乙型肝炎病毒血清学标志物与HBVDNA含量的相关性分析

【摘要】  目的 分析乙型肝炎病毒载量(HBVDNA)与乙肝病毒血清标志物(HBVM)之间的关系。方法 运用酶联免疫吸附测定法(ELISA法)、荧光定量聚合酶链反应(FQPCR)技术对200例乙型肝炎患者分别检测血清标志物及HBVDNA含量。结果 当HBVDNA含量在107108U/ml时,HBeAg阳性的大三阳模式组即HBsAg+ HBeAg+ HBcAb+的血清学检测率(45.3% )明显高于其他模式组,HBVDNA含量在不同模式组有显著性差异(P<0.01);当HBVDNA含量在103104U/ml时,小三阳模式组即HBsAg+ HBeAb+ HBcAb+的血清学检测率(61.3% )明显高于其他模式组,HBVDNA含量在不同模式组有显著性差异(P<0.01);而在4例HBV血清标志物全阴性的标本中仍检出HBVDNA;1例HBsAb+患者也检出了HBVDNA.结论 在各种HBV模式中,以HBeAg阳性者病毒复制水平最高,而血清中未检出标志物者并不能排除HBV感染,HBsAb+的病人也可能有传染性。两种方法联合检测对临床有不同的指导意义。

【关键词】  HBVDNA;乙肝血清标志物;相关性

　Abstract:Objective To analyze the relationship between hepatitis b virus titer(HBVDNA)and its serum markers(HBVM).Methods HBVM and HBVDNA in 200 hepatitis b patients were determined using enzymelinked immunosorbent assay(ELISA)and fluorescence quantitative polymerase chain reaction(FQPCR).Results when HBVDNA was 107～108U/ml,the serological detection rate(45.3%)in HBeAg positive group(HBsAg+ HBeAg+ HBcAb+)was much higher than that in the other groups.HBVDNA levels were significantly different in various groups(P<0.01).When HBVDNA was 103104U/ml,the serological detection rate(61.3%)in HBsAg+ HBeAb+ HBcAb+ group was higher than that in the other groups.HBVDNA levels were significantly different in various groups(P<0.01).HBVDNA was detected in four patients with negative serum markers and one patient with positive HBsAb.Conclusion In various HBV patients,the highest viral replication level(107～108U/ml)is seen in HBeAg positive patients.HBV infection can not be ruled out even if the serum markers was not detected.HBsAb+ patients may also be contagious.The two methods have different significance for clinical diagnosis.

　　Key words:HBVDNA;hepatitis b serum marker;correlation

　　乙型肝炎是世界上最常见的传染病之一,每年有100多万人死于该病[1]。它是由乙肝病毒(HBV)引起的以肝脏炎性病变为主并可引起多器官损害的一种传染病。全球约有3.5亿HBV慢性感染者,其中我国占1亿左右,全球每年有15%25%死于HBV相关的终末期肝硬化和肝癌。因此及早对HBV感染明确诊断,作出相应防治措施,对提高或改善HBV慢性感染者的预后具有重要意义[2]。HBVDNA是反映体内HBV感染、复制和传染性强弱的金标准,本文采用荧光定量PCR(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQPCR)技术和ELISA法分别检测HBVDNA和血清学免疫标志物,探讨二者之间的关系,结果报告如下。

　　1 资料与方法

　　1.1 一般资料

　　200例血清标本采自新疆医科大学第一附属医院感染科2009年4月2009年6月住院的HBV感染者,其中,男139例,女61例,平均(47.13±14.493)岁。无菌收集患者血清标本并置80℃冰箱中贮存备用。

　　1.2 方法

　　1.2.1 血清标志物检测

　　使用上海科华生物工程公司试剂盒(酶联吸附免疫法)检测所有血清标本HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb和HBcAb.

