抗病毒三号对小鼠免疫功能影响的研究

　　【摘要】 目的 探讨抗病毒三号对免疫功能低下小鼠免疫功能的影响。方法 将60只NIH小鼠随机分六小组，三小组为一大组，以环磷酰胺注射NIH小鼠腹部制造免疫功能低下模型，同时以抗病毒三号治疗，并测定各组相关免疫指标。结果 抗病毒三号组的廓清指数、血清IL-2水平与模型组的比较，差异无显著性;抗病毒三号组血清IL-2水平与正常对照组相比较，差异无显著性。抗病毒三号组廓清指数与正常对照组相比，差异有显著性。结论 抗病毒三号能完全恢复机体的非特异性免疫功能，部分地恢复了特异性免疫功能。

    关键词 抗病毒三号 特异性免疫应答 非特异性免疫应答
      
    
　　The study of influence of Antiviral Prescription No.3on the immunity of mice  

　　Deng Jiaqin，Fan Ruiqiang

    Department of Dermatology，Guangdong TCM Hospital，Guangdong510000.

    【Abstract】 Objective To study the influence of Antiviral Prescription No.3on NIH mice with low immuniˉty.Methods 60mice were randomly divided into six groups and the animal models with low immunity were made by intraperitoneal cyclophosphamide.And Antiviral Prescription No.3initiated simultaneously.The relative immune inˉdices were measured ten days after treatment.Results Cleansing index and serum IL-2level were significantly difˉferent between Antiviral Prescription group and model group and the same to Cleansing index between antiviral preˉscription group and normal control.But the difference of serum IL-2level was not significant between Antiveral preˉscription group and normal control.Conclusion Antiviral Prescrirtion No.3can enhance nonspecific immunity entireˉly and specific immunity in part.

    Key words Antiviral Prescription No.3 specific immunity non-specific immunity  

　　抗病毒三号为广东省中医院皮肤科治疗复发性生殖器疱疹的经验方，主要由虎杖、紫草、茵陈、板蓝根、黄芪等中药组成，在临床应用中取得了一定的疗效，为了解抗病毒三号对机体免疫功能的影响，故进行以下实验。现报告如下。

　　1 实验材料

    1.1 药物 抗病毒三号浓缩颗粒剂:6g/包，由广东省中医院药剂科生产，试验时用蒸馏水稀释。注射用环磷酰胺:上海华联制药有限公司生产。0.9%氯化钠注射液:安徽华源制药有限公司生产。

    1.2 动物 NIH小白鼠60只，体重为18～22g，由广省医学实验动物中心提供，普通级动物饲养室饲养，室温20℃～26℃，相对湿度60%～80%，定时通风换气，每日光照12h。

　　1.3 试剂与仪器 印度墨汁:购于欧瑞卡生物技术有限公司，临用前先用超声波粉碎3min，以生理盐水5倍稀释备用。0.1%Na 2 CO 3 溶液100ml备用。小鼠IL-2ELISA试剂盒购自晶美公司。752型分光光度计（上海第三分析仪器厂生产）、MP120-1电子天平（上海第二天平仪器厂产品）。组织剪、眼科剪刀、镊子两套，小试管30支，1.5mlEppendorf管30个。1ml注射器20支备用。酶标仪（450nm）由晶美公司提供。精密加液器及吸头由广州中医药大学热带病研究所病毒室提供。

　　2 方法

　　2.1 分组并处理 将60只NIH小白鼠分成A、B两大组，各大组分成三小组，每小组均10只。六小组小鼠体重经处理，体重差异无显著性。A、B大组中的正常对照组:以生理盐水灌胃，每天0.2ml，连续灌胃10天;模型对照组:以生理盐水灌胃，每天0.2ml，连灌10天。并在第2、4、6天各鼠经腹腔注射环磷酰胺溶液50mg·10ml -1  ·kg -1  1次;抗病毒三号组:每天以蒸馏水稀释的抗病毒三号颗烂3g·kg -1  ·d -1  灌胃，连灌10天，并在第2、4、6天各鼠腹腔注射环磷酰胺溶液50mg·10ml -1  ·kg -1  1次。

　　2.2 具体操作步骤

    2.2.1 A组 最后一次给药后1h，分别由小鼠尾静脉准确注入用生理盐水5倍稀释的印度墨汁0.1ml/10g，于注入墨水后1min（T 1 ）及6min（T 2 ），分别自眼眶后静脉丛取血0.025ml，立刻吹入0.1%碳酸钠溶液2ml中，充分混匀。取血完毕以0.025ml正常小鼠血溶于2ml0.1%碳酸钠溶液校零，以752型紫外分光光度计在675nm处测定光密度（OD）。解剖小鼠，取肝脏和脾脏称重，计算廓清指数K值和肝脾吞筮系数α值。

