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【摘要】 目的 观察益胃消增胶囊对慢性萎缩性胃炎（CAG）模型大鼠胃粘膜病理组织学的影响。方法 将78只Wistar雄性大鼠随机分为6组:正常对照组、模型组、自然恢复组、维酶素对照组、益胃消增胶囊低剂量组及益胃消增胶囊高剂量组。应用2%水杨酸溶液及150g/L、55℃热盐水灌胃、20mmol/L脱氧胆酸钠溶液自由饮用方法对正常对照组以外的其他各组大鼠进行造模60天，造模成功后，将模型组大鼠处死，留取胃粘膜标本待测，另五组大鼠施加相关因素30天后处死，同样留取胃粘膜标本，分别用光镜和电镜观察胃粘膜组织学方面的改变。结果 益胃消增胶囊治疗组大鼠胃粘膜炎症、萎缩、肠化等各项病理指标与模型组比较P均<0.01，不典型增生的改变与模型组比较P均<0.05，病理组织学改善明显。结论 益胃消增胶囊能够消除胃粘膜炎症，并能改善、甚至部分逆转CAG已经形成的萎缩、肠化及不典型增生等，这提示本方能有效治疗CAG，并能防止其癌变。
关键词 慢性萎缩性胃炎 病理组织学 益胃消增胶囊
The effect of YiWeiXiaoZeng Capsule on gastricmucosa pathological history in rats model of chronic atrophic gastritis
Gong Zhangyue，Fan Ming，Gong Qimiao，et al.
The First Affiliated Hospital of Heilongjiang University of TCM，Haerbin150040.
【Abstract】 Objective To observe the effect of YiWeiXiaoZeng Capsule（YWC）on gastric mucosa pathologiˉcal histology in rats model of chronic atrophic gastritis.Methods Seventy eight male Wistar rats were randomly diˉvided into six groups:normal control group，model group，natural recovery group，WeiMeiSu control group，low-dose YWC group and high-dose YWC group.CAG model was established by synthetical method:salicylas and high-salt hot water and sodium deoxycholate we
re given，et al.All the factors were given for sixty days.When the model was established successfully，model group rats were sacrificed，gastric mucosa were collected，and other rats were treated with different medicines.After a month，all the rats were sacrificed and gastric mucosa were collected to obˉserve the histologic mucosa changes by microscopy.Results Compared to model group，significant statistics difference（P<0.01）in pathologic changes of gastric mucosa was found between YWC treated group and model group.Concluˉsion YiWeiXiaoZeng Capsule can scavenge，even can turnover partly the pathologic changes of gastric mucosa.It suggests YiWeiXiaoZeng Capsule can treat CAG effectively and can prevent its progress.
Key words chronic atrophic gastritis（CAG） pathological histology YiWeiXiaoZeng Capsule
