竹荪托盖液修复辐射损伤大鼠免疫功能的指标检测

    【摘要】 目的 探讨新研制药物竹荪托盖液修复辐射损伤大鼠免疫功能的作用。方法 经 60  Coγ线300CGY（55CGY/min6′6″）一次性全身照射的大鼠60只，随机分为5组，竹荪托盖液（大、中、小剂量）组，贞芪对照组、空白对照组，照射后第2天开始进行灌喂试验，30天后一次性断颈处死实验大鼠，采血作免疫指标检测。结果 竹荪托盖组与对照组免疫球蛋白、T细胞亚群、白细胞介素Ⅱ、NK细胞两两比较，P<0.01、P<0.05差异有显著性，CD3 + P>0.1差异无显著性，CD4/CD8比值，竹荪托盖液组1.60，贞芪组1.29，空白组1.37。结论 竹荪托盖液有修复辐射损伤最敏感的免疫活性T细胞的作用，能显著增加T淋巴细胞的数量，提高T细胞生长因子的指数，激活免疫调节细胞（NK）。竹荪托盖液能明显增强细胞的免疫作用可能是与多糖及微量元素成分有关。本研究表明，竹荪托盖液作为增强免疫功能的药物可望应用于临床。

    　关键词 免疫 辐射损伤 动物实验

    　竹荪托盖液是从食用竹荪的托盖部分中提取出来的有效成分。竹荪菌含有多糖、多种氨基酸及多种微量元素，其菌托的氨基酸及微量元素的含量不低于菌体 ［6］  ，食用有提高机体免疫功能的作用，但将竹荪的托、盖研制成药物，作为药用对辐射损伤免疫功能的修复作用的研究还尚未见报道。本试验采用竹荪托盖研制的口服溶液，观察对辐射损伤大鼠免疫功能的修复作用。报告如下。

    　1 　材料与方法

    　1.1 药物 竹荪菌托液采用乙醇浸出法和水浸出法相结合的制备方法提取有效成分，每毫升相当于原生药30g，以女贞子、黄芪等量采用水浸醇提法，提取药物有效成分，制成贞芪口服液备用。均由泸州医学院药研所研制。

    　1.2 标本来源 健康雄性大鼠（SD鼠）60只，每只体重150g（由泸州医学院动物科提供），实验大鼠统一喂饲泸州医学院动物科提供的合成饲料。动物造模以 60  Coγ线照射机，将6只大鼠放入30cm×30cm铁笼内，平行4笼，上盖玻璃隔板;大鼠呈分散状，射源距大鼠高度800cm，射野为60cm×60cm，照射剂量以300CGY（55CGY/min6′6″）一次性全身照射。将60只试验大鼠随机分为五组，每组12只。竹荪托盖液大剂量组每日灌喂含原生药8g的药液1.00ml;中剂量组每日灌喂含原生药8g的药液0.50ml;小剂量组每日灌喂含原生药8g的药液0.25ml。贞芪对照组每日灌喂含原生药15g的药液1.00ml，空白对照组以生理盐水加饲料喂养。实验大鼠于照射后第二天开始进行灌喂，30天后一次性断颈处死，采血作血清免疫学检测。

    　1.3 试剂与检验方法

    　1.3.1 试剂 免疫球蛋白测定试剂由Dade Behring公司提供;T细胞亚群自然杀伤（NK）细胞检测试剂盒由北京宜安泰医疗技术开发有限公司提供;白介素定量检测试剂盒由上海森雄科技实业有限公司提供。

    　1.3.2 方法 免疫球蛋白测定采用散射免疫比浊法，使用德国BN·Prospec特定悬白分析仪。以抗原和抗体结合形成可溶的抗原-抗体复合物，光照射复合物表面发生散射，仪器自动检测散射光的浓度，通过标准曲线计算获得测定值。T细胞亚群自然杀伤（NK）细胞检测:采用S·P法（Biˉotin streptavidin perxidase）全称为链菌素亲生物素 过氧化酶连接法，由美国zymed公司于1986年首建。T细胞亚群以T淋巴细胞表面标志（抗原）分别与鼠抗人CD3 + 、CD4 + 、CD8 + 单克隆抗体结合。NK细胞以NK细胞表面标志（抗原）分别与鼠抗人CD16、CD57单克隆抗体结合，再与生物素偶联的兔抗鼠IgG第二抗体结合，然后与过氧化物酶标记的链霉亲和素结合，最后通过氧化物酶底物显色。白介素定量检测:采用双抗体夹心ABC-ELISA法。用抗人IL-2单抗包被于酶标板上，标准品和样品中的IL-2与单抗结合，加入生物素化的抗人IL-2，形成免疫复合物连接在板上，辣根过氧化物酶标记的avidin与生物素结合，加入酶底物OPD，加终止液硫酸，在492nm处测OD值，通过绘制标准曲线求出标本中IL-2浓度。

