大肠癌组织中NFκB/p 50、Bcl2的表达及相关性研究

【摘要】  目的 研究NFκB/p 50和Bcl2在大肠癌组织中的表达,分析二者在大肠癌发生、发展进程中的作用及意义。方法 运用免疫组化SP法检测NFκB/p 50和Bcl2在42例大肠癌及5例正常粘膜组织中的表达。结果 NFκB/p 50和Bcl2在大肠癌组织中的阳性表达率为61.9 %和52.4 %,明显高于正常粘膜,差异有统计学意义（P=0.008;P=0.026）。NFκB/p 50的表达与患者年龄、性别、肿块大小、Ducks分期、组织分化程度、淋巴结转移等临床病理参数均无统计学意义（P>0.05）;Bcl2的表达与Dukes分期和淋巴结转移差异有统计学意义（P=0.031;P=0.002）;大肠癌中NFκB/p 50和Bcl2的表达呈正相关(r=0.332,P=0.032)。结论 NFκB/p 50的高表达很可能促进了大肠癌的发生;NFκB/p 50可能通过调节Bcl2基因来抑制肿瘤细胞的凋亡。

【关键词】  NFκB/p 50; Bcl2; 大肠癌; 免疫组化

A Study on the Expressions and Correlation of NFκB/p 50,Bcl2 in Carcinoma Tissue of Large Intestine

    WU Hegang,REN Lingshu

    (Department of Pathology,No.1 Hospital of Yibin,Sichuan Yibin 644000,China)

    【Abstract】  Objective To investigate the expressions of NFκB/p 50 and Bcl2 in carcinoma tissue of large intestine and their correlation.Methods The expressions of NFκB/p 50 and Bcl2 were detected by immunohistochemistry(SP) in 42 cases of carcinoma of large intestine and 5 cases of normal large intestine.Results The positive rates of NFκB/p 50 and Bcl2 expressions in carcinoma of large intestine were 61.9 % and 52.4 %.NFκB/p 50 and Bcl2 expression,which in carcinoma of large intestine group was higher than that in normal large intestine （P=0.008;P=0.026）.The expressions of NFκB/p 50 was not statistically related with clinicpathological parameters of carcinoma of large intestine(P>0.05).The expressions of Bcl2 was statistically related with Dukes staging and lymphatic metastasis(P=0.031;P=0.002).Conclusion High expression of NFκB/p 50 probably promoted genesis of carcinoma of large intestine.NFκB/p 50 might inhibit tumour cell apoptosis by adjusting Bcl2.

    【Key words】  NFκB/p50;  Bcl2;  carcinoma of large intestine;  immunohistochemistry

    大肠癌是消化系统常见的恶性肿瘤之一。大量研究表明,肿瘤的发生发展与细胞增殖、凋亡及基因异常有关。NFκB是迄今为止发现的功能最多的多向核转录因子,正常情况下,NFκB是以无活性的状态存在于细胞质中,在各种因素的作用下,NFκB被激活,调控其下游的凋亡抑制基因Bcl2或凋亡蛋白抑制因子家族成员Sorvirin［1］的活性,从而抑制细胞凋亡促进肿瘤的发生、发展。NFκB家族有多个亚单位,NFκB/p 50是其中一种研究较少而重要的亚单位。本研究采用免疫组织化学技术,检测大肠癌组织中NFκB/p 50和Bcl2蛋白的表达并分析二者的关系。

    1  材料和方法

    1.1  组织标本

    选取宜宾市第一人民医院病理科2007～2008年手术病理证实的大肠癌标本42例及部分相应的癌旁6 cm 以上正常大肠组织标本5例。其中男性28例,女性14例,年龄35岁～85岁,平均年龄58.7岁。42例肿瘤组织中,9例低分化,13例中分化,20例高分化,16例有淋巴道转移。所有病例术前均未行化疗、放疗,手术标本取材后经10 ％福尔马林固定,常规石蜡包埋,4 μm连续切片。

    1.2  试剂与方法

    NFκB/p 50和Bcl2单克隆抗体均购自Santa Cruz公司,DAB和SP免疫组化试剂盒购自北京中山生物技术公司。采用免疫组织化学 SP 法,按产品说明书进行实验操作。切片常规脱蜡至水后,3 % H2O2 处理10 min灭活内源性酶,高压锅煮沸修复抗原。加一抗4°C湿盒过夜,加辣根过氧化物酶标记的第二抗体处理30 min,滴加第三抗体处理3 min,DAB显色,苏木素复染,脱水,透明封片后光镜观察。

    1.3  结果判断

    NFκB/p 50于细胞浆和细胞核显色,Bcl2于细胞膜和细胞浆显色,细胞呈黄色或棕黄色为阳性细胞。随机计数10个高倍视野,连续计数300个肿瘤细胞中阳性细胞数,求其百分率;根据细胞显色程度分别记为:弱阳性1分,中等强度2分,强阳性3分。将阳性细胞百分率与显色度分数相乘为每例标本的最终显色结果,其中>30 %为阳性,≤50 %为阴性。结果判定由两位病理医师双盲发读片确定。

    1.4  统计方法

    应用SPSS 11.5统计软件进行分析,NFκB/p 50和Bcl2蛋白阳性率的分析采用χ2检验,NFκB/p 50和Bcl2的相关分析采用四格表相关分析。检验水准为α=0.05.

