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【摘要】 目的 确定新塔花挥发油的最佳提取及包合工艺。方法 采用正交试验法，对新塔花挥发油的提取及包合进行试验，评定提取及包合工艺的优劣。结果 最佳包合工艺为A3B1C1，即β-CD与挥发油的配比为7:1，包合温度为40℃，包合时间为90min。结论 经验证试验证实，新塔花挥发油最佳提取及包合工艺实验具有现实可行性，为工业生产奠定基础。
【关键词】 新塔花;挥发油;提取;包合工艺
Study on the extraction and inclusion process of volatile oilin Ziziphora clinopodioides Lam
ZHOU Ling, GUO Xiao-feng,YANG Tao.Xinjiang Provincial Corps Hospital, Chinese People’s Armed Police Forces, Urumqi 830091,China
【Abstract】 Objective To optimize the extraction and inclusion process of volatile oil in Ziziphora clinopodioides Lam. Methods Orthogonal test was adopt to study the way of extraction and inclusion of volatile oil in Ziziphora clinopodioides Lam, and the best way was evaluated. Results The best way of inclusion was A3B1C1，β-CD: oil was 8:1, the temperature and time were at 40℃ and 1 hour,respectively.Conclusion It is proved by experiment that this extraction and inclusion process of volatile oil in Ziziphora clinopodioides Lam is stable and reasonable.
【Key words】 Ziziphora clinopodioides Lam; volatile oil; extraction process;inclusion process
新塔花属唇形科多年生草本植物，分布在新疆、俄罗斯、蒙古等地。维吾尔药中命名为苏则，又称山薄荷或小叶薄荷。主要有效成分为薄荷醇、黄酮类等[1]。具有芳香通脉、行气止痛、活血化瘀、益气除痰的功效。动物试验表明：该药可起到保护与治疗缺血心肌的作用[2]。
挥发油是新塔花中主要有效成分之一，全草含0.8%～1.5%的挥发油，为淡黄色，在提取和贮存过程中极易损失。因此，为充分发挥其有效成分的药效，对新塔花中挥发油的提取和包合工艺进行研究。
1 仪器与试药
1.1 仪器 Waters 2695高效液相色谱仪(美国Waters公司);电热恒温干燥箱(湖北省黄石市医疗器械厂);挥发油提取器(化玻公司定制);KDM型控温电热套(山东甄城华鲁电热仪器厂);85-2恒温磁力搅拌器(江苏金坛市华峰仪器有限公司)。
1.2 试药 新塔花(乌鲁木齐市南山产,2006年7月由自治区中医医院提供,已经鉴定)，其他试剂均为分析纯。
2 挥发油提取工艺研究
以新塔花挥发油收油率为考察指标，采用水蒸气蒸馏法对新塔花挥发油进行提取，并通过正交试验及方差分析筛选出最佳提取工艺。
2.1 单因素试验
2.1.1 挥发油的提取方法 参照《中国药典》2005年版附录XD项下的挥发油测定法提取新塔花中的挥发油。经考察新塔花吸水率为407%。经考察，采用切碎处理方法提取新塔花中挥发油量为粉碎后的2.6倍。
2.1.2 各单因素对挥发油提取工艺的影响 分别对挥发油的提取时间、浸泡时间、加水倍量进行单因素试验，结果表明：提取时间为4h时挥发油提取基本完全;随着浸泡时间和加水倍量的增加，挥发油收油率的变化为先增后降。
