HPS病儿急性期血浆IL13和IL15水平变化及意义

【摘要】  目的 探讨过敏性紫癜（HSP）病儿急性期血浆白细胞介素13（IL13）和白细胞介素15（IL15）水平的变化及其在HSP发病机制中的意义。方法 应用双抗体夹心ELISA法，对61例HSP病儿急性期血浆IL13和IL15水平进行检测，对不同临床类型HSP间血浆IL13和IL15水平进行比较，并以25例健康儿童作为正常对照组。结果 HSP病儿急性期血浆IL13水平显著高于正常对照组(t′=5.49,P<0.01）。有、无肾损害组血浆IL13水平皆高于正常对照组，差异有显著性（F=53.92,q=13.87、3.40，P<0.01、0.05）；有肾损害组显著高于无肾损害组（q＝11.86，P<0.01）。HSP病儿急性期血浆IL15水平亦显著高于正常对照组(t′=8.98，P<0.01）；有、无肾损害组血浆IL15水平均显著高于正常对照组，差异有显著性(F=40.45,q=12.18、3.46，P<0.01）；有肾损害组显著高于无肾损害组（q=9.95，P<0.01)。结论 HSP病儿急性期血浆IL13和IL15水平显著升高在HSP发病机制中有重要作用，而且与紫癜性肾炎的发生、发展关系密切。

【关键词】  紫癜，过敏性；白细胞介素13；白细胞介素15；血浆；儿童

　　THE CHANGES OF PLASMA CONCENTRATION OF IL13 AND IL15 IN CHILDREN WITH HENOCHSCHOENLEIN PURPURA AND THEIR SIGNIFICANCE

　　JANG ZHONG, TIAN JU, LU YUNHONG, et al

　　(Department of Paediatrics, The Second Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College Qingdao 266042, China);
　　［ABSTRACT］ Objective To investigate the changes of interleukin13 (IL13) and interleukin15 (IL15) in children with HenochSchoenlein purpura (HSP) and discuss the related clinical significance. Methods Plasma levels of IL13 and IL15 were detected by ELISA in 61 children with HSP in acute phase and 25 normal children. The level of IL13 and IL15 of HSP children in different clinical categories were compared. Results IL13 level in children with HSP in acute phase was significantly higher than that of healthy controls (t′=-5.49,P<0.01); IL13 level of HSP children with or without renal involvement was significantly higher than that of healthy controls (F=53.92,q=13.87,3.40;P<0.01 or 0.05), those with renal involvement was significantly higher than that without renal involvement (F=53.92;q=11.86,P<0.01). IL15 level of children with HSP in acute phase was significantly higher than that of the controls (t′=8.98,P<0.01);  IL15 level of children with HSP with or without renal involvement was significantly higher than that of healthy controls (F=40.45；q=12.18,3.46;P<0.01); and those with renal involvement was significantly higher than that without (q=9.95,P<0.01). Conclusion Significant increase in plasma IL13 and IL15 level of children with HSP in acute phase suggests that IL13 and IL15 play a crucial role in pathogenesis of HSP and correlate with nephritis of HSP.
   
　　［KEY WORDS］ Purpura, HenochSchoenlein; Interleukin13; Interleukin15; Plasma; Child
   
　　过敏性紫癜（HSP）是儿童时期最常见的毛细血管变态反应性疾病，以广泛的小血管炎症为病理基础。除毛细血管外，也可累及小动脉和小静脉[1,2]。HSP确切的发病机制迄今尚未完全清楚。现认为HSP的发病非单一因素所致，系个体遗传、环境因素（如感染等）和免疫异常综合作用的结果[3]。免疫复合物介导的系统性血管炎是HSP的基本特征，体液免疫功能紊乱在其中发挥关键作用，细胞免疫功能异常也与之关系密切。关于白细胞介素13（IL13）及白细胞介素15（IL15）在血管炎性疾病，如川崎病、系统性红斑狼疮等的变化及意义已有报道，但在HSP中的变化及意义少有报道。本研究对HSP病儿急性期血浆中IL13及IL15水平进行检测，探讨其水平变化与HSP的关系和临床意义。