慢性萎缩性胃炎（CAG）是一种常见消化系统疾病。1978年WHO将其列为胃癌的癌前状态，而在此基础上伴发有不完全肠腺化生（IM）和（或）中、重度不典型增生（Dys）则被视为癌前病变。本研究是以观察益胃消增胶囊对CAG模型大鼠胃粘膜病理组织学的影响，为其疗效提供科学的理论依据，并进一步挖掘其临床应用价值。
1 实验材料
1.1 实验动物 78只健康、性成熟雄性Wistar大鼠，（150±10）g，由黑龙江中医药大学动物实验中心提供。
1.2 实验药物及试剂 益胃消增胶囊（黄芪、丹参、三七粉、白芍、元胡、甘草等），由黑龙江中医药大学附属第一医院制剂室提供，分别配成生药浓度为1g/ml和2g/ml的混悬液;脱氧胆酸钠（北京市海淀区微生物培养基制品厂，批号:011108）配成20mmol/L的脱氧胆酸钠溶液;氯化钠光复精细化工研究所，批号:020811）配成150g/L的氯化钠溶液，临用时加热至55℃;另配0.9%的氯化钠溶液;水杨酸（天津市科密欧化学试剂开发中心，批号:030109）配成浓度为2%的水杨酸溶液;维酶素片（北海阳光药业有限公司，批号:030716）研末，配成0.1g/ml的混悬液。
2 实验方法
2.1 动物分组 将78只大鼠随机分为6组:正常对照组（Ⅰ组）、模型组（Ⅱ组）、自然恢复组（Ⅲ组）、维酶素对照组（Ⅳ组）、益胃消增胶囊低剂量组（Ⅴ组）及益胃消增胶囊高剂量组（Ⅵ组），每组13只，除Ⅰ组外，其余大鼠给予造模处理，造模过程中Ⅱ～Ⅵ组各死亡1只，多因衰竭而死，Ⅰ组大鼠没有死亡。
2.2 动物模型的建立及处理措施 模型建立:参阅大量文献资料 ［1～12］ ，结合中西医理论，具体的造模方法为:150g/L、55℃热盐水，10ml·kg -1 ·d -1 ，灌胃;2%水杨酸溶液10ml·Kg -1 ·d -1 ，灌胃;均为1次/d;20mmol/L脱氧胆酸钠溶液，自由饮用;配以饥饱失常处理，即2d饱食，1d禁食。按上述方法造模60天。处理措施:60天后，随机杀取2只模型组大鼠，取胃体、胃窦部标本，经光镜证实造模成功后，杀取模型组另10只大鼠，留取胃体、胃窦部标本待测各项观察指标。第Ⅰ组大鼠仍然充足供食及清洁自来水，Ⅲ～Ⅴ组大鼠则停止造模，第Ⅲ组大鼠开始给予自配生理盐水10ml·kg -1 ·d -1 ，灌胃;第Ⅳ组大鼠给予0.1g/ml维酶素混悬液10ml·kg -1 ·d -1 ，灌胃;第Ⅴ组给予1g/ml的益胃消增胶囊混悬液以10ml·kg -1 ·d -1 ，灌胃;第Ⅵ组给予2g/ml的益胃消增胶囊混悬液以10ml·kg -1 ·d -1 ，灌胃;均1次/d，连续用药30天。
2.3 取材与指标检测 处死大鼠后立即剖腹取胃，沿胃大弯剪开，于装有生理盐水的烧杯中漂洗干净、摊平。
2.4 镜下观察
2.4.1 光学显微镜观察 在胃体及胃窦部小弯侧切取1.5 cm×1.0cm组织块，立即投入10%甲醛溶液中固定，经梯度酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋切片，常规HE染色，置Olympus BX60型光镜下观察，并进行显微摄影。
2.4.2 电子显微镜观察 在胃体及胃窦部小弯侧切取胃粘膜1mm×1mm大小各2块，迅速固定于2.5%戊二醛内，置4℃冰箱。充分固定后抽取益胃消增胶囊高剂量组2只，其余各组各1只，用磷酸缓冲液充分冲洗，再用锇酸后固定，丙酮逐级脱水，Epon821环氧树脂包埋，切片，光镜下
选取病变明显部位，作超薄切片，经醋酸铀和柠檬酸铅双重 染色后，Philips Tecnai G 2 型透射电镜下观察。
2.5 统计学方法 实验数据（积分）采用均数±标准差（ˉx±s）进行统计，用SPSS统计软件进行t检验统计分析，以P<0.05差异有显著性，以P<0.01差异有非常显著性。
3 实验结果
3.1 光学显微镜所见 正常组胃粘膜上皮完整，腺体排列规则，粘膜固有层未见炎细胞或仅见少数淋巴细胞及嗜酸性粒细胞散在，无充血、水肿及糜烂，粘膜肌层较薄;模型组粘膜不完整，粘膜变薄或糜烂，表面可见脱落的变性、坏死的上皮细胞，粘膜腺体有不同程度的萎缩或消失，多数腺体结构排列紊乱，见核分裂像，核大深染，核浆比例失调而呈现有不同程度的异型性，部分腺体呈囊状扩张。扩张的腺体在胃体及胃窦部均可见，其上皮呈柱状。粘膜固有层内见较多淋巴细胞、浆细胞、少数嗜酸性粒细胞及嗜中性粒细胞浸润。重者淋巴细胞呈灶性浸润，形成淋巴滤泡。粘膜肌层增厚，厚薄不均，并向固有膜伸延，在腺体之间见较多平滑肌纤维。并伴见IM及Dys。自然恢复组病变类似模型组，而益胃消增胶囊高剂量组则表现为轻度CSG表现或接近正常组，低剂量组病变则重于高剂量组，但明显好于维酶素对照组，而维酶素对照组则优于自然恢复组。各组的具体情况见表1、表2。（注:各表均是按病变程度无、轻、中、重进行积分，它们的积分分别为0、1、2、3分，其分级标准参见2000年5月井冈山慢性胃炎的病理诊断标准。）
