ab disappears more earlier，60days after the disease taken bad it can not be detected，and it may be the marker of earlier infection.The duration of SARS-IgG-Ab is long，and SARS-IgG-Ab is implied the marker of recent or once infection.The cases of vertical transmission from mother to infant are not found.The infec-tion rate in medical staff is very higher than that in common population，and there maybe are silent infection cases in the hospital.
Key words SARS Coronavirus enzyme linked immunoadsorbed assay serum antibody epidemiology
在临床上，有多种病原体可以引起肺炎等呼吸道疾病，较常见的有细菌、病毒、衣原体、支原体、立克次体等，一种新型冠状病毒被确认是引起传染性非典型肺炎即严重急性呼吸道综合征（severe acute respiratory syndrome，SARS）的病原 ［1］ 。广东是最早出现SARS病例的地区，而广州是发病率较高的地区之一。我院作为广州地区SARS患者的主要收治医院，故集中了较多的SARS患者和疑似病例。为了解广州地区各类人群的SARS病毒的感染情况，我们对1061例各类人群1505份血清进行了检测及追踪，以了解及评估广州地区各类人群对该病毒的免疫性与易感性，并为SARS可能的再次传播提供血清流行病学线索。
1 材料与方法
1.1 研究对象与样品收集 以广州市第八人民医院在2003年2～6月收治病例、医院工作人员及正常体检人群为研究对象，其中SARS患者236例，疑似病例和有发热症状的其他病例135例，正常体检人群105例，其他疾病80例，医院工作人员505例。SARS临床确诊病例、疑似病例诊断标准符合广东省传染性非典型肺炎临床诊断标准。追踪了5例怀孕中后期的SARS孕妇及她们的婴儿，孕妇年龄在22～25岁，患SARS时，怀孕5～7个月，并都在SARS病愈后才分娩。婴儿2男4女，有一对女婴为双胞胎。在婴儿出生时留取婴儿脐血清和母体血清作第一份血清，3个月左右留取婴儿及其母亲的血清作第二份血清。对45例SARS患者追踪18个月，静脉采血4ml，3000r/min离心3min后，分离血清置-70℃冰箱待测。
1.2 试剂、仪器 SARS-IgG和SARS-IgM的ELISA试剂盒由北京华大吉比爱生物技术有限公司提供。仪器:荷兰Alisei全自动酶免分析仪。
1.3 实验方法 ELISA实验方法如下:对照孔分别直接加入50μl阴、阳性对照，其余检测孔加入样品稀释液100μl/孔。加入待测样品10μl（IgM加入已用生理盐水稀释10倍的待测样品）混匀。37℃30min（IgM37℃60min）。洗板5次，拍干，分别加入相应的酶标抗体，37℃20min。洗板5次，拍干，每孔加入底物A、B液各50μl，37℃避光10min。每孔加入终止液50μl，以空白调零，450nm波长下检测OD值。
1.4 结果判断 >Cut off值为阳性，IgM Cut off值=0.11+阴性对照OD均值;IgG Cut off值=0.13+阴性对照OD均值。
1.5 统计学方法 以P<0.05评价数据统计差异的显著性。采用SPSS11.0数据统计软件，进行组间t检验作两两比较。
2 结果
2.1 SARS患者 检测了临床确诊SARS患者236例，其中 105例阳性，阳性率44.5%（105/236）。
