HBV DNA与其五项检测指标关系及意义

【摘要】  目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）标志物定量检测在慢性乙型肝炎诊治中的临床意义。方法 选择住院慢性乙型肝炎病人70例，应用电化学发光法测定入院时第一份血清HBV相关抗原、抗体的含量，应用聚合酶链反应法测定HBV DNA含量，同时测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。结果 慢性乙型肝炎病人HBV DNA与HBsAg和HBeAb呈负相关关系（r=-0.494、-0.536，P<0.01），与HBeAg呈正相关关系（r=0.586，P<0.01）；HBeAg阳性组HBV DNA与HBsAg和HBeAb呈负相关关系（r=-0.555、-0.568，P<0.01），与HBeAg和HBcAb呈正相关关系（r=0.608、0.569，P<0.01）；HBeAg阴性组HBV DNA与HBV抗原抗体指标不存在相关关系（P>0.05）。慢性乙型肝炎病人ALT与HBV DNA及HBV抗原抗体指标均不存在相关关系（P>0.05）。结论 HBeAg、HBcAb、HBsAg定量检测是反映HBV复制的指标之一，HBsAg变化可能与HBV的生物学行为有关，无证据支持以乙型肝炎标志物来判断肝功能受损的程度。

【关键词】  肝炎 乙型 慢性 生物学标记 聚合酶链反应

　　THE RELATIONSHIP BETWEEN HBV DNA AND FIVEITEM QUANTITATIVE DETECTION AND ITS CLINICAL SIGNIFICANCE

　　LUO WEIMIN, WANG ZHAOHUI, LIU ZHONGJING

　　(Qingdao Hospital for Infectious Diseases, Qingdao 266033, China)

　　［ABSTRACT］ObjectiveTo assess the clinical significance of quantitative detection of HBV marker in the diagnosis and therapy of chronic hepatitis B (CHB).  MethodsThe first blood sample of 70 CHB patients on admission was detected for the contents of HBV’s antibody and antigen by ECLIA, which were then determined for HBV DNA and ALT by PCR. ResultsHBV DNA in CHB showed negative correlation with HBsAg and HBeAb (r=-0.494,-0.536;P<0.01); but positive with HBeAg(r=0.586,P<0.01). In HBeAgpositive group, HBV DNA showed negative correlation with HBsAg and HBeAb (r=-0.555-0.568;P<0.01), and positive with HBeAg and HBcAb (r=0.608,0.569;P<0.01). In HBeAgnegative group, no associations were noted between HBV DNA and above HBV markers (P>0.05). The ALT in CHB patients did not show any correlativity with ALT and HBV markers (P>0.05). ConclusionThe quantitative detection of HBeAg, HBcAb and HBsAg is one of the parameters reflecting HBV duplication; the changes of HBsAg are probably related to biological behaviors of HBV. There is no evidence to support that the degree of liver function damage can be judged by HBV markers.
    
　　［KEY WORDS］Hepatitis B, chronic; Biological markers; Polymerase chain reaction
     
　　乙型肝炎抗原抗体系统是病毒与机体免疫系统相互作用的血清学表现，既反映了病毒的生物学行为，又反映了机体免疫状况。早期受检测技术所限，临床大多采取定性或半定量检测方法；目前借助电化学发光法可实现五项指标的定量检测，从而能够更精确地观测其变化并探索其可能规律。乙型肝炎病毒（HBV）DNA是HBV活跃复制的重要标志物。本研究在定量检测上述乙型肝炎标志物（HBVM）的基础上，探讨了HBV DNA与其五项检测指标的内在联系及其临床意义。

　　1   对象与方法

　　1.1   研究对象
    
　　选择2006年5月～2007年2月在我院住院的慢性乙型肝炎病人70例，排除有重叠感染或并发可影响肝功能的其他各种疾病的病例，近半年未进行任何抗病毒治疗。诊断符合2000年中华医学会西安会议修订的《病毒性肝炎防治方案》诊断标准[1]。根据HBeAg定量检测结果,将病人分为HBeAg阳性和阴性组。HBeAg阳性组38例，男22例，女16例，平均年龄（45.05±18.03）岁，病程（48.72±32.17）月；HBeAg阴性组32例，男20例，女12例，平均年龄（47.23±20.37）岁，病程（46.23±33.75）月。两组间一般临床资料比较差异无显著性（P>0.05）。

　　1.2   检测方法
    
　　HBV抗原、抗体检测采用电化学发光法，HBV DNA定量检测采用多聚酶链反应法，仪器和试剂均购自ROCHE公司。选择入院第一次检测的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)作为观察肝功能指标。

　　1.3   结果判读
    
　　HBsAg、HBeAg定量值为标本光信号与定标液所得Cutoff值的比值（COI），COI＞1为阳性，COI＜1为阴性。HBeAb、HBcAb定量值为酶标仪读取样本吸光度值/临界吸光度值（S/CO），S/CO＜1为阳性，S/CO＞1为阴性。HBsAb在慢性乙型肝炎病人治疗中无明确意义，低于检测下限无具体数值，不予判读。

　　1.4   统计学分析
    
　　采用SPSS 11.0和PPMS 1.5[2]统计软件进行分析。HBV DNA载量采取log10对数转换后进行统计学处理。计量资料两样本均数比较采用t或t′检验，计数资料比较采用χ2检验。相关分析应用Pearson单因素直线相关法。

　　2   结果

　　2.1   HBVM检测
    
　　HBeAg阴性组HBV DNA、HBeAg以及HBeAb水平显著低于HBeAg阳性组（t=4.50，t′=6.36、6.53，P<0.01），而HBsAg则显著高于HBeAg阳性组（t=2.82，P<0.05）。见表1。
    
