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【摘要】 目的 探讨运脾散预防和治疗小儿厌食症的机理。方法 病因模拟法制作幼龄厌食症大鼠模型，经运脾散治疗后，用放射免疫检测技术测定外周血浆八肽胆囊收缩素(CCK\|8)和β-内啡肽(β\|EP)的含量。结果 与空白组比较，模型大鼠血浆CCK\|8含量均显著增高(P<0.05)，血浆β\|EP含量显著减低(P<0.01)；与模型组比较，治疗组血浆CCK\|8含量显著降低(P<0.05)，血浆β\|EP含量显著增加(P<0.05)。结论 运脾散能在一定程度上防治小儿厌食症，与调节该模型外周血浆β\|EP和CCK\|8的分泌与释放有关。
【关键词】 运脾散；厌食症动物模型；八肽胆囊收缩素；β-内啡肽
The regulating effect of Yunpi Powder on Brain|Gut peptide in plasma of anorexia rats
Wu Gaoxin，Cui Jin，Zhang Xiaoshan，Peng Yu
Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，550002,Guiyang, China
Abstract: Objective To explore the mechanism that Yunpi Powder prevent and cure symptom of wean anorexia. Methods To observe the effect of Yunpi Powder on Brain|Gut peptide concentration in plasma in juvenile rat model of anorexia. The β|EP and CCK|8 concentration in plasma were examined by radioimmunoassay. Results Compared with control rats, the CCK|8 concentration in plasma in the model rats increased, while the β|EP concentration decreased. Compared with model rats, the CCK|8 concentration normalize decreased and β|EP increased significantly in treatment group. Conclusion Yunpi Powder can improve appetite and weight in the anorexia rats models. And the possible reason is that they can regulate the secretion and release of β|EP and CCK|8 in peripheral areas.
Key words:Yunpi Powder; anorexia rats models;β|EP; CCK|8
厌食是小儿常见的病证,是以小儿较长时间见食不贪、食欲不振、甚至拒食为主要表现的一种临床疾病。中医古籍中无此病名，但古医籍中记载的“恶食”、“不思饮食”、“不嗜食”等颇似本病。《小儿药证直诀·胃气不和》采用益黄散为治疗不思食的主方，开调助运为治疗厌食之先河。明代《奇效良方》载运脾散（人参、白术、藿香等）对脾失健运颇为适宜。贵阳中医学院第二附属医院彭玉副主任医师在黄建业教授治疗小儿疾病经验的基础上，自拟运脾散治疗小儿厌食症取得良好效果[1]。大量研究资料表明具有减食欲作用的CCK|8和具有促食欲作用的β|EP在摄食的生理调控和病理性摄食减少中都起着重要作用[2，3]。本研究拟通过“运脾散”对血浆CCK|8和β|EP的调节作用，进一步探讨运脾散防治小儿厌食症的机理。
1 实验材料
1.1实验动物
35～40 d龄SD大鼠24只[贵阳医学院实验动物中心（黔实动证2002-007）],体质量（60±10）g，雌雄各半。
1.2主要仪器、试剂和药品
γ自动放免仪由中国科大中佳公司提供;神经肽CCK|8放免试剂盒、神经肽β|EP放免试剂盒由上海第二军医大学神经生物学教研室提供;抑肽酶、抗凝剂由北京东亚生物技术有限公司提供;实验用中药由贵州贵阳同济堂药店提供。
1.3特制饲料的制备
特制饲料采用鱼松、奶粉、玉米粉、黄豆粉、白糖、鲜鸡蛋、鲜肥猪肉按1∶1∶2∶1∶1∶1.8∶2比例配制，捏成饼干状，每块约20 g，晾干，冷藏备用。
2实验方法
2.1动物分组及模型的复制
实验动物随机分为正常对照组(简称空白组)、模型对照组(简称模型组)、中药治疗组(简称治疗组)，每组各8只。实验前各组动物进食量、体质量无明显差别，表现活跃、毛发光泽。所有动物均单笼饲养，自由进食、饮水。空白组常规饲料饲养，其他各组采用南京中医药大学汪受传的造模方法[4]，用特制高蛋白高脂饲料喂养幼龄大鼠,建立小儿厌食症大鼠模型。造模成功标准：造模1～7 d后摄食量低于空白组20 %～30 %，平均体质量低于空白组10 %以内；或第8～28 d以内模型组摄食量低于空白组30 %～50 %，平均体质量低于空白组10 %～15 %为造模成功。所有动物均单笼饲养4周，自由进食、饮水。第28 d 8时起禁食，第29 d处死。
2.2运脾散的制备
主要成分为苍术10 g、白术10 g、茯苓10 g、淮山药6 g、薏苡仁10 g、陈皮6 g、枳壳6 g、神曲6 g、莲子6 g、砂仁6 g、甘草6 g。用该方加水煎煮2次，制备成每毫升含 1.83 g生药的药液。
