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关键词 硫酸奈替米星 化学发光 流动注射 尿样 血样
Determination of netilmicin sulfate by flow injection combined with chemiluminescence
Yue Qiaoli，Song Zhenghua
Department of Chemistry，Northwest University，710069.
【Abstract】 Objective To establish a new and sensitive method for the rapid determination of netilmicin sulˉfate.Methods Netilmicin sulfate was determined by chemiluminescence（CL）combined with flow injection（FI）technology，which was based on the enhanced effect of netilmicin sulfate on the CL reaction between luminol and H 2 O 2 .Results The increment of the CL intensity was proportional with the concentration of netilmicin sulfate in the linear range from0.1to10.0ng/ml（r=0.9991），and the detection limit was0.03ng/ml（3σ）.At a flow rate of2.0ml/min，the complete determination of netilmicin sulfate，including sampling and washing，could be accomplished within0.5min with the relative standard deviation（RSD）of no more than2.5%.Conclusion The FI-CL method showed good sensitivity and selectivity giving a throughput of120h -1 ，and the validity of the proposed method has been proved by means of the recovery test of the standard addition of netilmicin sulfate in human urine and serum with a satisfactory result. Key words netilmicin sulfate chemiluminescence flow injection urine serum
硫酸奈替米星为白色或类白色的粉末，为半合成氨基糖苷类抗生素，适于治疗敏感革兰阴性杆菌所致严重感染，如:败血症、中枢神经系统感染、尿路生殖系统感染、呼吸道感染等 ［1］ 。测定方法有:微生物分析法 ［2，3］ 、液相色谱法 ［4～7］等。然而，采用化学发光测定硫酸奈替米星的方法至今未见报道。本文以硫酸奈替米星对鲁米诺-H 2 O 2 体系的增敏作用为基础，建立了灵敏、快速测定纳克水平硫酸奈替米星的新方法。
1 实验部分
1.1 试剂 硫酸奈替米星（1.84mg/ml），陕西省药检所提供。H 2 O 2 （30.0%）稀释到0.1M为储备液，鲁米诺储备液1.0×10 -3 M，所用试剂均为分析纯，高纯水用Milli-Q Plus装置制造。
1.2 实验装置与操作步骤 FI-CL流通体系装置如图1所示。蠕动泵以2.0ml/min流速输送各管路溶液。100μl鲁米诺-H 2 O 2 混合液由六通阀注入再与样品进入混合管，然后，在化学发光池中与NaOH相汇，产生光信号。发光强度用R-456光电倍增管检测，最大发光信号由XWT-206型记录仪记录。发光信号的增加值ΔI与硫酸奈替米星浓度成正比。
2 结果与讨论
2.1 氧化剂的选择 本实验分别对KMnO 4 、H 2 O 2 、K 3 Fe（CN） 6 、K 2 Cr 2 O 7 和KIO 4 等氧化剂在相同条件下进行测试，结果表明:当硫酸奈替米星存在时鲁米诺-H 2 O 2 体系ΔI值最大。所以选H 2 O 2 为合适的氧化剂。
2.2 鲁米诺、H 2 O 2 和NaOH浓度对化学发光强度的影响 分别对不同浓度的鲁米诺、H 2 O 2 和NaOH对发光强度的影响进行测定，得出:鲁米诺、H 2 O 2 和NaOH的浓度为5.0×10 -7 、5.0×10 -5 和0.025M时发光值最大。
2.3 流速和混合管长度对化学发光强度的影响 为了提高信噪比，本文对试剂流速也进行了测试。经实验分析:流速在2.0ml/min时获得信号效果最好，也最节省溶液。混合管长度从1.0cm到8.0cm进行试验，得出5.0cm时化学发光信号最强。
2.4 线性范围 在优化实验条件下，对一系列硫酸奈替米星标准溶液进行试验，在0.1～10ng/ml范围内，硫酸奈替米星的浓度与化学发光强度的增加值存在良好的线性关系，线性方程为ΔI CL =26.609Cx+55.41，线性回归系数r=0.9991，检出限为0.03ng/ml（3σ），对0.1、1.0和10.0ng/ml的标准溶液分别进行5次平行测定，对应的RSD分别为2.40%、1.43%、1.03%。
2.5 干扰实验 1.0ng/ml硫酸奈替米星存在时，用标准加入法对外来物质进行测定（引起的误差小于5.0%）。实验结果表明:Co 2+ 、Fe 3+ 、Fe 2+ 、Mn 2+ 等过度金属离子;草酸、尿素、血色素、淀粉、柠檬酸等有机物不干扰测定。
2.6 样品测定 尿液来自3位志愿者，血清由西北大学校 医院提供。分别取1.0、5.0、10.0、30.0μg和1.0、3.0、7.0、10.0μg的硫酸奈替米星标准溶液，依次加入1.0ml尿液和血清中，适当稀释后进行测定，结果见表1。图1 流动注射-化学发光测定硫酸奈替米星示意图（略） 鲁米诺:5.0×10 -6 M;H 2 O 2 :5×10 -5 M;NaOH:0.025M;流速:2.0ml/min，负高压:-680V 表1 人体尿液和血清中硫酸奈替米星的测定结果 （略）
参考文献
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基金项目:陕西省自然科学基金（批准号:2003B15）
作者单位:710069陕西西安西北大学化学系（ 博士生导师）