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【摘要】 目的：探讨脑欣口服液治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤的机理。方法：将50只7 d龄SD大鼠随机分为5组，即假手术组、模型组、大剂量组、中剂量组、小剂量组，每组10只，造模后按要求灌服相同体积的生理盐水和大、中、小剂量的脑欣口服液。结果：模型组与假手术组比较，GLU、 NOS、Ca2+含量升高，P＜0.05；大剂量组与模型组比较，GLU、 NOS、Ca2+含量显著下降，P＜0.05；中剂量组与模型组比较，GLU、 Ca2+均显著降低，P＜0.05；小剂量组与模型组比较，Ca2+水平显著降低，P＜0.05。结论：脑欣口服液抑制新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡的机理与降低GLU、NOS及Ca2+有关。
【关键词】 脑欣口服液；缺氧缺血性脑病；实验研究；大鼠
以往的研究已证实脑欣口服液可以抑制新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡［1］，为了进一步研究其作用机理，造模用药后，测定缺氧缺血性脑损伤新生大鼠脑组织中谷氨酸（GLU）、一氧化氮合酶（NOS）、钙离子（Ca2+）的含量，现报告如下。
1 材料与方法
1.1 实验对象
将50只7 d龄、质量(35±5) g的 SD大鼠（购自第四军医大学实验动物中心，合格证号为056162）随机分为5组，即：假手术组、模型组、中药大剂量组(简称大剂量组)、中药中剂量组(简称中剂量组)、中药小剂量组(简称小剂量组)，每组10只，雌雄各半，母鼠喂养。
1.2 药品及试剂
脑欣口服液由丹参15 g、川芎10 g、黄芪25 g、当归25 g、石菖蒲25 g组成，共100 g生药，分别制成大、中、小3种剂量的口服液。即大剂量口服液用100 g生药制成120 mL口服液，每毫升含生药0.83 g；中剂量口服液用100 g生药制成150 mL口服液，每毫升含生药0.67 g；小剂量口服液用100 g生药制成200 mL口服液，每毫升含生药0.5 g。GLU、NOS、Ca2+试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供，其批号分别为20050913、20050909、20050915。
1.3 实验方法
参考文献［2］，除假手术组外，其余各组大鼠乙醚吸入麻醉，左颈部皮肤约4 cm×4 cm区域严格消毒，捏起皮肤，横向剪一小口，再纵向沿颈中线剪开皮肤，分离皮下组织，寻找胸锁乳突肌，钝性纵向分离，左内下方即可见到颈动脉及迷走神经，用剥离子将颈动脉找出并分离之，结扎后缝合，置于2000 mL密闭容器中，通入含8 %氧气和92 %氮气的混合气体2 h，即制成左侧大脑半球缺氧缺血性脑病动物模型。假手术组仅游离左侧颈总动脉，不予结扎，缝合后不置混合气体密闭容器中。
造模成功后，中药大、中、小剂量组分别灌服大、中、小剂量的脑欣口服液（分别含生药0.625 g、0.5 g、0.375 g），每次 20 mL/kg，每日2次，均给药10 d；模型组和假手术组均灌服等量生理盐水10 d。测定脑组织匀浆中GLU、NOS和Ca2+的含量。
1.4统计学处理
实验数据以均数±标准差（±s）表示，采用SPSS11.5统计软件，并使用Microsoft excel整理分析，组间均数比较用t检验。
2实验结果
见表1。表1各组幼鼠GLU、NOS、Ca2+测定结果比较注：与假手术组比较★P＜0.05；与模型组比较※P＜0.05
3 讨论
新生儿缺氧缺血性脑病（HIE）属于中医的“胎惊”、“胎痫”、“惊风”、“囟填”、“昏迷”等病证范畴，是引起新生儿死亡和儿童神经系统伤残的重要原因。围生期窒息，使脑部缺氧缺血，导致气血不足，瘀血阻络，风痰上扰清窍而发病。脑欣口服液中丹参活血祛瘀，川芎活血行气，黄芪补气升阳，当归补血活血，石菖蒲芳香化湿、开窍宁神。全方共奏活血补血、益气开窍之功。现代药理研究证明，丹参能显著降低患儿的脑血流阻力指数，提高脑血流速度，改善脑血流自动调节机制，减少因局部血管痉挛及血管炎症所致的继发性脑缺血，从而减轻脑损伤［3］。丹参能明显抑制细胞超载，并能减少脑细胞兴奋性氨基酸释放，使神经元损伤减轻［4-5］。丹参能促进已发生障碍的微循环血流速度加快，毛细血管交叉网点数目增多，微血管内红细胞流速、流态恢复正常，显著地改善微循环，有助于改善细胞代谢状况。川芎能显著增加兔的脑血流量，可使麻醉犬脑血流量显著增加，血管阻力下降；还能改善软脑膜微循环和微血流动态，增加脑血管搏动性和血容量。黄芪对小鼠有镇静作用，黄芪水煎液有加强小鼠学习记忆的作用，还有利于小鼠对信息的贮存作用。当归对脑缺血后再灌注脑组织脂质过氧化物增高有明显的抑制作用，当归与川芎合用具有某种程度抗氧化及抑制自由基的作用，从而减轻脑缺氧，对缺氧后再灌注损伤起到治疗作用。石菖蒲有中枢镇静和抗惊厥作用，还能明显改善东莨菪碱、亚硝酸钠所致的小鼠记忆获得和巩固障碍，也能改善亚硝酸钠、氰化钾和结扎两侧颈总动脉所致的小鼠缺氧状态［6］。从实验结果看，模型组与假手术组比较,P＜0.05，有显著性差异，说明造模成功。大、中、小3种剂量的脑欣口服液可不同程度地降低GLU、NOS、Ca2+水平，说明脑欣口服液抑制新生大鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡的机理与 GLU、NOS及Ca2+水平降低有关，并且具有量效正相关性。
【参考文献】
［1］罗世杰，尹杰，林源，等.脑欣口服液对新生鼠缺氧缺血性脑细胞凋亡影响的实验研究［J］．陕西中医,2004，25（8）：761.
［2］吴婉芳. 建立新生儿缺氧缺血性脑病动物模型［J］．新生儿科杂志,1992,7(6):265.
［3］李勇,韩玉昆,许植之,等.丹参治疗新生儿缺氧缺血性脑病疗效研究［J］.中华围产医学杂志,1999,2(4):22.
［4］徐放生,吴婉芳,张伟,等.钙与新生大鼠缺氧缺血性脑病［J］．中华儿科杂志,1994,32(4):208.
［5］李菊,杨期东,欧阳珊,等.脑缺血大鼠海马细胞外液氨基酸的动态变化［J］．中华医学杂志,1996,76(4):294.
［6］高学敏.中药学［M］．北京:人民卫生出版社,2000:1054-1759.The effects on Glutamic acid, Nitric Oxide Synthase and Calciumion in rats
作者单位：陕西中医学院，陕西咸阳712046