RP-HPLC法测定盐酸布比卡因注射液的含量

【摘要】  目的 建立以反相高效液相色谱法测定盐酸布比卡因注射液含量的方法。方法 色谱柱为VP-ODS C18，流动相为乙腈-磷酸盐缓冲液(65：35)，检测波长为263nm，流速为1.0ml/min。结果 盐酸布比卡因在303.492~708.148μg/ml范围内，线性关系良好(r=1.0000)，平均回收率为99.36%，RSD为0.51%。结论 该方法快速、简单，准确可靠，专属性强，可用于盐酸布比卡因注射液的含量测定。

【关键词】  盐酸布比卡因;高效液相法;含量测定

　　盐酸布比卡因注射液是常用的酰胺类长效局部麻醉药。《中国药典》采用氯仿多次萃取浓缩后，再用非水滴定法测定含量[1]。该法操作繁琐费时，工作量大，且使用大量有毒有害有机溶剂。本文参考国内有关文献[2]及美国药典，采用反相高效液相色谱法直接测定盐酸布比卡因注射液的含量，方法简便快捷，专属性强。为企业内部质控提供方法学参考。

　　1 仪器与试剂

　　岛津LC-10AT高效液相色谱仪，岛津SPD-10A紫外检测器;N2000色谱数据工作站(浙江大学智能信息工程研究所);盐酸布比卡因对照品(上海三维药业有限公司，批号：S20061002，含量99.8%);盐酸布比卡因注射液(标示量：5ml:37.5mg，生产企业：上海三维药业有限公司，批号：070302、070303、070304);乙腈为色谱纯;磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸为分析纯;水为重蒸水。

　　2 方法

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱：Shim-Pack VP-ODS C18柱(150mm×4.6mm I.D);流动相:乙腈-磷酸盐缓冲液(取磷酸二氢钾1.94g，磷酸氢二钾2.48g，加水1000ml使溶解，摇匀，用1mol/L磷酸溶液调节pH值为6.8)(65：35);检测波长为263nm，流速为1.0ml/min。理论板数按盐酸布比卡因峰计算为14977(图1)[3]。

　　2.2 对照品溶液的制备

　　精密称取105℃干燥至恒重的盐酸布比卡因对照品133.46mg于50ml量瓶中，加水使溶解，稀释至刻度，摇匀，得浓度为2.5291 mg/ml的对照品溶液。

　　2.3 供试品溶液的制备

　　精密量取盐酸布比卡因注射液适量(约相当于盐酸布比卡因12.5mg)，置25ml容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，得供试品溶液。

　　2.4 标准曲线的绘制

　　精密移取“2.2”项下浓度为2.5291 mg/ml的对照品溶液3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml、7.0ml分别置于25ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。得浓度分别为303.492μg/ml、404.656μg/ml、505.82μg/ml、606.98μg/ml、708.148μg/ml。分别进样20μl分析，记录峰面积。以峰面积(A)对浓度(C)进行线性回归，得回归方程：A =1.39358C + 18.14 (R=1.0000，n=5)。结果表明：盐酸布比卡因的浓度在303.492~708.148μg/ml范围内线性良好。

　　2.5 精密度试验

　　取盐酸布比卡因工作对照品溶液(浓度为：505.82μg/ml)，平行进样6次。得峰面积分别为722.3，723.8，724.6，720.5，724.3，724.7。计算得RSD=0.23%(n=6)。结果表明：该系统精密度良好。

　　2.6 稳定性试验

　　取按“2.3”项下制得供试品溶液(批号：070303)，分别放置0、6、12、18、24h后测定，结果见表1。图1 盐酸布比卡因理论板数图表1 溶液稳定性测定结果

　　2.7 回收率试验

　　为考察本法测定盐酸布比卡因含量的准确度，我们采用空白加样回收的方法，按盐酸布比卡因标示含量的70%、85%、100%、115%、130%进行回收试验。平行吸取本品空白3.5ml置于50ml量瓶中10份，分别向其中每份加入盐酸布比卡因对照品17.50mg、17.45mg、21.25mg、21.05mg、25.00mg、24.85mg、28.75mg、29.00mg、32.50mg、32.35mg，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。取上述溶液分别进样测定，并计算回收率，结果见表2。

　　2.8 样品含量测定

　　取盐酸布比卡因注射液样品三批，按“2.3”项下制得供试品溶液，采用HPLC法进行含量测定。同时对三批样品，按《中国药典》提供的非水滴定法进行含量测定[1]。结果见表3。表2 回收率试验结果表3 三批样品盐酸布比卡因含量测定结果比较

　　3 讨论

　　本文是在参照《美国药典》盐酸布比卡因注射液含量测定方法基础建立的。原方法采用内标法，以邻苯二甲酸二丁酯为标准物[3]。本实验改为简便的外标法，结果证明方法可行，操作简便、测定快速，是测定盐酸布比卡因注射液含量理想的方法。供试品含量测定对照试验中，HPLC法较《中国药典》提供容量法测得结果略高，可能与容量法需经多次提取处理会带来一定的损失有关，但差异无显著性(P>0.05)。此外，市售冰醋酸含有少量水分，为避免水分存在对滴定的影响，一般需加入少量的醋酐，使其与水反应转变成醋酸[4]。

【参考文献】
  　1 国家药典委员会编.中华人民共和国药典(二部).2005年版.北京：化学工业出版社,2005：478.

　　2 高素英，宋小莉.HPLC法测定盐酸布比卡因注射液的含量.中国药品标准，2004，5(2)：40-41.

　　3 The United States Pharmacopeial Convention.The United States Pharmacopeial. USP30：1563.

　　4 余穗萍，张卫中.盐酸布比卡因注射液含量测定方法改进.江苏化工,1995，23(4)：41-49.