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【摘要】 目的 探讨姜黄素防治非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的作用及机制。方法 采用高脂饮食复制大鼠NASH模型。随机分为正常对照组、空白模型组、姜黄素防治组、东宝肝泰防治组。检测肝功能、血脂变化、肝匀浆超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量的变化，观察肝细胞脂肪变性、炎症活动程度。结果 与空白模型组相比，姜黄素防治组大鼠血清ALT、AST、TG、TCH明显降低（P＜0.01）；肝匀浆中SOD活性升高（P＜0.01）、MDA含量显著降低（P＜0.01），脂肪变性、炎症活动程度皆有改善（P＜0.05），部分作用优于东宝肝泰防治组（P<0.01或P<0.05）。结论 姜黄素对NASH有明显的防治作用，其作用机制与其能减少脂类积聚、抗脂质过氧化有关。
【关键词】 非酒精性脂肪性肝炎；姜黄素；实验
Experimental study on curcumin treating nonalcoholic steatohepatitis in rats
WANG Tong,YAN Hong-mei,LIU Lin,et al.Department of Liver Diseases,The 7th Hospital of Wuhan, Wuhan 430071,China
［Abstract］ Objective To study the effect and mechanism of curcumin on treating nonalcoholic steatohepatitis（NASH）.Methods Rat models of NASH were established and stochastically devided into four groups: normal group,model group,curcumin prevented and cured group,DongBaoGanTaiPian prevented and cured group.The changes of serum alanine aminotransferase, aspartate aminotransferase, triglyceride and total cholesterol, the activity of superoxide dismutase（SOD） and content of malondialdehyde（MDA） in liver tissue were observed. The degrees of hepatocyte fatty degeneration, hepatitis activity were detected.Results Compared to the model group, the curcumin prevented and cured group could ameliorate the hepatic function and blood fat better（P<0.01）, the activity of superoxide dismutase were more increased and the content of malondialdehyde in liver tissue were more decreased （P<0.01）,the degrees of hepatocyte fatty degeneration and hepatitis activity were less pronounced in the animals treated with curcumin（P<0.05）. Some effects were super to DongBaoGanTaiPian prevented and cured group（P<0.01或P<0.05）.Conclusion Curcumin has the function of treating NASH. The mechanism of curcumin is related to resisting the lipid peroxidation.
［Key words］ nonalcoholic steatohepatitis; curcumin；experiment
多年临床和实验研究表明，姜黄素具有抗肿瘤、抗突变、抗炎、抗氧化、保肝等广泛的药理作用［1］。本实验通过建立大鼠非酒精性脂肪性肝炎（nonalcoholic steatohepatitis,NASH）动物模型，以东宝肝泰为对照，观察姜黄素对NASH大鼠肝脏组织病理、肝功能、血脂及氧化活性的影响，为阐明其作用机制和应用于临床防治NASH提供依据。
1 材料与方法
1.1 动物 清洁级SD雄性大鼠40只，体重 170～240 g，由湖北中医学院动物中心提供。普通饲料正常喂养1周后，随机分为4组，A组正常对照组、B组空白模型组、C组姜黄素防治组、D组东宝肝泰防治组，每组10只。
1.2 材料 姜黄素和东宝肝泰由湖北中医学院制剂室提供。姜黄素研碎，加水配成0.5 g/ml；东宝肝泰研碎，加水配成0.09 g/ml。超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
1.3 模型复制 A组大鼠普通饲料正常喂养。实验模型：B、C、D组参考文献报道［2］的方法配成高脂饲料（在普通饲料基础上加10%猪油、2%胆固醇）复制大鼠NASH模型。给药：8周后B、C、D组继续用高脂饲料喂养同时，C组予姜黄素混悬液1 ml/100 g灌胃，每日1次；D组予东宝肝泰混悬液1 ml/100 g灌胃，每日1次；A、B组予生理盐水1 ml/100 g灌胃，每日1次。