    廓清指数K=IgOD 1 -IgOD 2  T 2 -T 1   ;吞噬系数α= 体重肝脾合重× 3 K

　　2.2.2 B组 在最后一次给药后5h，分别从各小鼠眶动脉取血1.5ml，并用经EDTA抗凝处理过的Eppendorf管分装并离心得血清备用，并按以下步骤进行（按试剂盒说明）:（1）从已经平衡至室温的密封袋中取出所需板条，在空白孔中仅加入底物和终止液。除空白孔外，分别将各小鼠的血清或标准品（1000μl/孔）加入抗体包被了的板条相应孔中，用封板胶纸封住反应孔，室温（18℃～25℃）孵育120min。（2）用稀释的洗涤液洗板4次。（3）加入检测剂工作液（1000μl/孔），封住板孔，室温（18℃～25℃）孵育60min。（4）用稀释的洗涤液洗板4次。（5）加入显色剂（1000μl/孔），避光室温10～15min。（6）加入终止液（1000μl/孔），混匀后即刻测量OD值（5min内）。（7）每个标准品和标本的OD值减去零孔 的OD值。（8）手工绘制标准曲线。以标准品浓度作横坐标，OD值作纵坐标，以平滑线连接各标准品的坐标点。通过标本的OD值可在标准曲线上查出其浓度。

    2.3 统计学方法 应用统计软件SPSS11.5进行处理，三组的均数两两比较采用单因素方差分析。

　　3 结果

    3.1 对小鼠血中碳粒廓清的影响 见表1。

　　表1 对小鼠血中碳粒廓清的影响 （略）

    3.2 各组小鼠血清IL-2水平比较 见表2。

　　表2 各小鼠血清IL-2水平比较    略

    4 讨论

　　网状内皮系统（RES，单核巨噬系统）是机体最重要的防御系统，它具有强大而迅速的吞噬廓清异体颗粒或某些可溶性异物的能力。静脉注射一定大小的颗粒物质，机体内的单核巨噬细胞会迅速吞噬颗粒，使其在血浆中的浓度降低，因此可通过其廓清率的测定了解整个单核巨噬系统的吞噬功能，炭粉廓清试验主要反映机体非特异性免疫功能 ［1，2］  。而IL-2大部分由T细胞产生，在机体的免疫应答中起重要作用，IL-2最重要的作用是诱导T淋巴前体表达IL-2Rβ并分泌低水平的IL-2，这种自分泌作用可促进胸腺细胞增殖。故在一定程度上，IL-2水平反映机体特异性免疫功能 ［3］  。

    环磷酰胺是一种免疫抑制剂，可用于免疫功能低下的造模 ［4，5］  。从以上的实验结果可知，两大组中，正常对照组与模型对照组在血清IL-2水平和廓清指数方面比较，差异均有显著性，表明造模成功。在A组中，抗病毒三号组与正常对照组在廓清指数方面比较，差异无显著性，表明抗病毒三号能完全恢复机体的非特异性免疫功能;在B组中，抗病毒三号组与正常对照组在IL-2水平方面比较，差 异有显著性，表明抗病毒三号在一定程度上恢复IL-2水平，即能部分恢复特异性免疫功能。

    中药抗病毒三号具有清热解毒利湿，益气健脾作用，现代药理研究表明，黄芪提取物中分子量20000～25000的半提纯物F 3 有提高免疫力作用 ［6］  ，类黄酮能升高T淋巴细胞数，提高LAK的活性，有调节免疫功能 ［7，8］  。这是该方提高免疫力的特质基础。综上所述，抗病毒三号既能增强机体特异性免疫应答功能又能增强机体非特异性免疫应答功能。

　　参考文献

    1 Stuart AE.Phagocytes in vitro，in“handbook of experimental immunoloˉgy”Cellular immunology.Weir DM，Blackwell Oxford London，1978，2:31.

    2 邓文龙.人参对网状内皮系统吞噬功能影响的研究.中医杂志，1983，24（7）:546.

    3 毕爱华.医学免疫学.北京:人民军医出版社，1995，66-67.

    4 B Bin Hafeez，I Ahmad.Prot ectiveeffect of Cassia occidentalis L.on cyˉclophosphamideinduced suppression of humoral immunity in mice.J Ethnopharmacol，2001，75（1）:13-18.

    5 MK Logani，A Anga.Effect of millimeter waves on cyclophosphamide inˉduced suppression of the immune system.Bioelectromagnetics，2002，23（8）:614-621.

    6 T Chu，WL Wong，GM Mavligit.Immunotherapy with Chinese medicinal herbs.ll.Reversal of cyclophosphamide-induced immune suppression by administration of fractionated Astragalus membranaceus in vivo.J Clin Lab Immunol，1988，25（3）:125-129.

    7 Liao，J Wen，X YU.Influence of flavonoid of Astragalus membranaceus’s stem and leaves on the function of cell mediated immunity in mice.Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi，June1，1999，19（6）:356-358.

　　8 Astragalus membranaceus.Monograph.Altern Med Rev，2003，8（1）:72-77.      

　　作者单位:510000广州广东省中医院皮肤科 

　　（收稿日期:2004-08-03） （编辑青 叶）