　　1  对象与方法

　　1.1  研究对象

　　1.1.1  HSP组  HSP病儿61例，为2003年9月～2004年9月在青岛大学医学院附属医院儿内科住院的病儿。男34例，女27例；年龄4～12岁，平均8.1岁。根据皮疹消退前和消退后2周内有无肾脏受累的临床证据分为有肾损害组和无肾损害组[4]。其中有肾损害组23例，男13例，女10例，年龄5～12岁，平均8.5岁；无肾损害组38例，男21例，女17例，年龄4～12岁，平均7.9岁。

　　1.1.2  正常对照组  25例，为同期门诊体检的健康儿童，其中男14例，女11例；年龄5～11岁，平均8.0岁。近4周内无感染、过敏性疾病及免疫抑制剂应用史等。

　　1.2  研究方法

　　1.2.1  标本采集  入院第1天采集外周静脉血3 mL注入无菌肝素管（1 g/L），迅速摇匀，1 500 r/min离心10 min，收集血浆500 μL于-70 ℃保存备测。

　　1.2.2  血浆IL13、IL15的测定  采用双抗体夹心ABCELISA法，按试剂盒说明书操作。

　　1.3  统计学处理
   
　　采用SPSS 11.0统计软件进行数据处理，结果以±s表示，数据间比较采用t检验、方差分析及q检验（NEWMANKEULS法）。

　　2  结果

　　2.1  HSP病儿急性期血浆IL13水平变化
   
　　HSP病儿急性期血浆IL13水平显著高于正常对照组，差异有显著意义(t′=5.49,P<0.01）。有、无肾损害组血浆IL13水平皆高于正常对照组，差异有显著意义（F=53.92, q=13.87、3.40，P<0.01、0.05）；有肾损害组显著高于无肾损害组（q=11.86，P<0.01）。见表1。

　　2.2  HSP病儿急性期血浆IL15水平变化
   
　　HSP病儿急性期血浆IL15水平显著高于正常对照组(t′=8.98,P<0.01）。有、无肾损害组血浆IL15也皆高于正常对照组，差异有显著性(F=40.45, q=12.18、3.46，P<0.01）；有肾损害组显著高于无肾损害组（q=9.95，P<0.01）。见表1。

　　表1  各组血浆IL13和IL15水平比较（略）

　　与正常对照组比较，*t′=5.49、8.98，F=53.92、40.45，Δq=3.40～13.87，P<0.01、0.05;与无肾损害组比较，#q=11.86、9.95,P<0.01

　　3  讨论
  
　　HSP病儿存在免疫功能紊乱[5]。大量研究证明，HSP存在Th2类细胞因子分泌和表达上调[6]。IL13主要由Th2类细胞分泌。本文结果显示，HSP急性期IL13升高，提示HSP病儿Th2功能亢进，导致体液免疫亢进，使免疫复合物生成增多，介导血管炎的发生，从而导致HSP的发病。另外，增高的IL13可诱导内皮细胞上血管细胞黏附分子1（VCAM1）的表达增加[7]。黏附分子介导细胞与细胞间、细胞与细胞外基质的相互粘连，从而促进白细胞贴壁、外渗、游走、聚集、抗原表达和淋巴细胞激活，使炎症细胞向特异组织、器官定向转移、浸润，在炎症发生中起重要作用。已知内皮细胞与免疫活性细胞间相互黏附是导致炎症反应向血管深层浸润的始动因素[8]， VCAM1在免疫活性细胞及内皮细胞上的表达增加就可能介导免疫活性细胞黏附于内皮细胞，进而导致血管更深层次的组织损伤，最终产生免疫性血管炎，促进HSP的发生。IL13还能诱导B细胞增殖分化，使IgM、IgG、IgE合成增加[9]，IgE能促进炎性递质的释放，炎性递质增加则改变毛细血管的通透性，导致HSP的发病。HSP存在T细胞凋亡过甚，致Th细胞（特别是Th1类细胞）功能低下，Th2类细胞功能相对亢进（或增强），B细胞功能过度增强，诱导体液免疫介导为主的血管壁炎症[10]。
   
