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【摘要】 目的 探讨EMs组织中Survivin和PCNA表达的相关性及临床意义。方法 选取EMs患者异位内膜组织35份和在位内膜组织32份及正常子宫内膜组织26份，采用SP法测定Survivin和PCNA表达。结果 EMs异位和在位内膜组织中Survivin表达显著高于正常内膜组（P＜0.05），且异位内膜组Survivin表达也高于在位内膜（P＜0.05）。EMs中Survivin表达阳性者的PCNA标记指数明显高于Survivin表达阴性者（P＜0.05）。结论 Survivin在EMs发病机制中起重要作用且与细胞增殖相关。
【关键词】 子宫内膜异位症；Survivin；PCNA；细胞增殖
Expression and clinical significance of survivin and PCNA in endometriosis.
LUO Xue-ying，WANG Zhan-ping.Department of Obstetrics and Gynecology，The First People’s Hospital of Shenyang，Shenyang 110041，China
【Abstract】 Objective To explore the expression and clinical significance of survivin protein and PCNA in endometriosis.Methods Immunohistochemisty was used to determine the expression of survivin and PCNA in 35 cases of ectopic endometrial tissues，32 cases of eutopic endometrial tissues and 26 cases of normal endometrium.Results The expression of survivin in ectopic and eutopic endometrial tissues was much higher than that in normal endometrium（P＜0.05）， the expression of survivin in ectopic endometrial tissues was much higher than that in eutopic endometrial tissues （P＜0.05）.Labeling idex（LI） of PCNA in survivin positive EMs was higher than that in survivin negative EMs（P＜0.05）.Conclusion Survivin level may play important role in the occurrence of EMs and are closed associated with cell proliferation.
【Key words】 endometriosis；survivin；PCNA；cell proliferation
子宫内膜异位症（EMs）是一种具有侵袭性的妇科常见病，其侵袭、种植和复发等“恶性”生物行为可能与凋亡调控基因有关［1］。Survivin是凋亡抑制蛋白家族新成员，能直接与Caspase－3和Caspase－7结合并抑制其活性而阻止细胞凋亡；还可通过有丝分裂促进转化细胞的异常增殖［2］。本研究旨在探讨EMs中Survivin表达与细胞增殖的相关性及临床意义。
1 资料与方法
1.1 研究对象 取我院妇科2003年5月～2005年10月手术治疗且术后病理确诊为EMs 35例为研究组，年龄22～48岁，平均年龄（33.6±6.8）岁。通过手术取得35份卵巢子宫内膜异位病灶组织及32份在位内膜组织。对照组26例，年龄29～48岁，平均年龄（35.8±4.7）岁，为同期子宫肌瘤手术患者正常子宫内膜组织。两组患者月经周期规律，无内科合并症，术前3个月内未用过激素治疗。两组年龄比较，差异无显著性（P＞0.05）。
1.2 主要试剂 Survivin和PCNA鼠抗人单克隆抗体购自北京中山生物技术有限公司。
1.3 方法
1.3.1 标本制备 开腹手术时取得正常子宫内膜组织，卵巢子宫内膜异位及在位组织，甲醛固定，常规脱水，石蜡包埋，HE染色后，光镜下观察筛选组织标本备用。
1.3.2 实验方法 石蜡标本连续切片，片厚4μm，贴于载玻片上，置于烤箱（80℃～90℃）10min后取出，切片脱蜡至水，进行抗原修复处理，按免疫组化SP法测定，染色步骤参照说明书进行，以PBS代替一抗做阴性对照。
1.4 结果判定 Survivin免疫组化阳性产物呈棕黄色细颗粒状，定位于胞浆。按染色程度计分：无色0分，浅黄色1分，棕黄色2分，棕褐色3分。镜下观察随机选取10个不同高倍视野，计数1000个细胞，按阳性细胞所占百分比分为：1％～10％1分，11％～50％2分，51％～80％3分，≥81％4分。对阳性细胞百分比及染色程度评分，两者乘积≥3分者为阳性。PCNA免疫组化阳性产物呈棕黄色细颗粒状，定位于胞核内，其标记指数PCNA-LI＝阳性细胞数/计数的细胞总数×100％。
1.5 统计学分析 应用SPSS11.0统计分析软件进行χ2检验分析数据。
2 实验结果
