HPLC测定白癜风片中补骨脂素的含量

　　【摘要】 目的  建立白癜风片中补骨脂的高效液相测定方法。 方法  采用高效液相色谱法，色谱柱为Diamonsil ODS（5μm，250mm×4.6mm）分析柱;流动相为:甲醇-水（42:58），检测波长245nm:流速:1.0ml/min。 结果  精密度和稳定性良好;补骨脂素在3.72～33.48μg/ml范围内线性关系良好，r=0.9993;异补骨脂素在3.76～33.84μg/ml范围内线性关系良好，r=0.9999。 结论  本方法简便、专属性、重现性好，可有效控制白癜风片的质量。
       
    
　　Determination of Psoralen and Lsopsoralen in Baidianfeng Tables by HPLC
     
　　Wu Yushan，Liu Yu，Ren Ling，et al.
   
　　Heilongjiang Fuhe Huaxing Pharmaceutical Group Co，Ltd，ZhaoDong，Heilongjiang151100.
  
　　【Abstract】 Objective To develop a method for determination of Psoralen and Lsopsoralen in Baidianfeng Ta-bles.Methods RPHPLC with diamonsil ODS（5μm，250mm×4.6mm）column was used.The mobile phase of Pso-ralen and Lsopsoralen was methanol-water（42:58），with the flow rate of1.0ml/min and detection wavelength at245nm.Results Precision and stability well;The linear range was from3.72μg/ml to33.48μg/ml（r=0.9993）for Psoralen and from3.76μg/ml to33.84μg/ml（r=0.9999）for Lsopsoralen.Conclusion The method is convenient，selective and reproducible for Psoralen and Lsopsoralen in Baidianfeng Tables.
     
　　【Key words】 Baidianfeng Tables Psoralen Lsopsoralen HPLC
      
　　白癜风片是由补骨脂、黄芪、蒺藜、红花、乌梢蛇、当归、川芎等中药材经粉碎、提取制成的纯中药复方制剂。具有平肝熄风、疏肝理气、祛风散瘀、清热燥湿、调和气血、促进微循环之功效，临床上主要用于白癜风病，尤其是对不稳定型白癜风。补骨脂是本品中的主要活性成分，为了控制产品质量，我们拟定补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素作为检测指标，通过实验建立了专属性好、灵敏度高、简便易行的HPLC法。
    
　　1 仪器与试药
    
　　高效液相色谱仪:日本JASCO-7520输液泵，JASCO-7520紫外检测器，色谱王工作站。甲醇为色谱纯试剂，其他均为分析纯;补骨脂素和异补骨脂素对照品由中国药品生物制品检定所提供;白癜风片由黑龙江福和华星制药厂提供。
    
　　2 方法与条件
    
　　2.1 色谱条件 十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇-水（42:58）为流动相;检测波长为245nm。进样10μl。理论板数按异补骨脂素计应不低于2000。
   
　　2.2 对照品溶液的制备 取补骨脂素和异补骨脂素对照品，精密称定10mg，分别置100ml量瓶中，加甲醇适量溶解并稀释至刻度，摇匀，作为标准贮备液（每1ml含0.1mg补骨脂素、每1ml含0.1mg异补骨脂素的溶液）。
   
　　2.3 供试品溶液的制备 取本品20片，称定重量，研细，精密称定1.5g，分别置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声30min，用甲醇稀释至刻度，摇匀;滤过，即得供试品溶液。
   
　　2.4 线性关系试验 精密量取两种供试品液各1ml、3ml、5ml、7ml、9ml，分别置同一25ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀;各进样10μl，记录峰面积，并以各峰面积值对浓度进行线性回归，得回归方程:补骨脂素:A=92326.06c-11333.15 r=0.9993异补骨脂素:A=88343.48c-28599.90 r=0.9999 说明补骨脂素在3.72～33.48μg/ml、异补骨脂素在3.76～33.84μg/ml的范围内均有良好的线性关系。
   
　　2.5 精密度试验 取样品制一供试品溶液，重复测定6次。RSD值分别为1.50%（补骨脂素）、1.02%（异补骨脂素）。
   
　　2.6 重现性试验 取同一批号样品5份，制成供试品溶液，测定补骨脂含量，按补骨脂素与异补骨脂素的总量计，平均值为0.38mg/片，RSD值为1.22%。
   
　　2.7 溶液稳定性试验 取重复性项下一溶液，分别在0、2、4、6、8、10h进行测定，RSD值分别为0.89%（补骨脂素）、1.61%（异补骨脂素）。
   
　　2.8 加样回收率 采用加样回收法，取已知含量的样品适量，研细，分别精密称定，分别加入补骨脂素与异补骨脂素对照品，照供试品溶液制备方法进行制备，按上述色谱条件测定，计算平均回收率。平均回收率为101.3%，RSD=1.6%。
   
　　2.9 含量测定 按本文的色谱条件，共测定3批供试品，每粒含补骨脂按补骨脂素与异补骨脂素的总量计，分别为0.38mg/片、0.36mg/片、0.35mg/片。
    
　　3 讨论
    
　　实验中曾观察到柱温的变化会影响不同谱图中同一色谱峰的保留时间，为获得重现性较好的色谱图及相应的峰面积，应保持柱温恒定。
   
　　通过试验表明:高效液相色谱法测定白癜风片中补骨脂素的含量，可以排除干扰，得到较好分离效果，又能直接采用色谱峰面积定量，结果准确，提高了专属性，且方法简单，重现性较好，便于推广。 

　　作者单位:151100黑龙江肇东黑龙江福和华星制药集团股份有限公司