　　1.2.2 HBV DNA检测

　　HBV DNA定量检测试剂来自中山大学达安基因股份有限公司,采用ABTPpris7300荧光定量PCR检测仪进行检测。荧光PCR循环程序设置如下:93℃,2 min;93℃,45s、55℃,60s 10个循环;93℃,30s、55℃,45s 30个循环;荧光信号收集在60℃.HBVDNA定量结果由仪器软件自动分析计算,HBVDNA结果≥1×103U/ml时血清为阳性。

　　1.2.3 实验分组

　　用ELISA法对200例血清分别进行HBV标志物(HBV M)检测,分组如下:A组:HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+;B:HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+;C组:HBsAg+、HBcAb+;D组:HBsAb+、HBeAb+/、HBcAb+;E组:HBsAg+、HBeAg+;F组:HBsAg+、 HBsAb+、HBeAb+;G组:HBsAg+;H组:全阴。根据HBVDNA含量将患者分为3个级别:103104U/ml、105106U/ml和107108U/ml.

　　1.3 统计学处理

　　采用SPSS12.0对所得数据进行统计分析,计数资料采用卡方(χ2)检验,均数用±标准差表示,显著性检验水准为P<0.01.

　　2 结果

　　不同的HBVM模式与HBVDNA载量的关系见表1。表1 不同的HBVM模式与HBVDNA载量的关系

　　3 讨论

　　酶联免疫吸附测定法(ELISA法)测定乙型肝炎病毒(HBV)血清学标志物是诊断乙型肝炎的重要指标。但由于其不能反映乙肝患者血清病毒含量,对于病毒复制状况监测、判断传染性、疗效观察等帮助不大[24]。而FQPCR技术能够从分子水平直接检测HBV病毒自身的遗传物质DNA,是提示病毒存在和复制的最可靠、最直接、更准确灵敏的指标[58],所以FQPCR技术为临床很好地解决了这一问题[2]。

　　我们的研究结果显示:①在感染HBV过程中,HBVDNA是反映感染的最早指标,体内最先出现A组模式,即大三阳[HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)]模式[9]。经FQPCR检测HBVDNA均呈阳性,阳性率为100%,当HBVDNA含量在107108U/ml时,HBeAg阳性的大三阳模式组的血清学检测率(45.3% )明显高于其他模式组,HBVDNA含量在不同模式组有显著性差异(P<0.01),说明此时乙型肝炎病毒复制极度活跃,具有强传染性。此种血清学模式临床上见于急性、慢性乙型肝炎,应积极治疗,同时做肝功能检查。②当HBVDNA含量在103104U/ml时,小三阳模式组即HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)的血清学检测率(61.3% )明显高于其他模式组,HBVDNA含量在不同模式组有显著性差异(P<0.01)。随着HBeAg的消失、HBeAb的出现,HBVDNA的拷贝数降低,说明HBeAb出现后病毒的复制减弱,传染性减低[10],此抗体对HBV感染具有保护作用[11]。③HBsAg(+)、HBcAb(+)组在HBVDNA量为103104U/ml时检出率(46.7%)与10 5106U/ml时检出率(45%)无差别,而且与“大三阳”在10 5106U/ml时检出率(45%)一样,说明体内HBV复制水平也很高,传染性也较强,应高度重视,并结合临床表现做肝功能检查,积极治疗。此种血清学模式被视为急性、慢性乙型肝炎或HBsAg携带者。④1例HBsAb(+)患者也检出了HBVDNA。可见HBsAb的出现并不能完全说明体内无病毒存在和复制而高枕无忧。虽然此种情况只占康复期乙肝的少数,但必须引起医生和患者的重视[12]。⑤而在4例HBV血清标志物全阴性的标本中,仍检出HBVDNA,说明HBVDNA的检出先于血清标志物,受检者可能处于感染早期,故ELISA法不易检出,与资料相符[13]。因此PCR的高灵敏可为早期诊断HBV感染提供依据[12]。

　　综上所述,200例患者血清中HBVDNA含量检测结果显示,不同HBVDNA含量患者的血清标志物检出率也不同。低病毒含量时HBVDNA和HBeAg的检测率也较低。所以在应用ELISA法检测乙肝五项时,最好同时做荧光定量PCR检测,以弥补免疫学方面的缺陷,如HBV感染前期产生大量抗体,随后迅速大量下降,免疫学法较难检出。FQPCR检测可缩短诊断的窗口期,特别是在药物疗效观察中具有良好的应用前景。

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