核因子κB、整合素αⅤβ3与卵巢癌血管生成关系的研究

　    【摘要】  目的  研究核因子κB（nuclear factor κB，NFκB）、整合素αⅤβ3与人卵巢上皮性癌(human ovarian epithelial carcinoma,hOEC)血管生成的关系。方法  原发性人卵巢上皮癌（hOEC）36份、卵巢良性肿瘤及正常卵巢各15份，应用免疫组化方法（ABC法）检测NFκB、整合素αⅤβ3、微血管密度（micro vessel density,MVD）在hOEC、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组织中的表达。结果  NFκB、αⅤβ3和MVD在 hOEC中的阳性表达率分别为7222%、6667%和（4398±3373）%，在良性肿瘤组织中的表达率分别2667%、667%和（1308±907）%；在正常卵巢组织中的表达率分别为1333%、0和（710±542）%，hOEC组各指标的阳性率均显著高于良性卵巢肿瘤组及正常对照组（P<005）。hOEC中NFκB、αⅤβ3与MVD的相关系数分别为06203、06661，各指标与MVD均显著相关（P<001）。NFκB阳性表达者αⅤβ3的阳性表达率为8571%，显著高于NFκB阴性表达者αⅤβ3的表达率（为25%）（P<005）。结论  NFκB、αⅤβ3在hOEC中高表达与其血管生成密切相关，NFκB可能通过上调αⅤβ3表达而起核心调节作用。

    【关键词】  核因子κB；整合素αⅤβ3；人卵巢上皮癌组织；血管生成

　　The study of relationships between nuclear factor κB,integrin αⅤβ3 and the angiogenesis of ovarian cancer

　　YANG LI-hua,LI Ma-lin.

　　Department of Obstetric and Gynecology,Second Affiliated Hospital,Kunming Medical College, Kunming 650101,China

　　【Abstract】  Objective  To study the relationships between （nuclear factor κB，NF κB）,integrin αⅤβ3 and the angiogenesis of human ovarian epithelial carcinoma (hOEC).
Methods 36 hOEC,15 ovarian benign tissues and normal ovary tissue were selected,and the expressions of NFκB,integrin αⅤβ3 and MVD in hOEC,benign and normal ovarian tissue groups were detected by immunohistochemical staining (ABC method).Results　The expression rates of NFκB, integrin αⅤβ3 and MVD in hOEC were 72.22%,6667% and (4398±3373)%,respectively,which were 2667%,667% and (1308±907)% in benign tumor and were 1333%,0 and (710±542)% in the normal ovarian tissue.The expression rates of NFκB,integrin αⅤβ3 and MVD in hOEC were higher significantly than those in ovarian benign tumor and normal ovarian tissue.The correlation coefficient between NFκB,integrin αⅤβ3 and MVD were 06203 and 06661 respectively. There were significant relationship between NFκB,bFGF and MVD(P<001).The expression of integrin αⅤβ3 in NFκB positive group were 8571%,higher significantly than that in NFκB-negative group.Conclusion  There were significant correlation between the high expressions of NFκB,integrin αⅤβ3 and the angiogenesis in hOEC,NFκB may play the key role by up regulate the expression of integrin αⅤβ3.

　　【Key words】   NFκB；integrin αⅤβ3；hOEC；angiogenesis
   
　　卵巢上皮癌的生长、转移和预后与肿瘤新血管生成密切相关，抑制肿瘤血管的生成在卵巢癌的治疗中具有巨大的潜力［1,2］，有研究报道核因子κB（nuclear factor κB,NFκB)可能与多种肿瘤血管生成有关［3～5］，但未见其与卵巢癌血管生成关系的报道。

　　本研究应用免疫组化方法（IHCA）检测卵巢上皮性癌（hOEC）组织、卵巢囊肿、正常卵巢组织中NFκB、整合素αⅤβ3的表达，同时定量检测MVD，以研究NFκB与卵巢癌血管生成及与整合素αⅤβ3表达的关系,以初步探讨NFκB在卵巢癌血管生成中的作用及其可能的机制。

　　1  材料与方法

　　11  标本来源  收集1995～2000年昆明医学院肿瘤医院病理科hOEC标本和良性卵巢肿瘤手术标本。标本经10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续切片，厚4μm，请2位病理学专家重新阅片，依据WHO规定标准判定病理学诊断、组织学类型和组织分级。hOEC 36份，术前均未接受化疗或放疗；卵巢良性肿瘤15份；同时选择因子宫肌瘤切除手术的15份正常卵巢组织作对照。

　　12  实验试剂  ABC免疫组化试剂盒为PharMingen international 产品，购自深圳晶美生物有限责任公司，批号（lot number,LN：AMF080），抗FⅧRag为Dako公司产品（LN：117），抗NFκB为美国Santa Cruz Biotechnology Inc产品（LN：sc-8008），均购自基因有限责任公司；抗整合素αⅤβ3单抗为PharMingen international 产品，购自深圳晶美生物有限责任公司（LN：18060620）；中性树胶为中国上海标本模型厂产品（LN：970125）

