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Key words UF-100urine sediment analyzer urine dry chemistry analyisis R/S2003urine sediment anaˉlytical station microscopic examination of urine sediment
尿液中有形成分的检查对临床诊治泌尿系疾病及全身相关疾病具有极其重要的作用。目前应用于临床的尿液检测方法主要有手工法、干化学法、半自动如DiaSys R/S2003尿沉渣分析工作站(R/S2003工作站)法,以及最新应用于临床的UF系列流式尿沉渣全自动分析仪法。这4种方法各有其优点及局限性。本文重点探讨UF-100流式尿沉渣仪(简称UF-100)主要参数检测临床应用效果,并与其他3种方法进行对比检测,现总结分析如下。
1 材料及方法
1.1 仪器 日本Sysmex公司UF-100尿沉渣全自动分析仪及效期内配套试剂,经性能评价符合要求的美国DiaSys公司R/S2003尿沉渣分析工作站,中国桂林医疗电子仪器厂生产优利特-300尿干化学分析仪(Uritest-300)及烟台宝威生物技术有限公司奕仁URS-11A尿液分析试纸(URS-11A,在效期内),Olympus显微镜和离心机。
1.2 标本来源 随机收集住院病人尿样143份。
1.3 实验方法 用清洁杯收集住院病人洁净中段晨尿,充分混匀后分3管,1管用于UF-100尿沉渣分析仪,1管用于干化学分析,1管用于R/S2003尿沉渣分析工作站,剩余的用于尿沉渣镜检。
1.3.1 UF-100法 按仪器操作说明进行检测,每天用上海伊华医学科技有限公司生产和Sysmex公司提供的效期内尿沉渣质控物进行监控。
1.3.2 R/S2003法 按仪器操作说明进行检测,取充分混匀后的尿标本10ml加于有凸头的专用离心管中,(relative centrifugal force,RCF)400g离心5min,倾去上清液9.8ml,剩余0.2ml沉渣充分混匀后吸入流动计数池中,用双盲法计数25个小格(0.25μl容积)的细胞和管型数。
1.3.3 干化学分析法 取URS-11A试纸于Uritest-300分析仪上,按说明书要求进行检测。
1.3.4 尿沉渣镜检 取混匀后的10ml尿以RCF400g离心5min,倾去上清尿,沉渣残留量约0.2ml,摇匀、涂片,于高倍镜或低倍镜下分别观察红、白细胞数或管型数,并分别按高倍视野或低倍视野最低-最高值报告结果,所有显微镜下检测由经验丰富的专人完成。
1.4 UF-100法有关性能指标评估
1.4.1 精密度 取新鲜全血配成RBC含量约630个/μl、WBC含量约11~12个/μl的样本,UF-100法分别重复检测20次进行精密度检查。
1.4.2 准确性和线性 取新鲜全血准确制成RBC含量(个/μl)5294、等倍稀释成2647、1324、662、331共5个浓度,同法制成WBC含量(个/μl)320、等倍稀释成160、80、40、20 的样本,UF-100法分别重复3次检测取均值,进行准确性和线性试验。
1.4.3 携带污染率 分别取新鲜高、低值RBC、WBC尿样各3份,先高后低进行检测,按下式计算以检查其互染率。携带污染率=(低值最高值-低值最低值)/(高值最高值-低值最低值)
1.5 数据统计学处理 组间比较用卡方检验,P<0.05为差异有显著性。
2 结果
2.1 精密度 RBC和WBC20次测定均值(/μl)、标准差(s/μl)和变异系数(CV%),结果见表1,均达到仪器性能要求。
表1 UF-100法RBC、WBC精密度测定结果(略)
2.2 准确性和线性 检查结果见表2、3,从表中可看出UF-100检测RBC、WBC的准确性和线性好。
表2 RF-100法测定RBC的准确率和线性关系(略)
表3 UF-100法测定WBC的准确率和线性关系(略)
2.3 携带污染率 RBC3个高值(个/μl)为496、481、474,3个低值为12、10、8,携带污染率为0.8%。WBC3个高值(个/μl)为155、147、168,3个低值为9、6、7,携带污染率为1.8%。在一般实验室接受范围内。
2.4 4种方法红、白细胞和管型阳性判断标准 [1~3] UF-100参考值范围:男性(Male):红细胞(RBC)0~12个/μl,白 细胞(WBC)0~12个/μl,女性(Female):RBC0~24个/μl,WBC0~26个/μl,管型(CAST)0~0.6个/μl;R/S2003参考值范围:RBC0~7个/μl,WBC0~10个/μl,CAST0个/μl;显微镜检参考值范围:RBC0~3个/μl,WBC0~5个/μl,CAST(透明)0~1个/全片。在上述范围视为阴性(-),超出其范围视为阳性(+),4种检测方法结果见表4。
表4 UF-100法与其他方法检测RBC、WBC和CAST结果(略)
注: # 为其他方法与UF-100法结果比较P值。R/S2003与干化学法比较RBC的P值<0.01、WBC的P值>0.05,R/S2003与镜检法比较RBC、WBC、CAST的P值均>0.05,干化学法与镜检法比较RBC、WBC的P值均>0.05