2.1 正常子宫内膜组织和EMs组织中Survivin表达情况 在26例正常子宫内膜组织、32例EMs在位内膜及35例异位内膜组织中Survivin表达阳性率分别为19.23％、43.75％、68.57％。在位和异位内膜组Survivin表达显著高于正常内膜组（P＜0.05），且异位内膜组Survivin表达也高于在位内膜组（P＜0.05）。见表1。 表1 EMs组不同部位与对照组正常内膜（略）注：※在位内膜组与正常内膜组Survivin的表达阳性率比较;※※异位内膜组与在位内膜组Survivin的表达阳性率比较
2.2 EMs中Survivin表达与细胞增殖关系 在Survivin表达阳性的EMs中在位和异位内膜的PCNA标记指数分别为（40.74±8.05）％和（48.16±6.67）％，且Survivin表达越强，PCNA标记指数也越高，两者呈正相关。而Survivin表达阴性的EMs中在位和异位内膜的PCNA标记指数分别为（20.19±7.38）％和（26.13±9.14）％，两者差异有显著性（χ2分别为8.82和9.68，P＜0.05）。
3 讨论
EMs虽为一种良性妇科疾病，但在细胞增殖、凋亡、血管形成、侵袭性等方面与恶性肿瘤类似。最新研究显示凋亡是子宫内膜细胞保持周期性结构和功能稳定的关键因素［3］，正常子宫内膜周期性增生和脱落，是通过细胞增殖和凋亡方式实现的。Harada等［4］在研究EMs在位及异位内膜与正常子宫内膜对凋亡敏感性的实验中，发现患者无论在位还是异位内膜对凋亡敏感性均明显下降，异位者较在位者下降更明显，且无周期性变化，从而推测内膜组织对凋亡敏感性下降可能是引发EMs的一个原因。
Survivin是新近发现的一种凋亡抑制蛋白家族成员，能抑制细胞凋亡，并参与血管形成，对肿瘤细胞的浸润、迁徙起重要作用。Ueda等［5］研究发现，Survivin在异位内膜中的表达较正常子宫内膜明显升高，并与EMs分期、月经周期无关。PCNA是DNA聚合酶δ的辅助蛋白，参与DNA链的复制、修复，可作为细胞周期S期的特异性标记，其表达水平可反映细胞的增殖程度，是判定细胞增殖活性的常用指标。Suzuki等［6］研究发现Survivin过度表达可加速细胞周期S期转换，抑制G1期，并激活Cdk2/cyclinE复合物导致Rb蛋白磷酸化，从而启动有丝分裂及细胞周期的进入。且Survivin过度表达逃避凋亡检查点的检查，而通过有丝分裂促进转化的肿瘤细胞异常增殖［7］。
本研究采用免疫组化方法检测正常子宫内膜和EMs在位及异位内膜组织中Survivin表达，结果发现EMs在位及异位内膜组织中Survivin表达显著高于正常子宫内膜组，且异位内膜的Survivin表达也高于在位内膜组。这表明Survivin在EMs发病机制中起重要作用，EMs的发生有赖于异位内膜细胞的种植，而EMs在位及异位内膜组织中Survivin过度表达，说明异位内膜细胞可能逃避多种外界环境刺激诱导的细胞凋亡，在某种程度上利于异位内膜细胞继续存活、种植，从而导致EMs的发生、发展。本研究还发现EMs患者中Survivin表达阳性者的PCNA标记指数明显高于Survivin表达阴性者，且Survivin表达越强，PCNA标记指数也越高，两者呈正相关。这表明在EMs的发生中Survivin过度表达有促进细胞增殖作用。
总之，本研究结果提示，Survivin可能通过抑制细胞凋亡、促进细胞增殖而在EMs的发病机制中起重要作用。目前，从分子生物学角度探讨EMs病因已成为研究热点，Survivin作为肿瘤特异性抑制凋亡因子，通过对其不断深入研究，必将有利于凋亡机制的进一步阐述，进而为促进细胞凋亡在EMs治疗方面奠定坚实基础，为临床诊治提供依据。
【参考文献】
1 Suganuma N，Harada M，Furuhashi M，et al.Apoptosis in human endometrial and endometriotic tissue.J Horm Res，1997，（Supple3）：42-47.
2 Tamm I，Wang Y，Sausville E，et al.IAP-family protein surviving inhibits caspase activity and apoptosis induced by Fas（CD95），Bax，caspase，and anticancer drugs.Cancer Res，1998，58（23）：5315.
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4 Harada T，Kaponis A，Iwabe T，et al.Apoptosis in human endometrium and endometriosis.Hum Reprod Update，2004，10（1）：29-38.
5 Ueda M，Yamashita Y，Takehara M，et al.Survivin gene expression in endometriosis.J Clin Endocrinol Metab，2002，87（7）：3452-3459.
6 Suzuki A，Hayashida M，Ito T，et al.Survivin initiates cell cycle entry by the competitive interaction with Cdk4/p16（INK4a） and Cdk2/cyclin E complex activation. Oncogene，2000，19（29）：3225.
7 Li F，Ambrosini G，Chu E Y，et al.Control of apoptosis and mitotic spindle checkpoint by surviving. Nature，1998，396（6711）：580.
作者单位：110041 辽宁沈阳，沈阳市第一人民医院妇产科
（编辑：宋 冰）