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【摘要】 目的 探讨内皮素-1（endothelin-1，ET-1）与门静脉高压性胃病的关系。方法 采用门静脉部分结扎制备肝前性门静脉高压症模型，模型制备完毕，测定门静脉压力;放射免疫法测定胃粘膜组织ET-1含量;免疫组化染色观察ET-1在胃粘膜组织中的定位及表达。结果 模型组门静脉压力显著升高（17.38±2.19）vs（4.12±1.28mmHg，P<0.05）;门静脉高压症大鼠胃粘膜组织中的ET-1含量（27.85±9.29）vs（6.32±1.13pg/g，P<0.05）以及免疫组化ET-1的表达水平较对照组均显著升高。结论 ET-1在门静脉高压性胃病的发病机制中起重要作用。
关键词 内皮素-1 门静脉高压性胃病 大鼠
Effect of endothelin-1in gastric mucosa of PPVL rats
Zhang Xiefu，Xu Bing
Department of Surgery，the First Affliated Hospital of Zhengzhou University，Zhengzhou450052
【Abstract】 Objective To investigate the role of endothelin-1（ET-1）in thepathogenesis of portal hyperˉtensive gastropathy（PHG）.Methods Portal hypertensive gastropathy model was induced by partial portal vein ligation（PPVL）.After the model was established，portal pressure was measured.Gastric tissue concentration of ET-1was deˉtermined with enzyme immunoassay.ET-1location and expression in the gastric mucosa was observed by immunohisˉtochemistry.Results Portal pressure was significantly increased in PPVL rats than those of control group（17.38±2.19vs4.12±1.28mmHg）.The gastric tissue concentration of ET-1and the ET-1expression in the gastric mucosa were significantly increased in PPVL rats.Conclusion The increased expression of ET-1may play an important role in the pathogenesis of portal hypertensive gastropathy.
Key words endothelin-1 portal hypertensive gastropathy rat
门静脉高压性胃病（portal hypertensive gastropathy，PHG）是门静脉高压症时的固有现象，事实上门静脉高压性胃病是上消化道出血的另一种常见原因，大约占总数的20%～40%，但其发病机制尚未完全清楚。本研究旨在探讨内皮素-1在PHG发病机制中的作用。
1 材料与方法
1.1 主要试剂 ET-1放免试剂盒，北方生物技术研究所。兔抗ET-1抗体、ABC免疫组化染色试剂盒、DAB显色试剂盒，均购自博士德生物工程有限公司。
1.2 实验分组及动物模型制备 采用雄性SD大鼠，体重370～400g，清洁级。由郑州大学实验动物室提供。参照文献方法 ［1］ 制备门静脉部分结扎模型:（PPVL，n=12），另设假手术对照组:（SO，n=12）。
1.3 门静脉压力测定及胃粘膜组织处理 PPVL成模14天后，禁食12h，1%戊巴比妥钠50mg/kg腹腔注射麻醉。开腹，以22GA一次性静脉留置针头穿刺门静脉壁，拔除针芯，留置软管，另一端连接八导生理仪测量门静脉压力;纵行剖开大鼠后胃粘膜组织，取一半尽快放入1N HAC1ml略做研磨，然后在100℃水浴中煮沸10min，匀浆。4℃，3000g离心15min，取上清液-20℃以下保存，以放射免疫法测定后胃壁组织匀浆的ET-1含量;另一半后胃粘膜组织，福尔马林液固定，常规ABC免疫组化染色，DAB显色，ET-1抗体滴度为1:1000。
1.4 统计学方法 采用SPSS统计软件对数据进行分析处理，计量资料采用（均数±标准差）表示，两组间均数比较采用t检验。
2 结果
2.1 门静脉压力测定结果 见表1。
表1 门静脉压力测定结果（mmHg）
注:与假手术对照组相比 ˇ P<0.05
2.2 胃壁组织匀浆ET-1含量的测定结果 见表2。
