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关键词 利培酮 海马 DNA RNA
Efects of DNA，RNA meatabolism in hippocampal pyramidal neurons of risperi
done rats，studied by laser scanning congocal Yin Bin，Chen Zhongxian，
Chen Yaowen，et al.
Department of Neurous，The Second University Hospital of Shantou University，Shantou515031.
【Abstract】 Objective To explore effects of DNA，RNA metabolism in rat hippocampus pyramidal neurons by risperidone.Methods Twenty-two Sprangue-Dawley ratswere divided into test and control group，risperidone was given to test group rats intraperitoneally for7days，then LSCM and Acridine Orange was used to investigate the DNA，RNA change in rats brains slice hippocampus of test and control group.Results The fluorescence pixels of DNA/RNA of average foreground hippocampus pyramidal neurons by risperidone rats was1.662±0.269，The fluorescence pixelsof DNA/RNA of average foreground hippocampus pyramidal neurons by risperidone rats was1.799±0.557，There was no significant difference in two groups（p>0.05）.Conclusion It is suggested that risperidone can’t changes DNA，RNA metabolism in rat hippocampus pyramidal neurons.
Key words risperidone hippocampus DNA RNA
中枢神经阻滞剂对认知功能有正面和负面的影响，临床症状的缓解和注意力改善，可提高很多与认知有关的神经心理学评定。反之，阻断神经递质传导，及其本身的抗胆碱能作用，对学习、记忆和其它认知功能极为不利。海马在学习和记忆等活动中起着重要作用 ［1，2］ 。本文旨在通过使用大鼠海马脑薄片标本，采用激光共聚焦显微镜技术 ［3］ ，了解利培酮对海马CA3区锥体细胞内核酸代谢的影响，为新药在临床合理应用提供理论依据。
1 材料和方法
1.1 实验动物、试剂与仪器 本实验采用10～15天龄SD大鼠22只，雌雄不拘。实验动物由汕头大学医学院动物中心提供。美国产ACAS Ultima-321型激光共聚焦显微镜系统（Meridian Inc）。美国产WSZ-286-82解剖显微镜。上海产FA1604电子天平。
1.2 实验方法
1.2.1 实验动物分组及动物模型建立 22只10～15天龄SD大鼠随机分两组，给10只大鼠腹腔注射0.02mg/ml的 利培酮溶液（利培酮粉由西安杨森制药厂提供）1ml（利培酮组），给12只大鼠腹腔注射生理盐水1ml（对照组），均注射7天，1天2次，然后断头取海马标本。
1.2.2 海马脑片的制备为降低脑代谢率，于实验前将动物置于冰水中降温，仅有微弱呼吸时，迅速断头取脑，常规切取左侧半球，细心剔出海马标本。用手控切刀沿海马槽走向连续切取厚400μm的脑片4片，并用特制毛刷将脑片小心移入盛有被混合气饱和的冷冻（95%O 2和5%CO 2 ）新鲜配制的人工脑脊液中。将脑片移入一特制培养皿中，培养皿容积为400μl继续通以混合气，加入4μl0.1%吖啶橙（AO）在室温下染色1h。
1.2.3 用激光扫描共聚焦显微镜获取连续共聚焦图像 将染色后的脑片用混合气饱和的人工脑脊液冲洗3遍，静置片刻后，在继续通以混合气条件下，将样品放在激光扫描共聚焦显微镜的载物台上，做连续切片扫描。
1.2.4 图像分析与数据处理 ACAS Ultima-312型激光扫描共聚焦显微镜系统含有图像处理系统。试验结果用SPSS10.0统计软件分析，结果的数据以X±s表示，采用独立样本t检验对两组间均数进行比较。
2 结果
由于荧光染料AO是双重染色探针，可同时染色组织中的DNA和RNA两种成分，激光激发后，经两个检测器（PMT1和PMT2）分别接收不同波的发射光，即图像上分别显示的绿色和红色，分别代表DNA和RNA两种成分，黄色则是两种成分按一定比例合成。为避免每次实验时由于染色等因素可能造成的误差，本实验将每一标本的DNA和RNA荧光染色像素之比进行统计比较，结果发现利培酮组大鼠海马脑片DNA和RNA的荧光像素之比为1.662±0.269，而对照组大鼠海马脑片DNA和RNA的荧光像素之比为1.799±0.557，两组间无统计学差异（t=0.753，P=0.462>0.05）。
3 讨论
药物治疗对病人生活质量的影响越来越引起医生和病人的重视，这也是治疗依从性的影响因素之一。有些中枢神经阻滞剂对病人的认知功能有正面和负面的影响，虽然，大量事实表明在学习和记忆等认知活动过程中，伴随有脑内核酸、蛋白质和多糖等多种生物大分子的合成增多，但目前中枢神经阻滞剂对认知功能影响的作用机制的认识还不十分清楚 ［4］ 。由于海马在人类记忆缺失上关系密切，而它的解剖位置和纤维联系的特点，提示它可能在脑功能中起着关键作用，故在研究脑的学习和记忆的功能上，海马是一个重点，加上它具有片层组织结构，结构相对较简单，是一个很适用的研究模型，因而对它的研究一直成为研究的热点 ［1，2］ 。郭沈昌等研究发现利培酮对鼠脑海马记忆长时程增强（LTP）现象有影响，提示该种抗精神病药对学习、记忆等认知功能有一定的影响 ［5］ 。马光瑜等报道用激光共聚焦显微镜观察吗啡成瘾对大鼠海马锥体神经细胞内DNA、RNA的 影响 ［6］ ，但迄今为止，尚无用激光共聚焦显微镜对使用中枢神经阻滞剂后大鼠海马脑片锥体神经细胞的DNA和RNA进行研究的报道。本文利用acridine orange（AO）荧光探针对细胞核进行荧光染色，并根据DNA和RNA分子大小和构型的不同，在完全相同的条件下，使DNA发出黄绿色和绿色荧光，使RNA发出橙色或红色荧光，用激光共聚焦显微镜技术 ［6］ ，以期发现利培酮大鼠海马脑片锥体细胞内DNA和RNA的变化，以了解利培酮对海马内核酸代谢的影响。
实验结果表明利培酮组和对照组大鼠海马脑片DNA和RNA的荧光像素无统计学差异。利培酮是新一代的神经阻滞剂，其抗胆碱能作用较弱，可能是对学习、记忆等认知功能影响较小的理论依据之一。
参考文献
1 Bliss T V，Collingridge，G.L.A synaptic model of memory:long-term potentiation in the hippocampus.Nature，1993，361:31-39.
2 韩太真.长时程增强现象的研究.生理科学进展，1990，21:76-77.
3 陈耀文，等.激光扫描共聚焦显微镜三维重建花粉的组织结构.中国体视学与图像分析，1997，2（4）:223:225.
4 许昭纷.神经生物学，第3版.上海:上海医科大学出版社，1999，386-480.
5 郭沈昌，殷彬，等.利培酮和利培酮对鼠脑海马切片长时程增强地研究.中华精神科杂志，2001，34（3）:156.
6 马光瑜，樊小力，等.用激光共聚焦显微镜观察吗啡成瘾对大鼠海马锥体神经细胞内DNA、RNA的影响.神经解剖学杂志，2000，16（2）:113-115.
作者单位:515041广东省汕头大学医学院第二附属医院神经内科
广东省汕头大学医学院中心实验室
广东省汕头大学第三临床医院