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1 材料与方法
1.1 仪器与试剂 日本Sysmex公司生产的AU400全自动生化分析仪,上海科华-东菱诊断用品有限公司生产的生化试剂盒,中生北控生物科技股份有限公司生产的质控液。
1.2 测定对象 来自涪陵区机关团体、工厂的体检人员,年龄在20~55岁,经体检医师检查,ALT<40U/L [1] ,试剂底物中不含磷酸吡哆醛,心电图正常,肺功能(通气与容量)正常,血压正常,符合NCCLS要求 [1] 的健康人群中选择280例,其中男性146例,女性134例。
1.3方法 受检者在早晨空腹10~12h后抽血,避免抽烟,禁食咖啡、乙醇、维生素C及复合维生素,避免大量的体育活动,禁止服药等。并对受检者在发放体检表时作认真解释,予以配合。采血时,保证采血坐姿自然,动作一致,按照常规流程采集空腹静脉血5ml。将标本2000r/min离心10min,2h内分离血清,并立即上机测定。
2 实验结果
按正态分布规则应有95%的观察值在ˉx±s内,TP、ALB、Glu的数据均属正态分布,参考范围以ˉx±2s计算 [3] 。ALT属于偏态分布,95%分布范围不能以ˉx±2s计算确定,本文采用百分位数法 [3] ,检测结果见表1。
与全国临床检验操作规程采用的参考范围比较,TP、ALB、ALT的结果稍有差异,Glu基本相符。A/G与我室以前采用的参考值1.25~2.5差不多。
3 讨论
TP、ALB以前手工法和本实验室自动生化分析仪都采用的是双缩脲法和溴甲酚绿法(BCG法)。在血液中,由于小分子肽的含量极低,故除蛋白质外,实际上不存在与双缩脲试剂显色的物质。BCG和白蛋白的复合物要发生部分沉淀,且BCG的特异性差,它还可与其它蛋白质起反应,同α-球蛋白产生的颜色强度相当于同量白蛋白的1/5,β-球蛋白相当于同量白蛋白的1/10 [4] 。BCG试剂与不同蛋白质的反应速率也不一样,与白蛋白可立即产生反应,与其它蛋白质反应缓慢 [4] ,因此,自动分析中显色时间缩短为10秒,这样可以避开干扰,此外pH也严格控制在4左右,以此增加BCG与白蛋白的结合。
表1 280例正常人部分生化项目测得值(略)
ALT本室验室全自动生化仪采用的是连续监测法,早期采用的是定时法,也即终止法。定时法虽然简单,但无法知道整个酶促反应进程中是否都是零级反应。而连续监测法很容易观察到反应的整个过程,可选择线性期来计算酶活性,测定结果常较定时法高 [5] 。
综上所述,由于每个实验室所使用的仪器类型、实验方法、试剂组成的不同,都不应该照搬试剂说明书、文献或其它实验室的参考范围,都必须尽可能地建立自己实验室的参考范围。本文得出的部分生化项目的参考范围,对使用本室相同系统的实验室具有一定参考价值。
参考文献
1 How to define and determine reference intervals in the clinical laboratoˉry;Approved Guideline NCCLS-C28-A,1995,12(2):105.
2 叶应妩,王毓三.全国临床检验操作规程,第二版,南京,东南大学出版社,1997:205.
3 方积乾,孙振球.卫生统计学.第五版.北京:人民卫生出版社,2003:55-59.
4 陈惠黎.生物化学检验技术.北京:人民卫生出版社,1993:208-211.
5 周新,涂植光.临床生物化学和生物学检验,第3版.北京:人民卫生出版社,2003:148-149.
作者单位:408000重庆市涪陵中心医院检验科