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[摘要] 目的 分析电化学发光与酶联两法检测海岛-HBs的比较免疫检测抗-HBs两法方法学的特点。方法 应用电化学发光(ECLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)两种方法检测155例幼儿抗-HBs,同时进行灵敏度、线性、阳性率对比。结果 ECLIA法灵敏度2.4 u/L,线性范围达1000 u/L,155例幼儿抗-HBs的阳性率为82.6%,而ELISA法灵敏度为43.8 u/L,线性范围800 u/L,阳性率仅为61.3%。ECLIA法的批内、批间CV<5.9%,而ELISA法的批内、批间CV<10.1%。结论 ECLIA法敏感性高于ELISA法,线性范围宽、重现性好,能定量检测抗-HBs,尤其对部分幼儿低水平(10~43.8 u/L)抗-HBs检测有较大的价值。
[关键词] 乙肝表面抗体;电化学发光法;酶联免疫吸附试验
目前,常规检测抗-HBs,主要是酶联免疫法(ELISA),尤其近来电化学发光法(ECLIA)以其敏感、自动化程度高、重现性好、快速、稳定等优点,在固相标记免疫测定技术上居领先地位[1]。有文献报道[2]乙肝病毒感染主要发生在婴幼儿时期,为此检测幼儿抗—HBs有重要的意义。因我县地处海岛,有独特的地理环境,所以用先进的ECLIA法测定我县155例幼儿抗-HBs水平,并用ECLIA法作对照,现报告如下。
1 对象与方法
1.1 检测对象 155例幼儿,男89例,女66例;年龄2~6岁。来自我县各幼儿园,这些对象都按“0、1、6”程序进行过乙肝疫苗接种。
1.2 ELISA试剂 由珠海亚利生物公司提供,用Bio-550酶标仪、兰勃Ⅱ型洗板机。
1.3 ECLIA法 用瑞士罗氏公司ELECSYS 1010电化学发光仪及其相应各种配套试剂。
1.4 质量控制 ECLIA法测定时,用罗氏低、高定值质控品,批号162631,定值为3.07 u/L、86.9 u/L。ELISA法用卫生部临检中心质控品,浓度为30 mu/L,批号030231,质控测定结果都在标定值的允许误差范围之内。
1.5 方法 这些幼儿采用早晨空腹抽血3 ml,分离血清,立即用两法进行抗-HBs测定,另外每人还做HBsAg、ALT两个项目。
2 结果和讨论
2.1 两法抗体阳性率 155例幼儿(男89例、女66例),按ECLIA法以≥10 u/L为阳性,ELISA法以S/CO≥1.0为阳性,结果见表1。表1 ECLIA和ELISA法测定抗-HBs结果表1显示,ECLIA抗-HBs阳性为128例(男74例、女54例),阳性率为82.6%,而ELISA阳性为95例(男55例,女40例),阳性率为61.3%,经χ2检验,χ2=17.4,P<0.01,两法阳性率差异有非常显著性,ELISA法阳性率和2001年我市疾病控制中心用ELISA法对我县123例城乡儿童乙肝抗体调查的阳性率(60.6%)接近,但两法明显低于文献报道阳性率90%以上[3,4]。
2.2 两法结果比较 95例抗-HBs ELISA法阳性的标本,用ECLIA检测全部呈阳性,而128例ECLIA法阳性的标本,用ELISA法检测阳性仅为95例,说明有32例ECLIA法阳性而ELISA法测定呈阴性,也表明两法的特异性是相符的,但ELISA法的灵敏度明显低于ECLIA法,32例ELISA法阴性的标本,用ECLIA法测定显示抗-HBs浓度都在10~44 u/L,说明ECLIA法有较高的敏感性。
2.3 线性比较 将抗-HBs测定值1000~1400 u/L范围内的3份血清混合,重复测定3次,取其均值作为原倍血清的理论值,然后做6点倍比稀释,求两者相关性并进行回归分析。ECLIA回归方程:Y=1.034X+0.765,R=0.9995,ELISA回归方程:Y=1.081X+1.672,R=0.9964,ECLIA在2~1000 u/L范围内线性良好,ELISA在44~800 u/L范围内线性良好,可见ECLIA检测范围比ELISA宽。
2.4 灵敏度比较 用罗氏高值质控血清86.9 u/L,进行一系列的倍比稀释,结果ECLIA法可以测到2.4 u/L,而ELISA法在43.8 u/L以下S/CO都≤1.0,说明只能测到43.8 u/L,两者灵敏度相差18.3倍。2.5 重现性试验 采取批内和批间差异来确定,用上述两法对低(71.4 u/L)、中(213.2 u/L)、高(532.7 u/L)混合血清,批内试验平行测定20次,批间试验每天上、下午各测定一次,连续10天,结果ECLIA法批内CV分别为4.1%、3.3%、2.6%,而ELISA法分别为6.4%、5.6%、4.3%。ECLIA法批间CV分别为5.9%、4.8%、4.6%,ELISA法批间CV为10.1%、7.3%、6.8%。
试验结果表明ECLIA法检测抗-HBs阳性率明显高于ELISA法。文献[2]认为抵抗HBV感染的最低抗-HBs有效水平为10 u/L,因此那些抗-HBs浓度在10~46 u/L的幼儿其实不用立刻进行乙肝疫苗加强接种。由此可见,用ECLIA法测定抗-HBs具有十分重要的意义。
总之,抗-HBs定量测定对乙肝的治疗和防治有重要的参考价值,尤其ECLIA法测定抗-HBs不但重现性好、自动化程度高、简便快速,而且灵敏度极高[3,4]。因此,ECLIA法测定抗-HBs目前是一个比较理想的方法。
[参考文献]
1 李倩,高学慧,甘勇,等.电化学发光与酶联免疫检测血清甲胎蛋白的比较.中华检验医学杂志,2001,24(4):243.
2 郭弘红,董春明,王文庆,等.重组酵母乙肝疫苗源性,免疫持久性及保护效果.中国计划免疫,1999,5(3):158.
3 崔清荣,葛君华,陈达乾,等.天台县1992~2000年儿童乙肝疫苗免疫后抗体检测.浙江预防医学,2002,14(10):16.
4 徐慧文,李东升,徐经武,等.国产血源性评价.中华流行病学杂志,1992,12(6):362-364.
作者单位: 202450 浙江嵊泗,嵊泗县人民医院
(编辑:李建伟)