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【摘要】 目的 探讨环氧化酶-2（COX-2）和血管内皮细胞生长因子（VEGF）在乳腺癌组织中的表达及其表达之间的关系。方法 S-P免疫组织化学方法检测60例乳腺癌石蜡包埋组织中COX-2和VEGF的表达，分析其表达之间的关系及其与临床病理参数的关系。结果 乳腺癌组织中COX-2阳性表达率为81.7%（49/60），VEGF阳性表达率为86.7%（52/60）。在淋巴结无转移组COX-2和VEGF表达明显低于有转移组COX-2的表达（P<0.05)。VEGF在COX-2阳性表达组中的阳性率（95.9%）明显高于阴性组（45.5%）（χ2=19.79，P=0.000）。结论 乳腺癌组织中COX-2和VEGF的高表达可能有利于淋巴结转移；乳腺癌组织中COX-2的表达可能有促进肿瘤血管生成的作用。
【关键词】 乳腺肿瘤；环氧化酶-2；血管内皮生长因子；免疫组织化学
Clincal significance of expression of cyclooxygenase-2 and vascular endothelial growth factor in human breast carcinoma
GUI Shuang-yuan,LIU Yun-feng.Department of Oncology,Yongzhou People’s Hospital,Hunan 425006,China
【Abstract】 Objective To study the significance of expression of cyclooxygenase-2(COX-2)and vascular endothelial growth factor(VEGF)in breast cancer(BC)and its correlation.Methods Paraffin imbedding tissues from 60 cases with BC were detected for expression of COX-2 and VEGF by immunohistochemistry,the relationship of its expression with clinical pathological parameters were analyzed.Results The positive expression rate of COX-2 was 81.7% in BC,and VEGF was 86.7%.The expression of COX-2 and VEGF in BC with lymph node metastasis were significantly higher than that in BC without lymph node metastasis(all P<0.05).The expression of VEGF in COX-2 positive expression BC tissues was significantly higher than that in COX-2 negative expression BC tissues(χ2=19.79,P=0.000).Conclusion High expression of COX-2 and VEGF in BC tissue indicated the lymph node metastasis might occur.COX-2 might up regulate the expression of VEGF in BC.
【Key words】 breast neoplasms;cyclooxygenase-2;VEGF;immunohistochemistry
环氧化酶（COX）是花生四烯酸转化为前列腺素的限速酶，有COX-1和COX-2两种。COX-1存在于许多正常组织中，而COX-2是一种诱生型酶，正常生理状态时不易检测到，当受到各种细胞因子、生长因子及肿瘤启动因子等的刺激后，COX-2的表达水平可迅速升高。近年来国内有关COX-2在乳腺癌中的表达已有报道，但有关COX-2与肿瘤的新生血管生成的关系罕见。本研究旨在观察与探讨COX-2在乳腺癌中的表达及其与肿瘤血管生成因子VEGF的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料 收集我院2004年1月~2006年4月行乳腺癌改良根治术或根治术患者共60例。均为女性，年龄28~75岁，平均（48.14±9.8）岁，其中≤50岁34例，>50岁26例。术前均未化疗，术后均经病理证实。病理类型：浸润性导管癌24例，单纯癌32例，髓样癌3例，浸润性小叶癌1例。按乳腺癌国际TNM分期：Ⅰ期9例，Ⅱ期３８例，Ⅲ期13例。淋巴结转移情况：腋窝淋巴结阴性23例，腋窝淋巴结阳性37例。
1.2 试剂与方法 兔抗人COX-2多克隆抗体和VEGF单克隆抗体免疫组化SP试剂盒及DAB显色剂均购自北京中山生物技术有限公司。取肿瘤标本分别在4%福尔马林固定液、Carnoy固定液中4℃过夜固定，不同梯度的乙醇脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，4~5μm厚度连续切片，进行HE染色观察及免疫组织化学染色。一抗的工作浓度为1：100，操作分别按说明书操作。已知阳性片为阳性对照，PBS代替一抗作为阴性对照。
1.3 结果判定 为减少主观片面性，每例分别由两人各自阅片，然后核对所得结果，获得共识。COX-2的免疫组化染色以细胞浆及核膜出现棕黄色颗粒者为阳性细胞（图1），VEGF的免疫组化染色以细胞浆出现棕黄色颗粒为阳性细胞（图2）。以阳性细胞数为基础，阳性细胞数10%以上为阳性表达，阳性细胞数＜10%判断为阴性。
1.4 统计学处理 本组资料采用SPSS10.0统计软件进行统计学分析。率的比较采用χ2检验。