3 讨论
UF-100流式尿沉渣全自动分析仪是目前测定尿液有形成分的先进仪器,该仪器使用全自动流式细胞术和电阻抗原理,以激光散射强度、散射波幅度及荧光强度、荧光波幅技术识别和计数尿中有形成分,通过对前向散射光波形、前向荧光波形和电阻抗值大小的综合分析,得出细胞的形态、细胞的横截面积、染色片段的长度、细胞容积等信息 [4~6] ,据此准确定量出尿中RBC、WBC、CAST、细菌(BACT)、上皮细胞(EC)等参数,提示病理管型(Path.CAST)、小圆细胞(SRC)、精子(SPERM)、结晶(X’TAL)、酵母样菌(YLC),并给出直方图和散点图,便于临床鉴别是肾性还是非肾性RBC以及实验室排除某些干扰因素。
我们比较了UF-100仪、R/S2003尿沉渣分析工作站、干化学法以及显微镜检法对比检测尿液标本的结果。从表4中可见,UF-100检测RBC与另外3种方法差异有显著性(P<0.01),UF-100检测RBC呈阳性而其它3种方法呈阴性者,R/S2003工作站法有36例,干化学法有21例,常规镜检有27例。其中R/S2003工作站法的36例阴性者中,有13例含较多草酸钙结晶,23例含较多细菌和非晶形尿酸盐,提示结晶和细菌对UF-100测定尿红细胞有一定影响。因而要保证尿液新鲜,尽量控制盐类结晶析出和抑制细菌大量繁殖 [7] ,对UF-100测定中细菌或草酸钙等结晶较高的“阳性”标本最好用显微镜或R/S2003工作站法排查 [5] ,以减少误诊。
干化学法测定RBC主要是利用Hb中的亚铁血红素,具有过氧化物酶样活性,可使纸块中氧化氢茴香素或H 2 O 2 稀释分解出氧离子氧化邻联甲苯胺成蓝色,据此检测RBC、游离血红蛋白的存在和含量。由表4可知,干化学法对RBC的阳性检出率明显高于R/S2003工作站法(P<0.01)。分析其原因,有7例为具有过氧化物酶活性的物质如肌红蛋白、细菌过氧化酶、易热酶干扰了干化学的测定,产生假阳性;4例为标本中RBC在经肾脏、输尿管、膀胱排出体外或离心过程中Hb逸出形成的影红细胞或发生细胞破碎,用R/S2003工作站法检测时出现漏检,产生假阴性。但干化学法具有快速、操作简单、成本低等优点,易于临床应用。如应用干化学法筛选结合UF-100对RBC精确计数和R/S2003工作站法或显微镜检排除假阳性,即可提高RBC检测的灵敏性和特异性。
关于WBC的检测,UF-100与R/S2003工作站法、干化学法及显微镜法差异有显著性(P<0.001)。R/S2003工作站法与常规镜检法基本接近(P>0.05)。其中UF-100检测阳性而R/S2003工作站法与常规镜检阴性的标本分别为27例和26例。干化学法检测为阴性而R/S2003工作站法与常规镜检法为阳性的标本分别为11例和12例。分析其原因,UF-100可能将小圆上皮细胞(肾小管上皮细胞)、移行上皮细胞等也误认为WBC,本文有6例UF-100检测为WBC阳性而R/S2003工作站法和常规镜检法检测为小圆上皮细胞。干化学法检测WBC是通过试纸带上的吲哚酚酯与粒细胞浆中的酯酶结合产生颜色变化而测定,淋巴细胞、单核细胞浆中无酯酶,干化学法不能检测之。故对于WBC的检测,应以R/S2003工作站法或显微镜检法为 准。干化学法中亚硝酸盐(NIT)的测定是诊断尿路感染的指标之一,但必须为革兰阴性杆菌感染、尿液在膀胱内储存4h以上、摄取物中有适当硝酸盐,且干扰因素多。本资料干化学法检测NIT阳性的标本有7例,UF-100检测细菌量从2938.6~41935/μl,差别很大。故NIT不能反映治疗前后细菌量的改变,因而在判断尿路感染及疗效观察时,UF-100更灵敏、有效。
UF-100法与R/S2003工作站法和常规镜检法检测管型的结果差异很大(P<0.05),本文UF-100检测管型阳性的22例标本中,与R/S2003工作站和常规镜检法同时符合的只有7例,只与R/S2003工作站法符合的有2例。不相符的13例标本工作站法和常规镜检漏检2例,有8例含有大量粘液丝,3例含有不明有形杂质。进一步说明UF-100检测管型灵敏度较高,但较多粘液丝和有形杂质会导致其产生假阳性,且UF-100法只能识别透明(正常)管型和病理管型,不能对病理管型进行分型 [5] 。所以在利用UF-100较高的灵敏度作为过筛试验时,对于阳性标本,再用显微镜或R/S2003工作站法作进一步确诊,并明确区分管型性质,以利疾病的鉴别诊断。
UF-100法有关性能指标评估其精密度高,准确性和线性好,携带污染率低,易开展质控保证检测质量,加之提供参数多,阴性结果几乎100%符合,尤其对红细胞形态根据直方图能区别小细胞型、均匀型、混合型,可帮助临床了解出血部位。与公认Kova板镜检法比较符合率良好 [8] 。若与干化学法的快速定性联合作为过筛,可大大减少检验人员手工操作繁杂的劳动量,再结合R/S2003工作站法或显微镜复查以排除其干扰因素,将使检测结果更准确可靠,更利于临床诊治疾病。
参考文献
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作者单位:550002贵州省人民医院检验科
550004贵阳医学院检验系(实习生)