1.4 取材 A组大鼠普通饲料喂养12周。B、C、D组给药4周（即实验12周），末次给药后，空腹15 h，迅速自眼眶静脉丛取血，按常规分离血清及留取肝组织。
2 指标检测
2.1 血清生化测定 用Olympus Au560全自动生化分析仪测定检测血清ALT、AST、TG、TCH。
2.2 肝匀浆生化测定 取肝右叶1 g，4 ℃下制成10%肝匀浆，按试剂盒操作说明分别测定SOD活性、MDA含量。
2.3 肝组织病理观察 肝组织中性福尔马林固定，石蜡包埋，HE染色，光镜下观察。肝细胞脂肪变程度做以下分级［3］，重度：脂变肝细胞超过肝小叶2/3；中度：脂变肝细胞占肝小叶1/3～2/3；轻度：脂变肝细胞呈散在小灶分布；无：肝小叶结构完好，基本无脂变。炎症活动度计分标准参考1981年Knodell等［4］提出的慢性肝炎组织学活动指数（HAI），并结合王泰龄等提出的慢性肝炎炎症活动计分方案［5］：分为汇管区炎症（P）、小叶内炎症（L）、碎屑样坏死（PN）、桥接坏死（BN）4项，每项根据病变程度分别计1～4分，因为PN、BN严重度与预后直接相关，因而计分2倍于其他病变，计分公式为P+L+2PN+2BN。
2.4 统计学方法 计量资料用方差分析，等级资料采用χ2检验。
3 结果
3.1 血清ALT、AKP、TCH、TG变化 见表1。空白模型组、姜黄素防治组、东宝肝泰防治组大鼠血清ALT、AST、TCH、TG明显高于正常组（P<0.01），与空白模型组相比，姜黄素防治组血清ALT、AST、TCH、TG明显下降（P<0.01），东宝肝泰防治组血清ALT、AST、TCH也有下降（P<0.01或P<0.05）。姜黄素降低血清ALT、AST、TCH、TG的效果优于东宝肝泰（P<0.01或P<0.05）。表1 各组大鼠肝功能、血脂变化 注：与正常对照组比较，**P<0.01；与空白模型组比较，△△P<0.01，△P<0.05；与东宝肝泰防治组比较，##P<0.01，#P<0.05
3.2 肝匀浆SOD活性、MDA含量 见表2。与正常对照组相比，空白模型组、姜黄素防治组、东宝肝泰防治组大鼠肝匀浆SOD活性显著降低、MDA含量显著升高（P<0.05或P<0.01）；与空白模型组相比，姜黄素防治组、东宝肝泰防治组肝匀浆SOD活性明显升高、MDA含量明显降低（P<0.05或P<0.01）；姜黄素防治组肝匀浆中SOD活性较东宝肝泰防治组明显升高（P<0.01）。表2 肝匀浆SOD活性、MDA含量变化注：与正常对照组比较，**P<0.01，*P＜0.05；与空白模型组比较，△△P＜0.01，△P<0.05；与东宝肝泰防治组比较，##P＜0.01，#P<0.05
3.3 光镜观察 正常大鼠肝小叶结构清晰，肝细胞以中央静脉为中心向周围呈放射状分布；模型组大鼠所有标本的肝组织均可见弥漫性肝细胞脂肪变性，病变以中央静脉周围最为明显，同时肝小叶内和汇管区有炎性细胞浸润，少数存在肝细胞碎屑样坏死和桥接坏死;姜黄素防治组、东宝肝泰防治组脂滴与模型组比较较小、密度稍稀，仅有少数肝细胞内有脂滴空泡,细胞核结构清晰，肝组织炎症分布和性质与模型组基本相似，但程度明显减轻，见图1～4。各组脂肪变性和炎症活动度结果见表3。与正常对照组相比，空白模型组、姜黄素防治组、东宝肝泰防治组大鼠肝细胞存在明显脂肪变性和炎症活动（P<0.01），姜黄素防治组肝细胞脂肪变性程度和炎症活动度较空白模型组明显减轻（P<0.05），而且其控制炎症活动度优于东宝肝泰防治组（P<0.05）。表3 各组大鼠肝细胞脂肪变性程度及炎症活动度比较 注：与正常对照组比较，**P<0.01；与空白模型组比较，△P<0.05；与东宝肝泰防治组比较，#P<0.05
4 讨论
随着非酒精性脂肪性肝炎发病率的逐年增加及被认为是发展成终末期肝病的一个重要病因，NASH已越来越受到重视，本病发生的风险因素已基本明确，发病机制尚不完全清楚，对于防治NASH药物的确切实验和临床疗效也颇多争议。我们实验表明，姜黄素通过保护肝功能、降低血脂、改善肝脏组织脂肪变性程度及炎症活动度对NASH有明显的防治作用，优于东宝肝泰。MDA为脂质过氧化的最终产物，可严重破坏细胞膜结构，导致细胞肿胀、坏死，其含量的高低反映了过氧化损伤的程度，SOD可清除自由基，减轻和阻断脂质过氧化作用，其活性大小与抗氧化能力呈正相关。通过大鼠模型组与正常组之间结果比较显示，抗氧化能力下降是NASH的一个重要发病机制。姜黄素所具有的较强的抗氧化能力可能是其具有防治NASH作用的重要原因之一。
【参考文献】
1 麦镇江.姜黄素的药理作用研究进展.中药材，2004，（9）：698-701.
2 钟岚，范建高.非酒精性脂肪肝动物模型.国外医学·消化系疾病分册，1999，19（3）：175-178.
3 祁培宏，余莉芳，刘平.消脂保肝饮抗大鼠脂肪肝作用的研究.中西医结合肝病杂志，2000，10（5）：33-35.
4 Knodell RG,Ishak KG,Black WC,et al.Formulation and application of a numerical scoring system for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis.Hepatol，1981,1（5）:431-435.
5 王泰龄，刘霞，周之平，等.慢性肝炎炎症活动度及纤维化程度计分方案.中华肝脏病杂志, 1998,66（4）:195-197.
作者单位：1 430071 湖北武汉，武汉市第七医院肝病科 2 430061 湖北武汉，湖北中医学院2004级博士班 3 430061 湖北武汉，湖北省中医院肝病中心