    　1.4 统计学方法 F、Q检验

  　  2　 结果

    　2.1免疫球蛋白 试验各组两两比较P<0.01，P<0.05差异有显著性。

    　2.2 T细胞亚群CD3  + 亚群 竹荪托盖液大剂量组与空白组、贞芪组比较，P>0.1无统计学意义，CD4 + 、CD8 + 亚群，竹荪托盖液大剂量组与空白组、贞芪组比较，P<0.05差异有显著性。竹荪托盖液大剂量组CD4 + 指数增加，CD8 + 指数降低，CD4/CD8比值1.60;贞芪组CD8 + 增加，CD4/CD8比值1.29;空白组CD4 + 降低，CD8 + 增加，CD4/CD8比值1.37。

    　2.3 白细胞介素Ⅱ（IL-2） 竹荪托盖液大剂量组与空白对照组比P<0.01，与贞芪对照组、小剂量组、中剂量组比P<0.05，差异有显著性。

    　2.4 自然杀伤（NK）细胞 CD16竹荪托盖液大剂量组指数显著高于组间各组，各组间两两比较P<0.01，CD57竹荪托盖液大剂量组指数显著高于组间各组，与贞芪组比P<0.05，其余各组间比较P<0.01。空白组指标值显著低于正常值。表1 竹荪托盖液免疫指标分析 （略）

   　 3　 讨论

    　当机体受到大剂量辐射损伤后，放射线可以直接造成T淋巴细胞数量减少甚至死亡。在造血功能障碍的同时，免疫功能也严重的低下，表现为免疫活性细胞数量减少，抗体形成抑制或紊乱，细胞因子网络调节失常等;T淋巴细胞作为体内最重要的免疫活性细胞之一，对辐射相当敏感，照射后数量减少非常突出，关于淋巴细胞CD4、CD8亚群的辐射敏感性，通过对人外周血的研究，有学者认为是一致的 ［1］也有学者认为CD8亚群辐射敏感性更高一些 ［2］总之，放射线可以直接造成淋巴细胞死亡 ［3］，实验结果显示，竹荪托盖液可以修复辐射损伤最敏感的免疫活性T细胞，显著增加T淋巴细胞的数量，增大CD4/CD8比值。动物实验证实，动物缺乏微量元素特别是锌、铁、硒、铜可导致免疫功能障碍。影响抗体的产生 ［5］。竹荪含有多糖（异多糖）及18种微量元素，多糖对机体的免疫调节起着重要的作用，其作用主要通过激活巨噬细胞、激活网状内皮系统、激活T和B淋巴细胞、激活补体、促进干扰素的生成、促进白细胞介素的生成、诱生肿瘤坏死因子 ［4］  等渠道。实验显示，免疫球蛋白各组间差异有显著性，T细胞亚群CD3 + 指数各组比较P>0.1，可能辐射对CD3 + 影响不大，竹荪托盖液能增加CD4 + 指数，降低CD8 + 指数，增大CD4/CD8比 值，同时提高T细胞生长因子（IL-2）的指数，明显激活免疫调节细胞（NK），修复辐射损伤后的免疫抑制状态。实验各组免疫指标与空白组、贞芪组比较P<0.01，P<0.05，表明竹荪托盖液有明显增强细胞免疫功能的作用，其增免作用可能是与多糖及微量元素成分有关。待进一步研究后，作为恢复和增强辐射损伤后免疫功能的药物有望应用于临床。

    　参考文献

    　1　 Nakamura N，kusunoki Y，Akiyama M Radiosensitivity of CD4or CD8positvehuman Thocytes by an in vitro volony formation assay.Diat Res，1990，123（2）:224.

    　2　 Seki HL，Wai K，Kanhegane H，et al，Differential protctive action of cytd on radation-induced.apoptosis of peripheral lymphocte subopulations cell，lmmunol，1995，163:30.

    　3 　邵传森，朱圣禾.临床疾病与免疫.北京:科学出版社，2002，1.

   　 4 　韩果萍.我国天然活性多糖药理研究进展.中药材，2003，26（12）:138.

    　5　 吴振荣.微量元素对免疫功能的影响.国外医学·免疫分册，1998，1:20.

    　6 　屡六帮.竹荪菌体、菌托、菌盖的价值及作用.江苏食用菌杂志，1990，2:13.

   
    　作者单位:646000四川泸州医学院附院