2.2 临床SARS疑似病例和发热查因的其他病例的血清抗体检测分析 检测135例临床SARS疑似病例及发热查因的其他病例的系列血清，结果有2例SARS-IgM阳性，有10例SARS-IgG阳性，提示临床疑似病例及因其它原因入院治疗伴发热症状的患者有部分可能为SARS感染，可能是部分SARS患者症状较轻或不明显所致。
2.3 医院工作人员 505例医院工作人员中有20例临床确诊为SARS患者，占职工人数的3.96%，其中7例SARS病毒IgM阳性，19例SARS病毒IgG阳性。19例有SARS症状，且SARS病毒IgG阳性的患者其S/CO值（标本OD/Cut off）在4.03～9.83之间，平均6.67。10例未出现SARS症状，而SARS病毒IgG弱阳性的职工，其S/CO值在1.04～3.08之间，平均1.57。两者差异有非常显著性（P<0.01）。
2.4 正常人群 105例正常人群的血清有1例SARS病毒IgG阳性。
2.5 其他疾病 80例其他疾病患者的血清有2例SARS病毒IgG阳性。
2.6 SARS患者抗体产生的规律及滴度的变化 结果见表1、表2、图1。
2.7 SARS-IgG的长期追踪 笔者对45例SARS患者SARS-IgG抗体进行了1年半的追踪。结果表明，IgG抗体一直维持在高水平。结果见图2。
2.8 垂直传播追踪 追踪了5例SARS患者孕妇以及她们新生婴儿的第一份与第二份血清SARS-IgG抗体变化。结果见表3。
表1 不同年龄组的SARS患者发病时间与血清SARS-IgM阳性率的关系（略）
表2 不同年龄组的SARS患者发病时间与血清SARS-IgG阳性率的关系（略）
表3 母婴第一份与第二份血清SARS-IgG抗体的S/CO值（略）
图1 发病时间与抗体的S/CO值的关系（略）
图2 发病时间与IgG抗体S/CO值的关系（略）
2.9 弱阳性追踪 笔者在检测SARS抗体中发现有部分被检标本呈弱阳性反应（S/CO值在1～3之间），到底这些弱阳性是真阳性还是非特异的反应或者交叉反应呢?笔者对54例弱阳性患者进行了追踪，结果有45例滴度迅速升高，临床上SARS症状明显，但有7例经专家组讨论排除SARS，其中1例是乙脑患者，3例是上呼吸道感染患者，3例是典型肺炎患者。
3 讨论
本组研究结果显示，发病10天前抗体的阳性率较低，而10天后抗体的阳性率较高，表明临床上应用此两项抗体指标时，除在发病初期检测外，应取发病10天后的血清作第2次检测。该结果与我们以往的报道一致 ［2～5］ 。发病5天内就可检测到抗体，以后阳性率迅速上升，IgM在30天后逐渐下降，并在60天后检测不到。而IgG的阳性率在10天后一直维持在高水平，但存在年龄上的差异，60岁以上的患者在发病10天后才产生抗体，可能与老年人免疫功能衰退有关。
结果还显示，SARS患者发病后IgM和IgG抗体的滴度迅速升高，IgM在15天左右达到最高峰，然后逐渐降低。IgG在30天后达到了高水平，并且还在缓慢上升，到80天左右出现最高点，并高水平地维持较长的时间。我们以往的报道 ［2～4］ ，仅反应了SARS患者血清抗体的近期变化规律，即在患病后的一段时间内，IgM和IgG两种抗体水平均升高。在本组研究，对45例SARS患者追踪18个月后，得出了新的结论。SARS患者血清抗体的变化规律与甲肝相似 ［6］ ，这种变化规律暗示IgM抗体可能是属急性感染反应性抗体，而IgG抗体很可能是保护性抗体，有抵抗同型病毒再次攻击的作用，可能是具有免疫力或抵抗力的标志。恢复期SARS患者的血清能够有效治疗急性期重症SARS患者，特别是合并成急性呼吸窘迫综合征的SARS患者。提示SARS-IgG和（或）SARS-IgM抗体，可能也是对抗SARS病毒侵袭及引致机体继发性损伤的、具有保护作用的被动免疫性抗体。
在发病的20例职工中，有19例SARS-IgG阳性，其中有7例为重症病例。他们在2月6～19日发病。他们都是一线的医务人员，其中医生9人，护士11人，男4人，女16人，年龄21～41岁。分析其院内感染的原因主要有:（1）SARS是一种新发传染病，其传染性强，人类对其缺乏免疫力。在发病初期，医务人员对SARS的传染性认识不足，未采取严格的个人防护措施，而常规用的个人防护用品难以隔阻SARS病毒的入侵;（2）工作人员长期处于污染环境;（3）SARS病毒的毒力强，人体对它缺乏免疫力，普遍易感，且可通过近距离接触和呼吸道传播，难以切断传播途径。