　　HSPN系免疫复合物介导的肾小球疾病，在疾病活动期肾小球局部单核巨噬细胞、中性粒细胞及T淋巴细胞浸润，肾小球内有弥漫性内皮细胞损伤，炎症递质如IL1、IL8、TNF等分泌增加，纤维蛋白沉积和局部组织凝血活性增高。IL13是一种主要由Th2细胞产生的抗炎性细胞因子，能够广泛抑制单核巨噬细胞类炎症性细胞因子的基因转录和蛋白合成，并且能够促进单核巨噬细胞和中性粒细胞IL1受体拮抗剂（IL1RA）的产生[11]。MATSUMOTO[12]研究结果表明，IL13可显著抑制自发性和LPS活化的IgA肾病病人外周血单核细胞TNF和IL8的产生。SAURA等[13]研究证实，IL13能够抑制TNFα、IL1β、TNFγ及LPS激活的肾小球系膜细胞一氧化氮（NO）的产生及NO合酶（iNOS）mRNA的表达。这些研究结果提示，IL13可通过抑制单核巨噬细胞炎性细胞因子的产生、肾小球系膜细胞NO的合成而在肾小球肾炎的炎症反应中发挥抗炎作用。对于HSPN活动期IL13产生增多的原因，推测可能是由于肾脏固有细胞和局部浸润的炎症细胞以及PBMC在受到各种炎症递质刺激后被活化，从而诱导IL13产生增多。
      
　　关于IL15与HSP的关系临床上尚未见报道。本文采用ELISA方法检测了61例HSP病儿血浆IL15水平，发现HSP组病儿血浆IL15水平显著高于正常对照组，提示IL15可能参与了HSP的病理生理过程。其机制可能为：①HSP病儿Th2功能亢进，体液免疫亢进，抗原提呈细胞、单核巨噬细胞保护性分泌IL15增多，促进Th0向Th1转化，使Th1/Th2比例趋向于平衡；②IL15增多可增加bcl2基因的表达，而bcl2基因已证实可抑制淋巴细胞的凋亡，使外周自身反应性B细胞克隆清除减少，导致免疫球蛋白产生增多，免疫复合物生成增多，从而促使HSP的发生发展[14]；③IL15同IL2、IL4及IL10一样，对CD40配体协同诱导抗IgM或佛波酯活化的B细胞增殖和分泌IgM、IgG1、IgA以及低水平的IgG2，使体液免疫功能亢进，导致免疫复合物生成增多，促进血管炎的发生。④IL15还具备募集T细胞的功能，而且能单独或与其他因子协同使募集到的T细胞获得单核或巨噬细胞诱导分泌TNFα的能力，从而启动包括IL1、IL6、IL8、GMCSF、MIPIα、MIPIβ等一系列下游因子在内的炎症反应，促进HSP的发生。因此，IL15目前被认为是一种位于TNFα上游，起着炎症触发作用的细胞因子。本文进一步研究了HSP病儿血浆IL15水平与肾损害发生的关系。结果显示，临床发生肾损害者IL15水平明显高于无肾损害者。免疫复合物诱导性肾脏损伤是HSPN的主要发病机制，IL15可刺激T、B淋巴细胞和NK细胞增生活化，促进B细胞分泌免疫球蛋白，影响T细胞在体内的迁徙，吸引T细胞到抗体沉积和组织损伤部位。此外，有学者研究显示，肾小管上皮细胞可表达IL15[15]，尤其是在免疫介导的肾脏疾病中，不仅有IL15 mRNA的表达，而且有相同剂量的IL15的分泌，这种分泌既可被INFγ诱导并呈剂量依赖性增加，又可被抗IL15单克隆抗体所阻断，而单核细胞虽然在细胞免疫中有IL15 mRNA的表达，但却没有IL15蛋白质的分泌，故正是肾小管上皮细胞分泌的IL15导致肾间质淋巴细胞的活化和增生，进而引起间质损伤，而肾小管的炎性程度与肾脏疾病的进展密切相关。MATSUMOTO等[16]研究发现，IL15可明显增加免疫介导的微小病变肾小球肾炎中肾小球通透性因子（VPF）的释放，而VPF作为一种淋巴因子是导致肾血管通透性增高、尿蛋白增多的主要原因，同时也是局灶节段性肾小球硬化蛋白尿产生的主要原因。IL15通过多途径参与了HSPN的发生发展，经过系统治疗，血清IL15水平随着疾病的好转而下降。本文结果亦显示，HSPN病人IL15水平明显高于无肾脏损害者，提示IL15水平可能与HSP的肾损害有关，但其直接和具体的证据需待今后进一步研究。

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作者单位：青岛大学医学院第二附属医院小儿科，山东 青岛 266042；青岛大学医学院附属医院小儿内科