点击显示 收起
【摘要】 目的 建立复方羊角胶囊中阿魏酸的含量测定。方法 用Diamonsil-C18色谱柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（30∶70∶1）；检测波长：320 nm；流速：1.0 ml/min。结果 阿魏酸在8~80 μg/ml范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系，r = 0.9998，平均回收率99.56%。结论 该方法简便、快速、灵敏、准确，可作为该制剂的含量测定方法。
【关键词】 复方羊角胶囊；阿魏酸；高效液相色谱法
Determination of content of ferulaic acid in Fufang Yangjiao capsule by HPLC
ZHOU Hai-ying，LI Shu-qing，LIU Yong-gang.Chifeng Danlong Pharmaceutical Co.Itd，Chifeng 024000，China
［Abstract］ Objective To establish a determination method of the content of ferulaic acid in Yangjiao capsules. Methods The content of ferulaic acid in Yangjiao capsules was determined by HPLC and Diamonsil-C18 column （250 mm ×4.6 mm，5μm） was used . The mobile phase was a mixture of methanol-water-glacial acetic acid （30∶70∶1），column temperature was 25 ℃，the flow rate was 1 ml/min and the detection wavel ength was 320 nm. Results The calibration curve of ferulaic acid was linear over the range of 8~80μg/ml.The average recovery rate was 99.56%. Conclusion The method is simple，fast，sensitive and can be used to assess the quality of Fufang Yangjiao capsules．
［Key words］ Fufang Yangjiao capsule；ferulaic acid；high performance liquid chromatography
复方羊角胶囊原收载于《新药转正标准》第4册，处方由羊角、川芎、白芷、制川乌4味药组成，具有平肝，镇痛。用于偏头痛，血管性头痛，紧张性头痛，也可用于神经痛。处方中君药羊角已规定氮含量，而臣药川芎却无含量测定指标，为提高药品的质量标准，更好地监控药品质量，特增加川芎的含量测定以控制制剂质量［1］。
1 仪器与试剂
仪器：美国SSI高效液相色谱；对照品：阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为0773-9910，供含量测定用）；样品：复方羊角胶囊三批（内蒙古伊泰丹龙药业有限责任公司提供）。试剂：甲醇为色谱纯（中国上海陆忠试剂厂），水为重蒸水；其他均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性实验 用Diamonsil-C18色谱柱（5 μm，250 mm×4.6 mm）；流动相：甲醇-水-冰醋酸（30∶70∶1）；检测波长：320 nm；柱温：25 ℃；进样量10 μl。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取阿魏酸对照品适量，加甲醇制成每1 ml含20 μg的溶液，作为对照品溶液。见图1。
2.3 供试品溶液的制备 取本品胶囊内容物，取2.5 g，精密称定，加甲醇50 ml，加热回流1 h，滤过，用甲醇5 ml洗涤滤器及药渣，合并滤液与洗液，蒸干，残渣用水-氨试液（20∶2）的混合液20 ml分次溶解，用乙醚振摇提取2次，每次15 ml，弃去乙醚液，水层用稀盐酸调pH值至2，再用乙醚液振摇提取，每次20 ml，合并乙醚液，用水30 ml洗涤，弃去水液，乙醚液挥干，残渣加甲醇使溶解并转移至10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。见图2。
2.4 线性关系考察 精密称取阿魏酸对照品9.83 mg，加甲醇制成每1 ml含197 μg的溶液，作为供试品溶液。精密吸取上述对照品溶液各0.5 ml、1.0 ml、2.0 ml、3.0 ml、4.0 ml，分别置10 ml容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。精密吸取上述溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪，按高效液相色谱法（HPLC）条件，进样分析，记录峰面积。对进样量（x）与对应的峰面积（y）作回归处理，得到标准曲线图，见图3 。
阿魏酸回归方程为y=28585x+11879，相关系数r=0.9998，结果表明：阿魏酸在8~80 μg/ml范围内，峰面积与浓度呈良好的线性关系。
2.5 精密度实验 取同一批号的供试品溶液，重复进样6次，计算相对标准偏差，阿魏酸的RSD为0.68%。
2.6 稳定性实验 精密吸取同一供试品溶液，分别于实验开始即刻、1.5 h、3 h、4.5 h、6 h，精密吸取样品10 μl注入液相色谱仪中，记录色谱图。结果阿魏酸RSD=0.62%。可见供试品在6 h内相对稳定。
2.7 重复性实验 取同一批样品，精密称定6份，分别按供试品的配制方法配制供试品溶液，各精密吸取10 μl注入液相色谱仪中，记录色谱图，以外标法进行含量测定，结果RSD＝0.63%。表明本法重现性较好。
2.8 阴性对照实验 取缺川芎的处方药材，按工艺制备制成缺川芎的阴性制剂，照供试品溶液配制方法制成阴性溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性溶液各10 μl，注入液相色谱仪，按上述条件进行测定，记录色谱图，结果表明在对照品出峰的保留时间处，阴性溶液没有色谱峰出现，表明此法专属性较好，见图4。
2.9 加样回收率实验 取本品胶囊内容物，称取本品1.25 g，共6份，分别加入阿魏酸对照品，按供试品制备方法配制成供试品溶液。吸取各供试液10 μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按照外标法以峰面积分别计算回收率，结果见表1。表1 阿魏酸的回收率实验结果
2.10 样品含量测定 分别取不同批号的样品，按供试品溶液制备方法制备。精密吸取对照品溶液和各供试品溶液10 μl，注入液相色谱仪，按上述色谱图条件测定，测定各样品中阿魏酸的含量，测定结果见表2。表2 三批样品含量测定结果 （μg／粒）
3 讨论
文中建立的方法简便、准确、重复性好，适用于复方羊角胶囊中阿魏酸的含量测定。实验曾考察了以甲醇-水-磷酸（55∶145∶0.1）、甲醇-1％冰醋酸（30∶70）为流动相，结果表明，本文采用的甲醇-水-冰醋酸（30∶70∶1）为流动相的阿魏酸峰已达基线分离，峰形对称，分离度较好。
在含量测定项下，样品供试液制备考察提取溶媒时，曾采用乙酸乙酯、乙醚作为溶媒提取样品中的阿魏酸，提取溶剂时，样品中的阿魏酸溶解不完全，测得的含量很小；而用甲醇作为提取溶剂时，样品中的阿魏酸均溶解较好，测得的含量较高，故选用甲醇作为提取溶剂。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中华人民共和国药典，2005年版（一部）.北京：化学工业出版社，2005，89.
作者单位：内蒙古赤峰，赤峰丹龙药业有限公司 北京，北京中医药大学中药学院