10例IgG弱阳性职工，占非SARS患者的2.07%（10/485），高于正常人群的阳性率。其中护士4人，医生3人，出入院处1人，药房1人，他们都有直接与SARS患者接触史。检验科1人，没有与SARS患者接触史，但有与患者体液或分泌物接触史，他们的SARS病毒IgG结果呈弱阳性，表明抗体的滴度不高，可能与他们感染的病毒量小或与病毒的毒力有关。说明在医院工作的高危人群中不仅存在SARS病毒显性感染，而且可能存在隐性感染或健康带毒者。如果真的存在隐性感染或健康带毒者，他们在SARS病毒的流行病学中的意义值得进一步关注。资料显示，SARS主要通过呼吸道飞沫、体液及污物等方式近距离传播，有家庭聚集性和医院聚集性的特点 ［7］ 。直接接触SARS患者是主要的感染途径，接触SARS患者体液或分泌物是感染的次要途径。有研究证明，在SARS患者的漱口液、血液和粪便中都可检出SARS病毒 ［8，9］ 。所以，应加强医院工作人员对传染病认识的教育，提高广大医务人员的素质;加强医院技术装备和防护设施等基础建设，防止院内感染。在我们追踪的孕妇及她们的婴儿中，所有婴儿出生后均未出现SARS症状，也未能检测到SARS-IgM抗体，提示SARS病毒在怀孕中后期通过母婴垂直传播的可能性较小。另外，婴儿出生时脐血清中SARS-IgG的S/CO值与母亲血清的S/CO值非常接近，但婴儿SARS-IgG的滴度下降较快，3个月后转为阴性或弱阳性，而母亲SARS-IgG的滴度还维持在高水平。提示SARS-IgG能通过胎盘屏障从母体进入胎儿。这在以后使用被动免疫预防SARS时，有较大的意义。
目前，ELISA方法使用的包被抗原是裂解的病毒颗粒成分。SARS病毒的抗原成分尚处于研究中，其与其他冠状病毒科的病毒是否有共同成分或同源性有多大，尚是一个未知数，故很可能会出现一些假阳性。提示ELISA方法检测SARS抗体可能有假阳性，特别是弱阳性的病例要继续追踪。
对人类来说，SARS是一种新的病毒，其确切来源仍不清楚。由于隐患依然存在，因此很多研究仍有待继续深入，如病毒的溯源、诊断、治疗和疫苗的研制等，为战胜SARS打下基础。我们与传染病的斗争远未结束，传染病防治工作任重道远。
参考文献
1 WHO.Update31-coronavirus never before seen in humans is the cause of SARS.16April，2003.
2 李穗芬，谭奕洲，刘丽儿，等.广州某医院职工SARS病毒抗体的检测.生物技术通讯，2003，14（5）:467.
3 谭奕洲，唐漾波，刘丽儿，等.SARS病毒抗体的检测及其应用.中华微生物学和免疫学杂志，2003，23（10）:317.
4 董惠卿，唐漾波，李穗芬，等.广州地区某医院职工SARS病毒抗体的检测及分析.广州医药，2004，35（1）:47-48.
5 谭奕洲，唐漾波，刘丽儿，等.SARS病毒抗体的检测及垂直传播追踪.临床检验杂志，2004，22（3）:191-192.
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8 Poutanen SM，Low DE，Henry B，et al.Identification of severe acute respiratory syndrome in Canada.N Engl Med，2003，348:1995-2005.
9 Epidemic update:Outbreak of severe acute respiratory syndrome-worldwide，MMWR Mortal Wkly Rep，2003，52（12）:241-248.
（编辑文 静）
作者单位:510060广东省广州市第八人民医院检验科