    2  结果

    2.1  NFκB/p 50和Bcl2在大肠癌组织中的表达

    在5例正常大肠粘膜中,NFκB/p 50和Bcl2均没有一例表达阳性,在42例大肠癌组织中,有26例NFκB/p 50表达阳性,阳性率61.9 %,有22例Bcl2表达阳性,阳性率52.4 %.正常大肠粘膜组织中NFκB/p 50和Bcl2的阳性表达与大肠癌组织差异有统计学意义（P=0.008;P=0.026）（见表1）。

    2.2  NFκB/p 50和Bcl2的表达与临床病理参数间的关系

    患者不同的年龄、性别、肿块大小、Ducks分期、组织分化程度、淋巴结转移等的NFκB/p 50的表达差异均无统计学意义（P>0.05）。Bcl2的表达除Dukes分期和淋巴结转移差异有统计学意义（P=0.031;P=0.002）,其它均无统计学意义（见表2）。表1  NFκB/p 50和Bcl2在大肠癌组织中的表达情况表2  NFκB/p 50和Bcl2的表达与临床参数间的关系

    2.3  NFκB/p 50与Bcl2表达的相关性分析

    26例大肠癌NFκB/p 50阳性表达病例中有17例Bcl2蛋白表达阳性,而16例NFκB/p 50表达阴性病例中有11例Bcl2蛋白表达阴性。经四格表资料相关分析NFκB/p 50与Bcl2的阳性表达呈正相关(r=0.332,P=0.032)（见表3）。表3  NFκB/p 50和Bcl2表达的相关性

    3  讨论

    NF κB是1986年由Sen和Baltimore［2］首先从B淋巴细胞核抽提物中检出的一种分布和作用十分广泛的真核细胞转录因子,它是Rel蛋白家族成员之一。由Rel蛋白家族中的成员以同源或异源二聚体形式组成［3］。p 50/p 65异二聚体和p 50同源二聚体是IκB信号传导途径最常见的二聚体。细胞在静息状态下,细胞质中的NFκB与其抑制蛋白IκB结合形成三聚体,使NFκB不能核易位,以非活性的形式稳定存在细胞质中,不具有基因转录作用。当细胞受到如病毒或细菌感染,紫外线照射和细胞因子等作用刺激后,IκB可磷酸化并迅速降解,进而使NFκB进入细胞核内活化,与胞核内某些基因特定NFκB结合序列GGGRNNYYCC相结合,启动或调节基因的转录,参与炎症反应,细胞增殖和细胞凋亡［4,5］。

    目前的研究表明在多种肿瘤中存在有NF κB选择性激活或表达异常［6,7］。本研究结果发现在大肠癌组织中NFκB/p 50呈高表达状态,阳性表达率为61.9 %,且部分细胞核中也有NFκB/p 50的表达,而在正常大肠粘膜组织中却没有一例阳性表达,这可能是由于本实验标本较少所致。本研究还发现NFκB/p 50在大肠癌组织中的表达与患者的年龄、性别、肿块大小、Dukes分期、组织分化程度、淋巴结转移等无明显关联,这与曾令军，等在胃癌中的研究一致，但是却发现它在低分化癌中特别是肿瘤边缘细胞的表达强度比其它肿瘤细胞要强,提示NFκB/p 50可能与肿瘤的浸润转移有关。

    细胞凋亡己被认为广泛参与胚胎发育,组织分化等许多过程,它对维持机体稳定具有重要功能,可参与和促使肿瘤的发生。目前认为细胞凋亡的触发可能是一个级联式基因表达的结果,有许多基因参与这一过程,NF κB在控制细胞增殖和凋亡中起重要作用［9］。NFκB主要通过以下途径来抑制凋亡［10］:①通过调控细胞因子而参与自身细胞的凋亡。 ②通过诱导或上调抗凋亡基因抑制凋亡。③通过诱导TNF受体相关因子和凋亡抑制蛋白而抑制凋亡。

    Bcl2基因是迄今研究最深入、最广泛的一种原癌基因，它具有抑制凋亡的作用［11］。许多研究表明Bcl2蛋白的表达与多种恶性肿瘤的发生、发展、不良预后和生物学行为密切相关。它主要分布在线粒体外膜,粗面内质网和核膜上,可协助线粒体调控凋亡［12］。目前有研究发现Bcl2基因的启动子区具有功能性NFκB 序列识别区域,Bcl2也是NFκ B 的下游基因之一［13］。本研究探讨了在大肠癌组织中NFκB/p 50活性水平与Bcl2表达之间的关系,在NFκB/p 50活性和Bcl2表达均阳性的患者中,NFκB/p 50活性水平与Bcl2的转录和表达具有正相关性(r=0.332,P<0.01)。表明NFκB/p 50作为一种抑制凋亡的转录因子,可通过对Bcl2一类的下游抗凋亡基因表达的调节,对大肠癌细胞的正常程序化死亡产生抑制作用。但是NFκB/p 50抑制大肠癌细胞凋亡的具体机制尚需要进一步研究。

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