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异体肢体移植作为复合组织移植有许多需克服的障碍 ［1～3］ ，由于各组织的排斥反应程度不一，出现时间不同，为此需建立排斥反应的检测指标以达到预防和减轻排斥反应发生的目的。本文旨在建立同种异体肢体移植的动物模型，以满足上述基础研究需要。
1 材料与方法
1.1 动物及材料 选用清洁级健康雄性纯系Wistar大鼠和SD大鼠，体重220～300g，各8只（由大连医科大学实验动物中心提供）。将两系大鼠体重相近者相互组对进行后肢移植。
1.2 手术方法 用10%水合氯醛0.3ml/100g作腹腔注射麻醉。用8%硫化钠脱毛剂将一侧后肢脱毛，仰卧位固定于手术台上，常规消毒铺巾。供体鼠、受体鼠均同一术式。以大腿内侧中点为中心纵行切口近端至腹股沟韧带上0.5cm，大腿中段环形切口，近腹股沟处游离股动脉、股静脉、股神经，结扎血管分支。于大腿中段离断肌肉、坐骨神经，血管夹夹闭股动脉、股静脉，离断股骨，使大腿中段以远的后肢完全离断，离断肢体肝素化后用温盐水纱布包裹断肢待移植。修短离断的股骨残端，将断肢与移植肢体残端的股骨断端用16号注射针头作髓腔内固定，缝合肌肉，用9-0显微缝线修复坐骨神经，清理股动、静脉断端，用肝素盐水冲洗管腔，用10-0显微缝线分别吻合股动、静脉，股神经，去除血管夹，吻合血管通畅，缝合皮肤。术中甲硝唑冲洗。
1.3 术后处理 手术完毕见再植肢体血运良好后，皮下注射肝素0.2ml/100g（200ml生理盐水内含肝素12500U）以抗凝，腹腔内注射青霉素10万U/100g。大鼠术后约1h清醒，单独笼养，按清洁级动物手术后常规饲养，保持室温25℃。术后青霉素继续应用3天，预防感染。
1.4 观察项目及模型的评估 一般情况:术后观察大鼠活跃程度，排泄情况，每周测量体重一次;观察伤口有无分泌物、红肿;肺部有无感染，呼吸道是否阻塞，有无分泌物;每天观察异体移植肢体排斥反应的变化:包括肢体的颜色、温度、毛细血管反应以及肿胀程度;观察各组移植肢体存活时间。
2 结果
2.1 移植结果 以移植术后3天大鼠异体肢体颜色红润，皮温正常为移植成功标准。手术16例，全部成功。术后观察曾出现静脉危象4例，经及时切除原吻合口再次静脉吻合，获得通畅。
2.2 一般情况及移植肢体情况 大鼠术后1h完全清醒开始舔伤口，行走，饮水，恢复大小便，活动较少;术后第1～3天大鼠的精神状况、饮食、大小便、生命体征与手术前相比无明显差异。术后第1～2天移植肢体皮温较健侧肢体稍高，轻度肿胀，毛细血管充盈试验良好，皮温略高。术后第2～3天移植肢体明显肿胀，足背部为重，颜色红润。皮温正常。术后第3～6天移植肢体肿胀减退，术后第5～7天移植肢体皮肤开始变得干燥，结痂，皮肤切口有少许脓性分泌物。术后第8天始移植肢体变黑坏死，大鼠舔食。移植肢体平均存活（5.22±0.68）天。
3 讨论
本实验建立了简便易行的同种异体肢体移植模型，为临床进行肢体移植的基础研究提供了条件。
3.1 大鼠后肢的解剖特点及手术技巧 大鼠后肢的血管主要是股动脉、股静脉，神经有股神经、坐股神经。股动静脉、股神经由腹股沟韧带中点向股内侧相伴下行，其主要分支有腹壁浅动静脉、旋髂动静脉。坐股神经位于臀大肌深面。手术技巧:（1）手术采用纵行切口加环形切口，可以充分暴露术野。（2）游离血管前结扎腹壁浅动静脉、旋髂动静脉分支，结扎分支血管可以明显减少离断肌肉时失血。（3）在血管分支以上与腹股沟韧带之间作为血管吻合处，此处血管粗大，再通畅效果好，血管蒂长利于吻合。（4）内固定时，游离肢体的股骨先用10号针头顺股骨髓腔向股骨远端穿出作为导针，再用20号针头套入导针内逆行穿入固定于受体股骨上，此内固定方法较克氏针简便易行。（5）缝合肌 肉时不要造成股动静脉牵拉、紧张以防出现血管危象。（6）吻合血管前离断肢体彻底肝素化，预防微血栓形成，减少手术并发症。
3.2 静脉危象的处理 大鼠肢体移植中静脉的吻合是移植手术的关键，静脉的直径虽然较动脉0.4～0.6mm粗，但其壁薄，处理其周围组织时最好在肝素盐水中进行使管壁与周围组织清楚分开再进行分离。本实验中出现4例静脉危象，探查发现并非吻合口栓塞，而是吻合口近端持续痉挛所致，剪除原吻合口，机械扩张近端静脉，温低浓度利多卡因浸泡，再次吻合，获得良好通畅。在本实验中未出现动脉危象。总之，熟练精湛的显微外科技术、持久的耐力和高度的自控力是移植手术成功的关键 ［4，5］ 。
3.3 肢体移植模型的应用 随着肾脏、心脏等重要脏器移植的成功，器官移植进入了新阶段，而同种异体肢体移植为肢体缺失的人获得劳动、工作成为可能 ［6，7］ 。因此进行与肢体移植有关的实验研究成为目前的热点。本实验Wistar和SD大鼠是异基因组品系，机体健康免疫力强，急性排斥反应明显，可成功建立移植排斥反应模型。采用不同的干预因素对同种异体肢体移植影响的基础研究，大鼠按体重不同约有6～8ml外周血可供免疫检测。因此大鼠肢体移植模型的建立为临床提供了低成本样本，同时，也为人类的肢体移植成功奠定了重要的理论基础。
参考文献
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作者单位:116021辽宁大连医科大学附属第一医院骨科