　　表1   HBVM定量和肝功能指标检测结果（略） 

　　与HBeAg阳性组比较，*t=4.50、2.82，**t′=6.36、6.53，P<0.05、0.01

　　2.2   HBV抗原抗体指标与HBV DNA的相关性
    
　　慢性乙型肝炎病人HBV DNA与HBsAg和HBeAb呈负相关关系（r=-0.494、-0.536，P<0.01），与HBeAg呈正相关关系（r=0.586，P<0.01）；HBeAg阳性组病人HBV DNA与HBsAg和HBeAb呈负相关关系（r=-0.555、-0.568，P<0.01），与HBeAg和HBcAb呈正相关关系（r=0.608、0.569，P<0.01）；HBeAg阴性组病人HBV DNA与上述HBVM不存在相关关系（P>0.05）。

　　2.3   ALT与HBV DNA及其五项检测指标的相关分析
    
　　慢性乙型肝炎病人ALT活性与HBV DNA及HBVM均不存在相关关系（P>0.05）。

　　3   讨论
    
　　HBV存在前C区变异，导致HBeAg缺失表达，临床将慢性乙型肝炎区分为HBeAg阳性与阴性两种类型，在抗病毒治疗上主要对于疗程的要求有所区别。但是，我们认为引起HBeAg阴性的原因应当加以进一步区分，因为存在自发免疫清除病毒者HBeAg有发生阴转甚至血清转换的可能。有研究提示，血清转换前后HBsAg存在一定变化规律[3]。这部分HBeAg阴性病人的抗病毒治疗是否应当遵循现行治疗方案有待循证医学进一步证实。由前可知，自发免疫清除病毒病人病毒学标志物变化很大，可能影响HBeAg阴性组数据。正如本研究所示，两种类型乙型肝炎部分指标差异显著，如HBV DNA、HBsAg、HBeAg、HBeAb。因此，有必要在区分HBV前C区基因变异与否的基础上，对HBeAg阴性病毒学标志物意义进行深入分析，可能有助于乙型肝炎病人的细化分型和有效治疗。
    
　　HBV DNA是证实病毒复制的敏感指标；血清抗原抗体系统是机体免疫系统与病毒相互作用的产物，为存在于机体免疫系统中HBV生物学行为的反映。总体和HBeAg阳性组相关分析显示，乙型肝炎抗原抗体系统与HBV DNA表现出一定程度的相关性。HBsAg、HBeAg与HBV DNA存在不同的相关关系，在HBeAg阳性组尤为明显。随着HBeAg含量增高，HBV DNA水平也增高，两者呈正相关关系，从基因水平进一步证实HBeAg是反映HBV复制的指标之一。HBsAg与HBV DNA呈负相关关系，与既往此类研究结果不一致；但有报道显示，在临床拉米夫定抗病毒治疗过程中，随着病毒载量的下降，HBsAg含量上升[3]。我们推测可能由于HBsAg是S基因的表达产物，在基因调控过程中存在负反馈机制，或者是HBsAg产生以后，积极参与病毒颗粒的形成，与细胞受体结合，HBsAg消耗过多、代谢过快，以上的病毒生物学行为可能导致其数量减少，显示出负相关性。另外，一般认为HBsAg含量变化很大，还可能与病毒含量、机体免疫状态等诸多因素有关，尚需扩大样本以进一步观察与证实。HBeAb与HBV DNA呈负相关，表现为慢性乙型肝炎病人大部分存在免疫耐受状态，由于HBsAg、HBeAg的免疫原性，常难以诱导相关抗体的产生。HBeAg阳性组HBcAb与HBV DNA呈正相关，提示HBcAg作为免疫原性最强的抗原物质，在病毒高度活跃复制的状态下，刺激大量抗体产生，说明在HBeAg阳性病人中，HBcAb可以作为病毒复制的指标之一。病毒学指标与肝实质损害指标ALT不存在相关性，说明HBV复制与活动并不直接影响肝功能，HBV是通过介导免疫反应引起肝组织损伤，此时，HBV DNA、ALT异常是抗病毒治疗的指标之一。
    
　　综上所述，对于慢性乙型肝炎病人（尤其是HBeAg阳性病人）而言，其病毒学指标在一定程度上是HBV生物学行为规律性的良好反映，同时也反映了机体的免疫系统状况。通过探索结合其他指标（如HBV前S2抗原）[4]，判断病毒复制状态，可能有助于临床抗病毒治疗用药指导，如估计早期及维持应答率、检测耐药变异的发生等。临床对于HBeAg阴性病人应当根据HBV前C区基因变异与否予以区分，进而科学判断乙型肝炎病毒学指标的指导意义，有助于正确诊疗方案的制定。

【参考文献】
  　　[1]中华医学会. 病毒性肝炎防治方案[J]. 中华肝脏病杂志, 2000,8(6)：324329.

　　[2]周晓彬,纪新强,徐莉. PPMS 1.5统计软件的功能及其应用[J]. 青岛大学医学院学报, 2009,45(1):9193.

　　[3]秦来英,刘葵花,张照华,等. 拉米夫定治疗期间患者血清乙型肝炎表面抗原定量的变化[J]. 中华肝脏病杂志, 2005,13(8)：602.

　　[4]郝繁运. 乙型肝炎病毒前S2抗原、核心抗体IgM与其五项指标联合检测的意义[J]. 青岛大学医学院学报, 2008,44 (1)：5658.

作者单位：青岛市传染病医院肝病科，山东 青岛 266033