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【关键词】 HPLC法 美洛昔康片 含量
美洛昔康为非甾体抗炎药，收载于中国药典2010版二部，其含量测定方法[1]采用对照品紫外分光光度法。USP[2](2011)及BP[3](2011)均采用HPLC法测定其含量。本文采用高效液相色谱法测定其含量，操作简便、快捷、结果准确。
1 仪器与试药
Agilent1200高效液相色谱仪(紫外检测器)。 美洛昔康片(A1、A2，市售);美洛昔康对照品(100679-200401)，由中国药品生物检定所提供;溶剂：40%的甲醇溶液100ml，加0.4mol/L氢氧化钠溶液6ml混匀; 甲醇为：色谱纯， 其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件及系统适用性
高效液相色谱柱为Thermo C18 (5μm， 4.6mm×100mm)不锈钢柱，以0.1%磷酸二氢钾溶液(用氢氧化钠试液调pH至6.0)-甲醇(52：48)为流动相; 检测波长为361nm。 流速：0.8ml/min;柱温：40℃。进样量：5μl。美洛昔康的保留时间为5min，理论板数为11000，主峰与其他峰的分离度为6.2。见图1。
2.2 线性关系
精密称取美洛昔康对照品10.12mg，置100ml容量瓶中，加溶剂适量，振摇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，为贮备液，分别精密量取贮备液2.5ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、7.5ml，置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。在上述色谱条件下，分别进样5μl(n=3)，记录色谱图，以浓度X为横坐标，峰面积Y 为纵坐标，计算线性回归方程：Y=7257X-395，r=1.0000。 图1 系统适用性图谱
2.3 加样回收率试验
取已知含量的样品3份(A1)，精密称定，按“2.6”项下制备供试品溶液，加入高、中、低3个浓度的对照品溶液，摇匀，按“2.1”项下色谱条件测定,每份样品分别进样5μl(相当于标示量的80%,100%,120%),计算回收率，结果低、中、高浓度回收率(n=3)分别为99.96%(RSD=0.3%)、100.56%(RSD=0.75%)和100.4%(RSD=0.66%),平均回收率(n=9)为100.3%, RSD=0.23%。
2.4 稳定性试验
取“2.6”项下同一份供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定,分别于0、1、4、8、24h进样分析，峰面积基本不变(RSD为0.8%)，结果表明：该溶液稳定性良好，能满足测定要求。
2.5 精密度试验
取含量测定项下供试品溶液(批号A1)，连续5次进样测定, 主峰面积的RSD为0.1 %。
2.6 含量测定
取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于美洛昔康10mg)置100ml量瓶中，加溶剂适量振摇使溶解，加溶剂稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液5.0ml，置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，为供试品溶液;另精密量取“2.2”项下对照品贮备液5.0ml，置50ml量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，为对照品溶液;分别取供试品溶液和对照品溶液各5μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算含量，测定结果见表1。表1 样品测定结果
3 讨论
检测波长的确定：用流动相稀释成含美洛昔康浓度为10μg/ml的溶液，在220~380nm范围内扫描，在271nm和360nm波长处均有较大吸收，361nm波长处的响应值比271nm波长处大，确定361nm为测定波长。本文采用高效液相色谱法测定其的含量 具有简单、灵敏度高、专属性强、准确可靠等优点。
【参考文献】
1 国家药典委员会.中国药典，(2010年版).北京：中国医药科技出版社，2010：611.
2 美国药典委员会.美国药典.2011:3407.
3 英国药典委员会.英国药典.2011：2973.