安南草多糖含量的测定*

　　【摘要】  本文对菊科植物满天飞Gynura crepidioides Benth（安南草）中的多糖含量，进行分离提取及定量测定。为控制安南草的质量提供定量指标。
   
　　【关键词】  安南草；多糖；含量测定
   
　　安南草为菊科植物满天飞Gynura crepidioides Benth.的全草。其性味微辛、苦、平，能消肿行气、健脾胃、利尿。临床上用于治疗消化不良、营养不良性水肿等症；据文献报道［1～3］，安南草含叶绿素、β-胡萝卜素等物质，但其他化学成分、有效成分未明。笔者对安南草中的化学成分进行了初步的研究，发现其中含有亚硝酸盐［4］、多糖类化学成分，并对其中的多糖含量进行了测定。本研究结果为利用安南草植物资源提供依据。

　　1  仪器、试剂与样品

　　岛津UV-2210紫外分光光度计（岛津日本），CQ-200超声波仪（上海音波声电科仪公司）；无水葡萄糖（广东汕头西陇化工厂，符合部颁标准HG3-1094-77），其余试剂均为分析纯。安南草样品由和平县野菜供应处黄学容等提供，部分样品笔者自己采集（野生和种植均有），经鉴定均为菊科植物满天飞Gynura crepidioides Benth.，又名安南草。

　　2  方法与结果

　　2.1  安南草多糖的提取与精制  称取粉碎后的安南草粗粉50g，置圆底烧瓶中，加500ml的石油醚Ⅱ浸泡2h，再回流1h，过滤。滤渣挥干溶剂后，以85%乙醇400ml回流提取2次，每次1h，过滤。滤渣用蒸馏水500ml，回流提取2h，过滤，滤液浓缩至约50ml，用Sevage法除去蛋白质后，水溶液中加95%乙醇使其浓度达80%，静置过夜。抽滤，滤渣用无水乙醇、丙酮、乙醚依次洗涤多次，得多糖粗品，于60℃干燥备用。

　　2.2  标准曲线的制备

　　2．2．1  5%苯酚溶液的配制  取苯酚100g，加入0.1g铝片和0.05g NaHCO3,在180℃～182℃下常压蒸馏，得白色针状苯酚结晶。称取上述苯酚结晶12.5g，置250ml容量瓶中，用水稀释定容，摇匀，避光保存。

　　2．2．2  葡萄糖标准储备液的配制  精密称取经105℃干燥至恒重的无水葡萄糖标准品36mg，置100ml容量瓶中，用水稀释定容，摇匀，得葡萄糖标准储备液。

　　2．2．3  标准曲线的绘制  分别精密吸取上述储备液1.5,2.5,3.5,4.5,5.0,6.5ml置100ml容量瓶中,加水至刻度。 分别吸取上述稀释液各2ml，置具塞试管中，精密加入5%苯酚试液1ml混匀，沿管壁加入浓硫酸5ml。静置5min，振摇，置水浴中加热15min，立即转入冰水浴中冷却至室温，以蒸馏水为空白，在490nm波长处测定吸光度。根据所测得的吸光度和相应的浓度，得标准曲线回归方程为：

　　A=-2.23×10-3+0.09056C(r=0.9996,n=6)

　　结果表明：在浓度为5.4～23.4μg/ml范围内呈良好的线性关系。

　　2．2．4  稳定性试验  取样品溶液按“2.2.3”项下方法操作，每隔20min测定其吸光度，结果表明在2h内，吸光度几乎没变化。

　　2．2．5  换算因子的测定  取原药材，以体积比5倍量蒸馏水浸泡1h，煮沸并保持微沸1h，共2次。合并煎煮液，脱色，趁热过滤；浓缩至一定量，用乙醚脱脂3次，每次50ml，水层蒸干至膏状，加入乙醇至醇量达80%，静置24h。用乙醇、丙酮分别洗涤，60℃烘干。

　　精密称取上述干燥品40mg，加水配成1.623mg/ml的溶液。精密吸取上述溶液2.0ml，按标准曲线项下操作并测定，同时作空白对照，得换算因子f=2.85(n=4)。

　　2．2．6  回收率测定  用已做含量测定的五批原药材,分别按“2.2.4"项下依法提取，置100ml容量瓶中，分别精密加入不同量的葡萄糖标准液，加水定容。按“2.2.3”项下方法操作，经计算得回收率，结果见表1。

　　表1  回收率试验结果  (略)
    
　　2．2．7 样品含量的测定 精密称取粉碎后的生药材1.0g，先加80%乙醇150ml，水浴回流1h，趁热过滤，残渣用乙醇洗涤3次，再加水150ml提取，过滤，残渣及烧瓶用热水洗涤，洗涤液合并，放冷后转入250ml容量瓶中，用蒸馏水定容，作为样品溶液。按标准曲线下的方法操作，测定样品中的含量，按下式计算样品中多糖的含量，结果见表2。

　　多糖含量%=（A×B×f）÷W×100

　　式中A为供试液中葡萄糖浓度（mg/ml），B为供试液的稀释因子，f为换算因子，W为供试品重量（mg）。

　　表2  安南草多糖含量的测定结果（略）

　　3  讨论

　　苯酚-硫酸分光光度法测定多糖的含量，方法简便可行，稳定性好。从不同产地样品测定结果可以看出，不同产地的安南草多糖含量有一定的差异，但变化不大，可能跟不同的采集季度以及处理炮制方法有关。目前，安南草的其他化学成分并不清楚，本研究结果对安南草药材的品质评价和进一步开发利用提供一个参考指标。

　　【参考文献】

　　1  福建省医药研究所.福建药物志.福州：福建人民出版社，1979,473.

　　2  江西药科学校编.草药手册. 南昌：江西人民出版社,1970, 1024.

　　3  全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编.下册.北京：人民卫生出版社，1990,640.

　　4  徐明全，黄福星.飞机菜中亚硝酸钾的分离鉴定.广东药学，2005，15（3）：10.
 
　　(编辑：李  令)

　　*基金项目：广东省中医药管理局科研基金资助课题(项目编号：101026)

　　作者单位：510440 广东广州，广东省药物研究所天然药物化学研究室

　　　　　　　510440 广东广州，广东药学院2005届药学专业本科实习生