表1 各组大鼠胃粘膜慢性炎症、萎缩的情况（略）
注:与Ⅱ组比较， ˇ P<0.01;与Ⅱ组比较， ˇˇ P>0.05;与Ⅳ组比较， ▲ P<0.05;与Ⅲ组比较， ▲▲ P<0.05
表2 各组大鼠胃粘膜肠化、不典型增生的情况（略）
注:与Ⅱ组比较， ˇ P<0.01;与Ⅱ组比较， ˇˇ P>0.05;与Ⅳ组比较， ▲ P<0.05;与Ⅱ组比较， ▲▲ P<0.05
3.2 电子显微镜所见 正常组胃粘膜上皮细胞微绒毛排列整齐密集，细胞器丰富，线粒体及粗面内质网等均未见异常，分泌颗粒未见减少。模型组上皮细胞普遍发生退变，细胞游离缘微绒毛呈明显刷状缘或稀疏、短小、脱落，细胞间隙增宽，细胞间质内可见多个大小不等的杯状细胞。许多壁细胞、主细胞的线粒体大小不一，嵴稀疏、断裂或消失，有 的出现了空化或肿胀，有的线粒体膜已溶解，线粒体破碎，部分粗面内质网出现断裂，有的粗面内质网扩张呈囊泡状，脱颗粒明显，微管泡系统也见扩张，高尔基复合体萎缩变小，基质苍白、疏松，次级溶酶体增多，分泌颗粒减少。粘液分泌细胞有的已退变肿胀。见到少数内分泌细胞，多已有损伤改变，内分泌颗粒依然存在，线粒体肿胀，细胞表面微绒毛消失或非常稀少。间质内有淋巴细胞、浆细胞、中性粒细胞及嗜酸性粒细胞浸润，毛细血管内皮细胞肿胀，有的胞浆内形成大空泡，有的毛细血管内皮细胞已死亡、破碎、脱落，血管壁断裂不连续，自然恢复组的情况与此类似。益胃消增胶囊高剂量组上皮细胞微绒毛排列尚整齐，细胞间隙未见明显增宽，细胞浆内细胞器丰富、结构正常，线粒体大小比较规整，嵴断裂较少，粗面内质网及微管泡系统未见明显扩张，分泌颗粒接近正常，间质内尚可见少许淋巴细胞、浆细胞。低剂量组及维酶素对照组细胞损害虽不如模型组明显，但均比高剂量组为严重，而低剂量组要好于维酶素对照组。
4 讨论
世界范围内 ［13］ ，胃癌的患病率仅次于肺癌，每年死亡数占全部癌症死亡数的第二位，我国是胃癌的高发区，其死亡数更是高居癌症死亡数之首，而从慢性浅表性胃炎→慢性萎缩性胃炎→肠上皮化生→不典型增生→早期胃癌→进展期胃癌，已经成为从癌前到癌的一大模式，并且有资料显示 ［14，15］ :CAG的癌变率每年约1%，据长期随访，伴有IM及Dys的CAG癌变率在10%左右（8.6%～13%），而大部分胃癌患者伴有CAG。因此，积极治疗CAG也是预防其癌变，减少胃癌发病率的有效手段，尤其是对其癌前病变的治疗更为关键。目前西医尚无理想的治疗方法，而中医药对该病的治疗不仅积累了丰富的临床经验，而且大量的临床报道表明，中医药治疗，疗效肯定，不仅可以逆转腺体的萎缩，甚至可使不完全肠腺化生及不典型增生逆转，因此一直受到医药学界的广泛关注。益胃消增胶囊就是其中的有效方剂之一，其临床疗效显著 ［16］ ，本研究是通过动物模型来进一步探究其机理。
CAG属于中医学“胃脘痛”、“痞满”等范畴，我们认为其病因病机不外“滞”、“虚”二字，由滞及虚。滞乃气滞，主要因肝失条达，肝气郁滞，也可兼夹湿邪中阻，阻滞气机;肝气不舒，久则木郁克土，终以肝胃同病;气滞血行不畅，胃络瘀血;而中焦气滞、血瘀、湿阻日久，必致脾胃受损终至脾胃虚弱。在治疗上，我们虚实并重，攻补兼施，把补脾与理气活血作为治疗CAG的关键，以健脾补气、活血化瘀、疏肝和胃为其治疗大法，辨证处方而成益胃消增胶囊。
从表1、表2中可见，益胃消增胶囊高剂量组与模型组、自然恢复组、维酶素对照组相比较，均为P<0.05（或P<0.01），这表明高剂量的益胃消增胶囊能有效地改善、部分逆转其病理改变，效果优于维酶素，而高、低剂量组间P>0.05，提示高、低剂量组在改善病理结果方面未见差异;低剂量组与模型组、自然恢复组间均P<0.05，表明低剂量的益胃消增胶囊也能改善胃粘膜病理改变;各表中维酶素对照组与模型组间均>0.05，这提示本实验中维酶素并无改善组织学的作用;而模型组与生理盐水对照组间均P >0.05，提示了CAG的病理改变未见自我恢复趋势;电镜下所见线粒体、粗面内质网等细胞超微结构的改变也与这些结论保持了一致。
本实验提示益胃消增胶囊能够消除胃粘膜炎症，并能改善、甚至部分逆转CAG已经形成的萎缩、肠化及不典型增生等胃粘膜病理组织学改变，这提示本方能有效治疗CAG，并能防止其癌变。具体机制可能与其能够有效清除自由基、杀灭幽门螺杆菌、改善胃粘膜微循环、参与细胞的增殖与凋亡及基因的表达与调控等有关。
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（收稿日期:2004-08-28） （编辑文 川）
作者单位:150040黑龙江中医药大学附属第一医院
150040黑龙江中医药大学