2 结果
2.1 COX-2和VEGF蛋白的表达 60例乳腺癌组织中COX-2阳性表达者49例，阳性表达率为81.7%；VEGF阳性表达者52例，阳性表达率为86.7%。
2.2 COX-2表达和VEGF表达与临床病理指标关系 对COX-2和VEGF表达与临床病理指标的关系进行分析，在淋巴结无转移组COX-2和VEGF表达明显低于有转移组COX-2和VEGF的表达（见表1），差异有显著性（P<0.05),而COX-2和VEGF的表达在不同年龄段、肿瘤大小、ER、PR状况、临床分期之间的差异无显著性（P>0.05)。表1 COX-2表达和VEGF表达与临床病理指标关系注：*表示COX-2不同的值
2.3 COX-2表达与VEGF表达的关系 49例COX-2阳性表达患者VEGF阳性表达者47例，阳性率为95.9%，11例COX-2阴性表达患者VEGF阳性表达者5例，阳性率为45.5%，VEGF在COX-2阳性表达组中的阳性率明显高于阴性组，差异有显著性（χ2=19.79,P=0.000)。
3 讨论
近几年来，国外许多的研究发现COX-2在乳腺癌的发生、发展中有重要的作用，主要表现在以下几个方面：COX-2及其产物前列腺素刺激细胞增殖，同时抑制免疫；COX-2过度表达促进肿瘤新生血管生成；COX-2过度表达增加肿瘤细胞侵袭力，抑制肿瘤细胞凋亡；COX-2介导的细胞突变［1，2］。流行病学证实非甾体类抗炎药物可以通过抑制COX-2的表达而发挥防治肿瘤的作用［3］。因此研究COX-2在乳腺癌中表达有着重要的临床意义。
本研究结果显示在淋巴结无转移组COX-2表达明显低于有转移组COX-2的表达，与Surowiak等［4］、庞达［5］和胡春宏等［6］结果一致，说明COX-2的高表达与乳腺癌淋巴结转移有关，COX-2具有促进乳腺癌淋巴转移的作用，提示乳腺癌组织中COX-2的高表达可能是预后不良的指标。胡春宏等［6］研究发现COX-2的表达还与临床分期有关，与年龄、肿瘤大小、ER、PR状况无关，Ristimaki等［7］研究发现COX-2的表达水平与肿瘤大小、组织学分级、雌激素受体阴性表达等相关。本研究COX-2的表达在不同年龄段、肿瘤大小、ER、PR状况、临床分期之间差异无显著性，可能与本组样本少有关。本组VEGF的表达在淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移者，由此认为VEGF促进乳腺肿瘤新生血管形成的同时也促进癌浸润和淋巴道的转移。这可能是由于丰富的血管不仅增加了肿瘤细胞进入血液循环的机会，也增加了肿瘤细胞侵入邻近的与毛细血管伴行的淋巴管或通过静脉-淋巴管吻合处进入淋巴管的几率而促进淋巴道转移过程。
本研究结果显示VEGF在COX-2阳性表达组中的阳性率明显高于阴性组，进一步证实COX-2具有促进肿瘤新生血管生成的作用。Tsujii等［8］研究发现，体外转染COX-2基因的人结肠癌细胞株在过度表达COX-2的同时，促血管生成因子VEGF、bFGF、PDGF、内皮素-1等均明显上调。而COX-2抑制剂NS398可明显抑制这些促血管生长因子的表达，动物实验也证实选择性COX-2抑制剂Celecoxib能抑制小鼠移植瘤新生血管形成［9］。肿瘤组织中血管生成诱导因子的大量表达是诱导肿瘤血管生成的主要原因之一，迄今已知的各种血管生成诱导因子中，VEGF已被证实是作用最强、并在肿瘤和正常组织中起着最重要作用的促血管生成因子之一［9］。乳腺肿瘤组织中COX-2与VEGF表达的密切相关性提示乳腺肿瘤中COX-2可能通过促使VEGF表达，从而促进肿瘤新生血管生成，进而促进肿瘤生长和转移，抑制COX-2活性对乳腺癌的防治可望具有较为广阔应用前景。
（本文图片见封三）
【参考文献】
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3 Harris R E,Kasbari S,Farrar WB.Prospective study of nonsteroidal anti-inflammatory drugs and breast cancer.Oncol Rep,1999,6(1):71-73.
4 Surowiak P,Materna V,Matkowski R.Relationship between the expression of cyclooxygenase 2 and MDR1/P2glycop rotein in invasive breast cancers and their prognostic significance.Breast Cancer Res,2005,7(5):862-870.
5 庞达，赵宪琪，薛英威.乳腺癌组织中环氧化酶-2mRNA的表达及其意义.中华肿瘤杂志，2002，24（6）：567-569.
6 胡春宏，文芳，邓超，等.环氧化酶-2在乳腺癌中高表达的临床意义.中国肿瘤，2006，15（12）：870-872.
7 Ristimaki A,Sivula A,Lundin J,et al.Prognostic significance of elevated cyclooxygenase-2 expression in breast cancer.Cancer Res,2002,62(3):632-635.
8 Tsujii M,Kawano S,Tsuji S,et al.Cyclooxygenase regulates angiogenesis induced by colon cancer cells.Cell,1998,93(5):705-716.
9 Masferrer JL,Leahy KM,Koki AT,et al.Antiangiogenic and antitumor activities of Cyclooxygenase-2 inhibitor.Cancer Res,2000,60(5):1306-1311.
作者单位：425006 湖南永州，永州市人民医院肿瘤科