表2 胃壁组织匀浆ET-1含量的测定结果
注:与假手术对照组相比 ˇ P<0.05
2.3 免疫组化染色结果 见图1、2。ET-1分布于胃粘膜上皮细胞及粘膜下层血管内皮细胞的胞浆内，阳性染色部位呈棕黄色。PPVL模型组染色强阳性（++～+++），假手术对照组染色弱阳性（+）。（+阳性染色占粘膜层的1/3以下，++阳性染色占粘膜层的1/3～2/3，+++阳性染色占粘膜层的2/3以上）。
3 讨论
食道胃底静脉曲张长期以来被认为是门静脉高压症时上消化道出血的主要原因，事实上门静脉高压性胃病是上消化道出血的另一种常见原因，大约占出血原因的20%～40% ［2］ 。门静脉高压性胃病的内窥镜大体特征为镶嵌或蛇皮样红色斑点。最初，此种胃粘膜出血被认为是胃粘膜的炎症反应———侵蚀性胃炎。但随后形态学研究表明这些病变的特点是粘膜和粘膜下的微血管扩张，但无明显炎症反应，而且减压性分流手术能够减轻门静脉高压性胃病。因此命名为充血性胃病或门静脉高压性胃病 ［3］ 。
ET-1是已知血管收缩性最强的物质同时具有多功能效应，它在门静脉高压性胃病形成机制中的作用近年来成为研究重点。ET-1依据其受体的不同，而发挥不同的效应。ET-1受体分为两种:ETA受体、ETB受体。ETA受体位于血管平滑肌细胞介导血管收缩。ETB受体主要位于内皮细胞介导NO及前列环素的产生 ［4］ ;Ohta ［5］ 发现在门静脉高压大鼠模型，胃粘膜中ET-1mRNA表达及蛋白质水平显著升高，免疫荧光检测ET-1主要位于胃粘膜及胃粘膜下血管内皮。我们的研究发现与文献报道一致:PPVL大鼠胃粘膜组织中的ET-1含量及ET-1免疫组化表达水平均显著升高，ET-1阳性部位主要位于胃粘膜上皮及胃粘膜下血管。PPVL大鼠胃壁组织ET-1过度表达的确切机制尚不清楚，可能与门静脉高压症时持续增加的胃粘膜血流量以及一系列细胞因子的激活有关;Michida ［6］ 报道缺血再灌注后大鼠血浆和胃粘膜的ET-1浓度明显升高，并可导致胃粘膜的损伤。再灌注之前给予ETA受体拮抗剂（BQ-123），可以降低剂量依赖性胃粘膜的损伤，并且能够提高胃粘膜血流量及氧和血红蛋白含量。门静脉高压性胃病的发病机制可能与此类似，本实验研究推测:升高的门静脉压力 引起胃粘膜血流量持续增加，并进一步激活肿瘤坏死因子（TNF）、一氧化氮（NO）、血管内皮生长因子（VEGF）、前列腺素、内皮素（ET-1）等细胞因子，细胞因子彼此之间相互作用，损害胃粘膜的微循环，提高胃粘膜通透性，使其对损伤的敏感性增加，最后导致门静脉高压性胃病的形成。综上所述，ET-1在门静脉高压性胃病发生中起重要作用。同时提示ETA受体拮抗剂有望成为改善门静脉高压性胃病的一种新的治疗方法。（本文图片见附页2）
参考文献
1 Vorobioff J，Bredfeldt JE，Groszmann RJ.Hyperdynamic circulation in portal hypertensive rat model;a primary factor for maintenance of chronˉic portal hypertention.Am J Physiol，1983，244:52-57.
2 Primignani M，Carpinelli L，Preatoni P，et al.Natural history of portal hypertensive gastropathy in patients with liver cirrhosis.Gastroenteroloˉgy，2000，119（1）:181-187.
3 Baxter J，Dobbs B.Portal hypertensive gastropathy.J Gastroenterol Hepˉatol，1988，3:635-644.
4 Yanagisawa M，Kurihara H，Kimura S，et al.A novel potent vasoconstricˉtorpeptide produced by vascular endothelial cells.Nature（Lond.），1988，332:411-415.
5 Ohta M，Nguyen TH，Tarnawski AS，et al.Overexpression of endothelin-1mRNA and protein in portal hypertensive gastric mucosa of rats:a key to increased susceptibility to damage?Surgery，1997，122（5）:936-942.
6 Michida T，Kawano S，Masuda E，et al.Role of endothelin-1in hemorˉrhagic shock-induced gastric mucosal injury in rats.Gastroenterology，1994，106（4）:988-993.
作者单位:450052河南郑州郑州大学第一附属医院普外科
（收稿日期:2004-02-25）
（编辑海 涛）