2.2 正交试验 根据单因素实验结果，以加水倍量、浸泡时间及提取时间三个因素为考察因素，正交试验设计优选提取工艺，因素水平见表1，采用L9(34)正交表试验，结果见表2。表1 挥发油提取因素水平表以挥发油收油率为考察指标，对试验结果进行方差分析，结果见表3。表3 挥发油收油率方差分析
由正交试验极差分析结果可以看出：各因素对收油率的影响程度为A>C>B，加水倍量对挥发油收油率的影响较大。方差分析结果表明：加水倍量(A)对挥发油收油率的影响差异有显著性(P<0.05)，而浸泡时间和提取时间对挥发油收油率差异无显著性。因素水平优化组合为A1B1C1，即加水12倍，浸泡时间0.5h，提取时间2h。
2.3 验证试验 取三份样品，根据优选工艺进行验证实验，挥发油平均提取率为1.44%，挥发油提取率较高，说明提取工艺稳定、可行。
3 新塔花挥发油包合工艺研究
为保证制剂中挥发油稳定、减小刺激性、不良气味，本试验采用β-环糊精(β-cyclodextrin-CD)对提取的挥发油进行包合。β-环糊精是经培养得到的低聚糖化合物，桶状内壁空腔结构，可将药物包含于其环状结构中形成超微囊包合物，供口服或注射后在体内经酶水解，释放出药物[3]。
挥发油在实验室中常用的包合方法有饱和水溶液法、研磨法、超声法、冷冻干燥法等，结合实验室条件及文献的调研情况[4]，确定本制剂研究中采用饱和水溶液法包合挥发油。通过单因素及正交试验，以包合率及包合物收得率为指标筛选最佳包合工艺。
3.1 单因素试验
3.1.1 挥发油比重测定 采用比重瓶法测得挥发油的比重为0.9325g/ml。
3.1.2 包合工艺筛选 包合物制备方法：称取β-环糊精加入蒸馏水，水浴加热至溶，缓缓加入50%挥发油乙醇溶液，恒温搅拌至规定时间，冷却，抽滤，石油醚(30℃～60℃)洗3次，恒温箱干燥4h，得到白色粉末即为新塔花挥发油的包合物。
3.1.3 各因素对包合工艺的影响 分别以加水比例、包合时间、包合温度、挥发油与β-CD的比例对挥发油包合影响进行单因素试验。结果表明，加水倍量影响不大;包合时间为75min时包合效果最好;随着包合温度及挥发油与β-CD量的比例的增加，包合率和包合收得率均呈先增后降的趋势。
3.2 正交试验 按单因素试验的结果，将加水倍量固定为加入9倍β-CD量蒸馏水，以包合物的包合率、收得率及综合评分为指标，以包合温度、包合时间、挥发油与β-CD比例为考察因素，正交试验设计优选工艺，因素水平见表4，采用L9(34)正交表安排试验，结果见表5。表4 正交试验设计因素水平表分别以包合率及综合评分为指标对试验结果进行直观分析和方差分析，结果见表6、表7。表6 以包合率为指标的正交试验方差分析表7 以综合评分为指标的正交试验方差分析
以包合率为指标的正交试验方差分析表明，包合温度对包合效果的影响差异有显著性(P<0.05)。以综合评分为指标的正交试验结果表明，包合温度对包合效果的影响差异有显著性(P<0.05)。对包合效果影响大小的顺序依次为B(包合温度)>A(油料比)>C(包合时间)，由极差直观分析确定最佳包合工艺为A3B1C3，即挥发油(ml)：β-环糊精(g)为1∶7时，在40℃下包合90min。
3.3 验证试验 按正交试验所得的最佳包合工艺条件A3B1C3，对挥发油的包合进行验证试验，结果表明：验证试验与正交试验各次结果比较，包合率及包合收得率的综合评分与正交试验中各结果相当，表明优选包合工艺稳定、可行。
4 讨论
通过试验得到，用以上方法进行新塔花挥发油的提取能明显提高挥发油的提取率。环糊精包合能使挥发油的稳定性得到改善。同时，通过试验进一步显示，在室温下包合效果高于其他温度条件下，这是因为在室温下β-环糊精溶解度高与挥发油接触多，易于将挥发油包合，同时又避免高温搅拌引起挥发油的逸散，从而进一步提高了挥发油包合的效率。
【参考文献】
1 刘勇民,沙吾提·伊克木.维吾尔药志.乌鲁木齐:新疆人民出版社,1986：363-357.
2 周晓英,武新华,刘波.唇香草中挥发油的理化性质研究.新疆医科大学学报,2003,26(3)：259-260.
3 宋洪涛,颜秀涛,张群.肉桂油β-环糊精包合物的制备工艺研究.中草药,2000,31(11):818-820.
4 宋浩亮,罗华菲,杜文华.β-环糊精包合挥发油工艺研究.新疆中医药,2002,20(6):11-12.
作者单位：830091 新疆乌鲁木齐，武警新疆总队医院