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金黄色葡萄球菌（SA）是一种临床常见的机会致病菌，常引起化脓性感染，也是医院感染的重要病原菌之一。准确鉴定SA具有重要的临床意义。为了解玻片法凝固酶试验在GPI（革兰阳性球菌鉴定卡）鉴定葡萄球菌中的影响，我们收集玻片法凝固酶试验阳性经Vitek32细菌仪鉴定为SA的59株菌，用Slidex Staph-kit（葡萄球菌凝聚鉴定试剂合）、试管法凝固酶和玻片法凝固酶三种方法进行再鉴定，现将结果报告如下。
1 材料与方法
1.1 菌株来源 59株SA分离自1999年6月～2000年4月我院住院患者及门诊患者各类标本，包括尿液、血液、痰、白带、脓、咽拭子及各种分泌物等。标准菌株ATCC25923由福建省临床检验中心提供。
1.2 仪器和试剂 Vitek32型微生物鉴定仪，GPI鉴定卡、Slidex Staph-kit均由法国生物梅里埃公司提供，严格按说明书操作。
1.3 菌种鉴定方法 各类标本按常规接种培养，置35℃培养24h，涂片染色为革兰阳性球菌，触酶阳性，玻片法凝固酶阳性，挑取单个菌落配制0.5麦氏单位，充填GPI卡，经Vitek32细菌仪鉴定，并将该菌保存于琼脂斜面，用试管法凝固酶和Slidex Staph-kit进行再鉴定。
1.4 玻片法凝固酶试验 取一滴生理盐水于洁净的玻片上，同时用接种环挑取待检菌一环于生理盐水中，制成浓菌悬液，无自凝现象。然后加一环人血浆混合，10s内观察结果，出现明显凝块为阳性，否则为阴性。
1.5 试管法凝固酶试验 用生理盐水将人血浆4倍稀释，取0.5ml，然后挑取3～5个菌落于稀释血浆中，制成浓悬液，置37℃水浴，30min读取第一次结果，以凝固为阳性，若未凝固则每隔0.5h观察一次结果，3～4h后仍为阴性继续观察，到24h不凝为阴性。同时以ATCC25923标准菌株做阳性对照。
2 结果
2.1 59株玻片法凝固酶试验阳性的葡萄球菌经Vitek32细菌仪鉴定为SA。59株玻片法凝固酶试验阳性的SA，用人血浆做试管法凝固酶试验29株阳性。59株玻片法凝固酶试验阳性的SA，经Slidex Staph-kit鉴定31株为SA，其余28株为其它葡萄球菌。GPI卡按玻片法凝固酶鉴定准确率为52.5%，按试管法凝固酶结果修正后，GPI卡鉴定准确率为93.6%。经Slidex Staph-kit鉴定为SA的31株菌中，试管法凝固酶试验29株阳性，其中2株为阴性，这可能是由于试管法凝固酶用的是人血浆而不是兔血浆造成的假阴性 ［1］ 。
3 讨论
血浆凝固酶试验有玻片法和试管法两种，玻片法检测葡萄球菌凝聚因子，凝聚因子试验阳性的有金黄色葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施莱福葡萄球菌施莱福亚种及部份中间型葡萄球菌。试管法检测葡萄球菌血浆凝固酶，血浆凝固酶阳性的有金黄色葡萄球菌、施莱福葡萄球菌凝固亚种、中间型葡萄球菌、海豚葡萄球菌及部份猪葡萄球菌，因此玻片法和试管是两个不相关的试验 ［2］ ，GPI卡鉴定应按试管法凝固酶结果，GPI卡对葡萄球菌鉴定可信度大大提高，本文结果显示，玻片法凝固酶试验容易出现假阳性，误将凝固酶阴性葡萄球菌鉴定为金黄色葡萄球菌 ［3］ ，导致鉴定SA准确性降低，试管法凝固酶结果鉴定SA GPI卡准确性提高至93.6%。基层医院葡萄球菌鉴定常只做玻片法，且将玻片法凝固酶结果做为葡萄球菌鉴定重要依据，为防止玻片 法检测的假阳性反应，必须严格按《全国临床检验操作规程》 ［4］ 进行操作。同时为防止假阳性反应，必须做试管法凝固酶，玻片法和试管法凝固酶试验的血浆标准是:必须含有足够浓度的凝固酶反应因子和纤维蛋白原，必须无溶纤维蛋白活性和无抑制剂 ［2］ ，不同种动物血浆因子不同，凝固状态也不同，Chapman ［1］ 介绍，兔血浆凝块结实，凝固速度快，优于人血浆，Morton ［5］ 等建议固体培养基上培养物做试管法凝固酶试验时，不能使用人血浆。本文Slidex Staph-kit鉴定为SA的31株菌中，试管法凝固酶试验29株阳性，其中2株为阴性，这可能是由于使用人血浆造成的假阴性，假阴性率为6.5%，试管法凝固酶虽然检测时间较长，操作较繁琐，与玻片法凝固酶比较，其结果与Slidex Staph-kit结果相关性更好，葡萄球菌鉴定中应做试管法凝固酶，并按照试验要求尽可能使用兔血浆，Slidex Staph-kit操作简单，有条件的医院可开展此项检查以提高SA鉴定的准确性，本试验结果仅供大家在具体操作中参考。
参考文献
1 J.F.麦克法丁著，林万明译，何道生校.医学细菌生化试验鉴定手册.北京:人民卫生出版社，1985，50-62.
2 高屹.细菌血浆凝固酶试验有几种.如何使用?中华检验医学杂志，1999，22Suppl:35.
3 高屹.如何做好葡萄球菌的凝聚因子试验.中华检验医学杂志，1999，22Suppl:43.
4 叶应妩，王毓三.全国临床检验操作规程.第二版.南京:东南大学出版社，1997，553-569.
5 Morton，H.E，Cohn.Coagulase and deoxyribonuclease activities of staphylococci isolated from clinical sources.J Appl Microbiol，1972，23:725
作者单位:364000福建省龙岩市第一医院检验科