微波高压抗原修复在ER、PR免疫组化染色中的应用

    【摘要】 目的  选择能显示最佳的ER、PR染色效果高温抗原修复法。 方法  分别采用微波抗原修复和微波高压抗原修复两种抗原修复法对100例乳腺癌切片抗原修复，比较二者对ER、PR免疫组化检测效果的影响。 结果  经微波高压抗原修复，乳腺癌ER、PR染色阳性者分别为54%、49%，显著高于经微波抗原修复的染色效果42%、39%，且不易脱片。 结论  乳腺癌ER、PR免疫组化染色采用微波高压抗原修复后，染色阳性率明显优于经微波抗原修复者，值得推广应用。

　　【关键词】  抗原修复 免疫组织化学染色 微波
  　　
　　检测组织切片上某些肿瘤细胞的雌激素受体（Estrogen receptor，ER）和孕激素受体（Progestogen receptor，PR），对指导临床内分泌疾病治疗及推测肿瘤预后有重要意义。要做好雌、孕激素受体（ER、PR）免疫组化染色，抗原修复是一个重要的步骤，修复方法的选择会直接影响ER、PR的免疫组化染色质量，本实验通过对微波高压抗原修复和微波抗原修复两种抗原热修复法进行分析和比较，旨在探讨显示最佳的ER、PR染色结果的抗原修复方法。

　　1 材料和方法
    
　　1.1 材料 （1）收集本院手术切除有明确病理诊断的乳腺癌共200例，随机分为实验组、对照组各100例，均用10%的福尔马林固定，常规脱水石蜡包埋。（2）家庭用750W格兰仕微波炉1台。（3）ER、PR检测试剂盒均为福建迈新公司提供SP试剂盒。（4）经多聚赖氨酸液浸泡处理后的载玻片。（5）柠檬酸盐微波抗原修复缓冲液（0.01M，pH6.0）。（6）DAB显色液。（7）茶花牌微波高压饭锅。

   　 1.2 方法 （1）4μm厚石蜡切片，常规脱蜡至蒸馏水洗。（2）实验组（A组）进行微波高压抗原修复，将盛有柠檬酸盐缓冲液，置于微波高压饭锅，再放入微波炉中，在强档下加热至沸腾，再在中低档持续加热10min，从微波炉取出后在室温下自然冷却，用PBS液冲洗切片3次，每次3min，随后按S-P法免疫组化试剂盒操作步骤进行操作。（3）对照组（B组）微波抗原修复，同样微波加热，只是用普通微波塑料盒直接放入微波炉加热，最后也进行S-P法免疫组化染色。
    
　　2 结果
    
　　ER、PR表达均定位于胞核，以胞核呈棕黄色颗粒为阳性。染色结果判断标准:无阳性细胞着色或阳性细胞数<10%为阴性（-）;阳性细胞数10%～50%为弱阳性（+）;阳性细胞数>50%为强阳性（++）。微波高压抗原修复处理过的切片，ER、PR染色强度明显强于一般微波抗原修复者，而且背景清晰。详见表1。
     
　　从表1中可见，对照组中采用普通微波抗原修复检测ER100例，其中阳性42例（42%），检测PR100例，其中39例（39%）。实验组采用高压微波抗原修复检测ER100例，阳性54例（54%），检测PR100例，阳性49例（49%）。对照组和实验组ER阳性率的比较P<0.05，提示实验组高于对照组;对照组和实验组PR阳性率比较，P=0.1234，提示两种PR阳性率间差异无显著性;但此两组资料PR强阳性率之间比较，P<0.01，提示实验组高于对照组。
    
　　表1 两种高温抗原修复法对乳腺癌组织ER、PR抗原修复效果的比较略
    
　　3 讨论
    
　　ER和PR是调节性器官细胞生长发育的雌激素和孕激素的受体，ER、PR阳性率高，说明细胞分化好，恶性程度低，对内分泌治疗敏感性高，与患者的预后和治疗有密切关系。因此，对乳腺癌ER、PR的检测，已作为病理科常规检测项目。
   
　　外检组织由于固定剂甲醛的醛基与组织细胞中蛋白质的氨基形成醛键或羧甲基;或甲醛使组织细胞蛋白质发生交联，使细胞内抗原决定簇被封，为了充分暴露抗原，普遍采用微波或高压锅使封闭的抗原成分暴露。抗原修复法能使抗原决定簇暴露的机制主要为:（1）溶解、洗脱覆于抗原表面的变性蛋白 ［1］ ;（2）缓冲液通过水解作用破坏抗原与其它分子间的交联 ［2］ 。（3）微波场内离子或极性分子直接碰撞的修复作用:由于极性分子、离子的高速运动直接撞击“交联链”，使因扭曲、折叠而异常改变的结构恢复正常 ［3］ 。（4）高压高温也能使交联断裂或折叠的肽链解开，从而暴露抗原决定簇 ［4］ 。（5）微波可使抗原分子上结合的其它大分子蛋白解离而被洗脱，从而降低免疫组化染色背景，增加对比度。（6）高压高温加热温度可达120℃以上，生物素是一种对高温比较敏感的物质，利用高温可部分或完全灭活其活性，温度高，则其灭活效果好，从而避免内源性生物素引起的假阳性。
   
　　综上所述，本实验利用微波和高压高温的双重优势，取得比较理想的修复效果，是一种值得推广的免疫组化抗原修复法。
     
　　参考文献
    
　　1 熊正文.胰蛋白酶尿联合消化处理提高免疫组织化学敏感性的探讨.北京军区医药，1993，5:461.

  　  2 Shi S R，Imam S A，Yong L，et al.Antigen retrieval immunohistoche-mistry under the influence of pH using monoclonal antibodies.J His-tochem Cytochem，1995，43（2）:193-2011.

　　3 Leong AS.Microwaves in diagnosis immunohistochemistry.Eur J Mor-phol，1996，34:381.

    　4 Andrew J Norton，Suzanne Jordan，Patricia Yeomans.Brief，high-tem-perature heat denaturation（pressure cooking）:a simple and effective method of antigen retrieval for routinely processed tissues.J Pathol，1994，173:371-3791.    

　　作者单位:518036北京大学深圳医院病理科