2.3给药方法
实验第8 d，空白组、模型组灌生理盐水0.02 mL/g，治疗组灌运脾散药液0.02 mL/g（为小儿临床用量的6.25倍），每日1次，连续21 d。
2.4指标及检测方法
3组大鼠第28 d 8时起禁食，第29 d迅速断头处死，取躯干血4 mL，加入用0.3 mL乙二胺四乙酸二钠（EDTA2Na）处理过的试管（采血前每管加抑肽酶20 μL/mL），并立即置4 ℃冰箱，3 h内低温离心10 min，分离血浆，于-20 ℃保存待测。用放免法检测血浆 CCK|8和β|EP。
2.5统计学处理
运用SPSS 11.5 for windows软件包进行处理，实验数据以均数±标准差表示，采用单因素方差分析。
3结果
3.1一般情况
实验过程中，空白组大鼠进食量、体质量逐天稳定上升，毛发光泽，表现活跃。模型组大鼠出现进食量减少，体质量增长缓慢，易激惹，大便干结，少数出现毛枯。治疗组大鼠治疗初期（约为实验第8～16 d）与模型组的情况相近，出现食量减少,体质量增长较缓慢，易激惹，大便干结，少数出现毛枯的现象；治疗3周后，大鼠进食量、体质量逐天稳定上升，易激惹、大便干结的现象得到改善。
3.2对厌食大鼠血浆CCK|8含量的影响
见表1。表1运脾散对厌食动物血浆CCK|8含量的影响 （略）注：与空白组比较△Ｐ<0.05；与模型组比较※Ｐ<0.05
3.3对厌食大鼠血浆β|EP含量的影响
见表2。表2运脾散对厌食大鼠血浆β|EP含量的影响 （略）注：与空白组比较△Ｐ<0.05,△△Ｐ<0.01；与模型组比较※Ｐ<0.05
与空白组比较，模型组与治疗组血浆β|EP含量显著减少（P<0.01或P<0.05）；与模型组比较，治疗组血浆β|EP含量显著增加（P<0.05）。
4 讨论
小儿厌食症的主要病因为喂养不当、多病久病及先天不足，其病机为脾胃运化失健。喂养不当为小儿厌食症的主要病因之一，多由饮食失节，调摄不当引起，如有些家长缺乏育婴保健知识，片面强调高营养滋补食品，超越脾胃正常运化功能，损伤脾胃之气而致厌恶进食，甚至拒食。运脾散首选苍术，其味微苦，气香而悦胃，性温燥而醒脾运，开郁宽中，疏化水湿，正合脾之性，为运脾治湿之要药。《本草崇原·苍术》说：“凡欲运脾，则用苍术。”治疗脾气不运、湿浊滞留，极为有效；再配以茯苓、白术、山药、薏苡仁、陈皮、枳壳、神曲，补运兼施，寓补于运，集补脾、运脾为一体。诸药合用，补中有消、消中有补，补不碍滞、消不伤正，从而达到治疗小儿厌食的作用。
CCK|8是一种在胃肠道和脑组织中广泛分布的肽类激素,有明显的致厌食作用。我们采用病因模拟法制作的“自然模型”,其下丘脑和血浆CCK|8浓度显著增高。本实验研究结果显示：长期喂养高脂高蛋白饲料可使动物外周血CCK|8分泌增多,CCK|8的增多可能正是抑制动物摄食的主要因素,这一环节在小儿厌食症发病中可起重要作用。用运脾散治疗后，血浆中CCK|8含量明显低于模型组,与正常动物无显著性差异。
β|EP在脑组织和胃肠道双重分布。有研究表明[5]，β|EP在中枢的极微量改变即可影响动物的摄食行为。另有研究表明[6]，大鼠夜间自发摄食或运动使摄食增加时，均见到血中β|EP浓度升高，提示外周β|EP也与摄食活动有关。本实验研究结果显示：模型动物血浆中β|EP水平明显低于对照组，经治疗后明显增加。表明高蛋白高脂饲料喂养幼龄大鼠造成的厌食症模型，外周血β|EP含量显著减少，运脾散可以明显促进模型动物外周血β|EP的分泌，从而使其摄食量增加，进一步提示β|EP在小儿厌食发病中起一定作用，促进β|EP分泌是运脾方药发挥临床疗效的作用机制之一。
中医学认为脾开窍于口,脾和则口能知五味,脾伤则食少,纳谷不香。所以,脾之功能状态与摄食行为的变化密切相关。各种治疗方法治疗小儿厌食症的主要疗效表现在促进食欲,使患儿摄食量增加,说明其治疗作用干预了摄食调控的某些环节。近年来研究发现多种脑肠肽参与摄食调控,具有减食欲作用的CCK|8和具有促食欲作用的β|EP在摄食的生理调控和病理性摄食减少中都起着重要作用[3，7]。由于它们的分泌状态与进入胃肠道的食物成分有关,因此我们假设小儿厌食症的发生是由于饮食结构不合理,导致CCK|8和β|EP分泌紊乱,影响食欲中枢对摄食行为的调节而引起的，运脾散可能正是通过调整多种脑肠肽的分泌和分布而达到促进摄食的目的。
【参考文献】
[1]彭玉.黄建业教授治疗小儿厌食症经验[J].贵阳中医学院学报,1998,20(2):6.
[2]彭玉，吴高鑫.运脾散对厌食大鼠下丘脑和血浆CCK|8的调节作用[J].中医儿科杂志,2007,3（2）:20-22.
[3]江连,沈锷.摄食的中枢神经化学机制[J].生理科学进展,1984,15(2):120-123.
[4]汪受传,张月萍,陶勇,等.特制饲料喂养幼龄大鼠建立小儿厌食症模型[J].南京中医药大学学报,1999,15(3):148.
[5]Tseng L F. Acute and chronic administration of β|Endorphin and nalrrex one on food and water intake in rats[J].Fed Proc,1980,39:606.
[6]邓孔昭.食欲中枢与摄食的中枢调控[Ａ].周吕.胃肠生理学[Ｍ].北京:科学出版社,1991：175.
[7]Esther Lee Marcus, M.D, Elliot Metal. Refusal to eat in the elderly[J]. Nutr Rev, 1998, 6: 163-171.
作者单位：贵阳中医学院，贵州贵阳550002