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关键词 大肠癌；增殖细胞核抗原；免疫组织化学
增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclear antigen,PCNA）作为δ-DNA多聚酶的辅助蛋白，是一项反映细胞增殖活性的良好指标，对细胞由G1期向S期过渡起着重要的调节作用［1］。本研究从细胞增殖状态的角度，应用免疫组化技术（SABC法）对大肠癌中PCNA的含量进行半定量检测，探讨PCNA的过度表达与肿瘤的组织学类型、Dukes’分期、淋巴结转移等临床病理特征的关系，以期为大肠癌的诊断、治疗和在临床上的应用价值提供客观的依据。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集贵阳医学院附属医院和河南省焦作市第一、二人民医院1998—2004年临床病理资料完整的手术切除及结肠镜活检标本共62例，所有病例均经病理证实 。男24例，女38例。年龄25~73岁，平均（52.37±14.88）岁。其中大肠癌51例，良性11例（包括炎症4例、 息肉1例、非典型增生3例、癌旁组织3例）。术后病理证实有淋巴结转移27例，无淋巴结转移24例。所有患者术前均未接受过化疗、放疗或其他针对肿瘤的治疗。
1.2 方法 62例组织标本均常规10%中性甲醛固定，石蜡包埋，先复看原病理切片后，选择相应部分做5μm的连续切片。采用SABC（Strept Avidin-Biotin Complex,SABC）法,进行PCNA免疫组织化学染色，苏木素复染。操作步骤按试剂盒说明书进行。空白对照用PBS代替一抗。鼠抗人PCNA单克隆抗体及3，3'-二氨基联苯胺（DAB）均由武汉博士德公司提供。
1.3 结果判定 本实验染色阳性信号呈棕黄色。结果由一名医生在光镜下任意选择5个具有代表性的高倍视野，每个视野分别计数200个细胞 ，共计1 000个细胞。 PCNA阳性判定［2］：PCNA的阳性染色为定位于细胞核上的棕黄色颗粒。PCNA计数采用PCNA标记指数（PCNA labeling index,PCNA LI）来表示，即指计数1 000个肿瘤细胞中阳性细胞所占的百分比（PCNA LI=PCNA阳性细胞数/1 000个肿瘤细胞×100%）。
1.4 统计学方法 计量资料采用±s，组间比较用t检验和方差分析，检验水准α=0.05。
2 结果
2.1 PCNA的表达 大肠癌组51例，PCNA标记指数为（56.78±7.57）；良性对照组11例，PCNA标记指数为（26.41±8.28），经统计学处理，大肠癌组与良性对照组之间PCNA标记指数差异有统计学意义。
2.2 大肠癌PCNA的表达与临床病理特征的关系 见表1。
从表1可以看出, PCNA的表达情况与患者性别、年龄、病变部位、大体分型及组织学类型无关(P>0.05),而与分化程度、Dukes’分期及淋巴结转移情况相关(P<0.05)。
3 讨论
PCNA是真核细胞DNA合成所必须的一种酸性核蛋白，是δ-DNA聚合酶的辅助因子。参与DNA的合成并在细胞周期中起着重要的调控作用。PCNA在DNA合成的G1期开始增加，至S期达到高峰，G2/M期迅速降低。这种周期性变化恰与细胞增殖过程相关［3，4］。因此，作为S期细胞的标志物，PCNA的合成和表达代表着细胞的增殖状态，其在肿瘤细胞动力学及细胞活性方面的研究为进一步探明肿瘤形成的机制，提供了科学的依据。
表1 大肠癌PCNA的表达与临床病理特征的关系 略
本研究中，PCNA在正常大肠良性对照组中的表达少而有规律（26.41±8.28），而在大肠癌细胞中，PCNA的表达则明显增多（56.78±7.57），P<0.01。说明癌细胞的生长调节失控，DNA合成紊乱。本组资料显示，大肠癌的PCNA标记指数与患者的性别、年龄、病变部位、大体分型及组织学类型之间比较差异无统计学意义（P>0.05），表明癌细胞群体的增殖活性与上述参数无关。关于PCNA与大肠癌组织细胞分化程度的关系，文继舫等［5］认为，PCNA的表达与大肠癌的组织分化程度有显著相关性，与本组资料统计结果一致。表明肿瘤细胞分化越幼稚，生长繁殖能力越强，恶性程度越高。本组结果显示，PCNA的表达与大肠癌Dukes分期及淋巴结转移情况有显著相关性，经统计学比较差异有统计学意义（P<0.05）。表明PCNA标记指数高的肿瘤细胞生长速度较快，易发生淋巴结转移，恶性程度增高，预后较差。因此，PCNA可能是反映大肠癌生物学行为和预后的主要标志物和预测指标之一，可用于大肠癌术后患者的监测及指导术后的治疗。PCNA的测定在临床治疗中也有一定的指导意义。对于大肠癌患者术前可行结肠镜下活检，测定PCNA的表达，对PCNA标记指数低的患者实行手术后可适当加以辅助治疗。对于PCNA标记指数高的患者除实行根治手术外，术后应坚持化疗及其他综合治疗，预防大肠癌的复发。总之，通过对本组病例的研究发现，检测大肠癌患者中 PCNA 的表达情况，能间接反映肿瘤细胞的生长特性，对于判断肿瘤的恶性程度、预测淋巴结转移的趋势、指导制定合理的治疗方案和预后的评估可提供有益的参考，具有一定的指导意义。
4 参考文献
［1］ Shou W,Gregory JH,David B,et al.The p21 inhibitor of cyclin- dependent kinases control DNA replication by interaction with PCNA［J］.Nature,1994，369(16):574-578
［2］ 谷化平,尚培中,李志钢,等.C-erbB-2、PCNA和组织蛋白酶D在食管癌中的表达意义［J］.实用肿瘤学杂志,1999，13(4):266-267
［3］ Hall PA,Lerrison DA,Woods AL,et al.Proliferating cell nuclear antigen (PCNA) immunolocalization in paraffin sections:an index of cell proliferation with evidence of deregulated expression in some neoplasma［J］.Am J Pathol,1990，160(4):285
［4］ Dierendonck JH,Wijsman JH,Keijzer R,et al.Cell-cycle-related staining patterns of antiproliferating cell nuclear antigen monoclonal antibodies.Comparison with Brd Urd labeling and Ki-67 staining［J］.Am J Pathol,1991，138(5):1165
［5］ 文继舫，曾庆富，颜亚晖，等.C-erbB-2癌基因蛋白和PCNA在大肠癌组织中的表达及其意义［J］.湖南医科大学学报,1996，21(4):361-363
河南省焦作市人民医院
河南大学医学院