　　13  方法  常规免疫组化ABC法。

　　14   结果判定  NFκB、整合素αⅤβ3的表达根据免疫组化染色阳性的细胞比例判定。NFκB、整合素αⅤβ3均定位在胞核和胞浆，按5%以上细胞浆或细胞核呈棕黄色染色者为表达阳性，5%～30%细胞阳性染色定为（+），30%～50%细胞阳性染色定为（++），阳性细胞比例＞50%定为强阳性（+++），＜5%的细胞着色或细胞与背景一致不着色定为阴性（-）。MVD计数，先在低倍镜下全面观察切片，以确定MVD最高处。再在高倍镜下，记录5个视野内微血管数，取其平均值作为该病例的MVD值。

　　15  统计学方法  应用SPSS 90版统计软件包,各组NFκB、整合素αⅤβ3、MVD表达的差异应用卡方检验；NFκB、整合素αⅤβ3与MVD的相关性应用Spearn分析。检验水准为α=005。

　　2  结果

　　21  MVD在三组组织的表达  FⅧRag免疫组化阳性产物呈棕黄色细颗粒状，主要定位于肿瘤细胞间质的内皮细胞,呈环状或点状（图1）。hOEC、卵巢良性肿瘤及正常卵巢组MVD均数分别为4398±3373、1308±907、710±542,3组间比较,hOEC组显著高于卵巢良性肿瘤组及正常卵巢组织组（P<001），良性组与正常卵巢组差异无显著性（P>005）。

　　22  NFκB、整合素αⅤβ3在三组组织的表达  NFκB、整合素αⅤβ3免疫组化阳性产物均呈棕黄色细颗粒状，主要定位于肿瘤细胞胞浆和胞核，见图2、图3。hOEC组NFκB、整合素αⅤβ3的阳性率分别为7222%、6667%，各指标阳性率均显著高于卵巢良性肿瘤组及正常组（P<005）。见表1。

　　表1  NFκB、整合素αⅤβ3在三组组织的表达  （略）

　　23  hOEC组中NFκB、整合素αⅤβ3与MVD表达的相关性分析hOEC组中NFκB、αVβ3与MVD的相关系数分别为06203、06661，二者均与MVD显著正相关（P<001）。

　　24  hOEC中 NFκB与整合素αⅤβ3表达的关系  NFκB阳性表达患者整合素αⅤβ3阳性表达率为8571%,显著高于NFκB阴性表达者的αⅤβ3阳性表达率（2500%）(P<001)。

　　3  讨论

　　NFκB是一种多功能转录因子［5］，涉及到肿瘤血管生成的多个步骤［6～8］。Sharma［9］的研究表明整合素αⅤ是NFκB的靶分子，NFκB通过αⅤβ3抑制内皮细胞凋亡，从而促进肿瘤血管生成。

　　该研究中NFκB、整合素αⅤβ3与MVD的表达显著相关（P<005）。NFκB阳性表达者整合素αⅤβ3的阳性表达率显著高于NFκB阴性表达者的αⅤβ3阳性表达率（P<005）。

　　结合以往的报道，我们推测NFκB和hOEC血管生成显著相关，其为hOEC相关的一种癌蛋白，在hOEC的发生、发展中发挥重要的作用。NFκB可能通过对整合素αⅤβ3的正向调节作用，而促进卵巢癌血管生成，其不仅可作为hOEC血管生成的标记物，还可作为抗卵巢癌血管生成的治疗靶。

　　总之，NFκB、整合素αⅤβ3在hOEC中高表达与其血管生成密切相关，它可能通过上调整合素αⅤβ3的表达在卵巢癌血管生成中发挥核心调节作用。

　　（本文图片略）

　　【参考文献】

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　　2  Brown MR,Blanchette JO,Kohn EC. Angiogenesis in ovarian cancer. Baillieres Best Pract Res Clin Obstet Gynaecol 2000,14(6): 901-918.

　　3  Yoshida S,Ono M,Shono T,et al. Involvement of interleukin -8,vascular endothelial growth factor. And basic fibroblast growth factor in tumor necrosis factor alpha-dependent angiogenesis.Mol Cell Biol,1997,(17): 4015-4023.

　　4  Brand KS,Page G,Rogler A,et al. Activated transcription factor nuclear factor -kappa B is present in the atheroscerotic lesion.J Clin Invest，1996，97:1715-1722.

　　5  Stoltz RA,Abraham NG,Schwartzman ML. The role of NF-kappa B in the angiogenic response of coronary microvessel endothelial cells. Proc Natl Sci USA,1996,93:2832-2837.

　　6  Raziuddin A,Court D,Sarkar FH,et al.A c-erbB-2 promoter-specific nuclear matrix protein from human breast tumor tissues mediates NF-kappa DNA binding activity.J Biol Chem,1997，272:15715-15720.

　　7  Shattuck BRL,Richmond A.Enhanced degradation of I-kappa alpha contributes to endogenous activation of NF-kappa in Hs294T melanoma cells. Cancer Res,1997，57:3032-3039.

　　8  Siebenlist U,Franzoso G,Borozon K. Structure,regulation and f-unction of NF-kappa B. Annu Rev Cell Biol,1994,10:405-455.

　　9  Sharma HW,Higgins SK,Perez R,et al. A DNA motif present in alphaⅤ integrin promoter exhibits to bual binding preference to distinct transcription factors.Anticancer Res,1995,15(5B): 1857-1867.

　　作者单位：1  650101 云南昆明，昆明医学院第二附属医院妇产科

　　　　　　　2  650031 云南昆明，云南省药物药理重点实验室

　　（编辑：志  伟）