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【摘要】 目的 通过观察复方中药情志舒对大鼠胃窦壁内胆碱酯酶（AChE）含量的变化，研究情志舒方对非溃疡性消化不良（NUD）治疗作用的机理。 方法 通过情志异常（激怒）制造肝胃不和型非溃疡性消化不良大鼠动物模型;采用组化方法测定各组胃窦壁内AChE的含量。 结果 情志舒能显著增加大鼠胃窦壁内AChE的表达（P<0.01）。 结论 情志舒治疗肝胃不和型非溃疡性消化不良作用机制可能与增强胃肠运动力、增强胃窦乙酰胆碱活性有关。
【关键词】 胆碱酯酶含量;非溃疡性消化不良;情志舒
非溃疡性消化不良（non-ulcer dyspepsia，NUD）是指具有上腹痛、腹胀、早饱、嗳气、厌食、烧心、反酸、恶心、呕吐等上腹部不适症状，经各项检查排除器质性疾病的一组消化内科最常见的临床症候群 ［1］ 。非溃疡性消化不良发病十分普遍，几乎每个人一生中都曾有过消化不良的症状，只是持续时间的长短，影响正常生活的程度不同。据统计，大约26%～35%消化不良患者就诊，其中19%～76%为非溃疡性消化不良 ［2，3］ 。
1989年美国芝加哥国际NUD研讨会提出五类分型，即反流样、溃疡样、运动障碍样、吞气症、特发型 ［4］ 。非溃疡性消化不良在祖国医学属“胃脘痛”、“痞满”范畴。对本病目前尚无统一的中医辨证分型标准，依患者临床表现及病因大致分为肝胃不和、肝胃郁热、肝郁脾虚、脾胃亏虚四个证型，其中肝胃不和尤为多见，约占45%。中医认为情志因素在其发病中起着重要的作用。若七情失和，肝气犯胃，则气机逆乱，升降不利，而见痞满等证;情怀不畅，肝郁气滞，疏泄失职，横逆犯胃，气血而不行，胃脘作痛。中药情志舒是李国成教授经多年精心研究用于治疗非溃疡性消化不良的中药复方，该方采用疏肝解郁，理气导滞的方法，治疗非溃疡性消化不良患者治愈率高达95% ［5］ 。为了探讨其作用机理，笔者用情志舒对大鼠胃窦壁内胆碱酯酶（AChE）含量和大鼠胃运动频率、幅度的变化进行了观察。
1 材料
1.1 实验动物 清洁级Wistar雄性大白鼠20只，体重180～200g，均由华中科技大学同济医学院动物实验中心提供。
1.2 实验用药
1.2.1 药品 情志舒由玄胡、川楝子、厚朴等12味中药组成，饮片由华中科技大学同济医学院附属同济医院中药房提供，全方依处方比例配方。吗丁啉片:西安扬森制药有限公司生产，规格10mg×30片。
1.2.2 药物配制 情志舒:全方共含生药126g，加双蒸水300ml，浸泡2h，煎沸30min，取汁100ml，再加双蒸水200ml，煎沸30min，取汁200ml，二汁合为一，加热蒸发到126ml原液，即每毫升含生药1g，备用。吗丁啉:10mg吗丁啉片加入蒸馏水100ml，制成吗丁啉溶液，即每毫升溶液含吗丁啉0.1mg。
1.3 主要试剂 多聚甲醛（产家:E.Merk）;碘化乙酰硫代胆碱（产家:Fluka）;醋酸钠（产家:上海化学试剂站）;枸橼酸钠（产家:青岛海洋化工厂）;硫酸铜（产家:沈阳红旗化工厂）;铁氰化钾（产家:台州市生化材料厂）;四异丙基磷酰胺
1.4 主要仪器设备 AO恒冷箱冰冻切片机;200GA台式平衡记录仪;723分光光度计80-2离心沉淀器;Olympus光学显微镜;MPZAS多媒体彩色病理图像分析系统;Olympus PM-30照相系统。主要溶液为AChE孵育液。
2 方法
2.1 动物模型的建立 根据激怒刺激的方法 ［6］ ，利用大鼠性情暴躁，易于激怒，适当给予低强度刺激就能引发大鼠间剧烈打斗的特性，将Wistar雄性清洁级大白鼠20只，随机分为4组，每组各5只，其中模型组3组，正常对照组1组。模型组，采用纱布包裹尖端的止血钳夹鼠尾巴刺激，使大鼠互相打斗、激怒，每次刺激30min，每隔3h1次，每天刺激4次，1周后，动物饮水、进食明显减少，甚至不思饮食，多呈困倦状，毛发变暗、枯黄，体重随之下降。呈现出较典型的肝胃不和NUD大鼠模型。
2.2 大鼠胃窦壁内胆碱酯酶的测定 大鼠用10%乌拉坦腹腔麻醉［0.1ml/（kg·体重）］。剪开胸腔，温生理盐水300ml沿心主动脉灌流，然后用4%多聚甲醛400ml（0℃～4℃）灌流，组织内固定，取出胃，沿胃大弯剪开，生理盐水冲洗，取胃窦组织块（其部位均定于胃窦后壁中部）于4%多聚甲醛液中固定12h;20%蔗糖液孵育12h，AO恒冷冰冻切片机-20℃、20μm厚度组织切片，PBS漂洗。将切片置于AChE孵育液37℃恒温箱中孵育2h，PBS漂洗，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片，光镜下观察，图像定量分析。
2.3 统计学处理 计数资料、计量资料、全部数据以均数±标准差（ˉx±s）表示。两组间比较用U/t检验。多组间比较用方差分析（ANOVA）。用医学SAS统计软件包在计算机上处理。
3 结果
3.1 所有大鼠打开腹腔，观察胃、肝、胆、脾、肠等各脏器组织结构完好，未发现溃疡等任何器质性病变。
3.2 大鼠胃窦壁内胆碱酯酶 见表1、表2。各组AChE的面密度值、数密度值结果显示:模型组与正常组比较，差异有显著性（P<0.05）;模型组与情志舒组比较差异亦有显著性（P<0.05）。表1 各组大鼠胃窦壁内AChE面密度值比较 （略）注:与空白对照组比较， △ P<0.05;与模型组比较， * P<0.05;与吗丁啉组比较， * P>0.05。 表2 各组大鼠胃窦壁内AChE数密度值比较 （略） 注:与正常组比较， △ P<0.01;与模型组比较， * P<0.05;与吗丁啉组比较， ☆ P>0.05
4 讨论
4.1 非溃疡性消化不良与精神因素的关系紧密 基于中医情志不舒致肝胃不和的理论，及精神因素在NUD发病中的流行病学分析，设计了动物肝胃不和证NUD模型。实验结果显示，该模型组动物未引起溃疡等器质性改变，但在胃肠机械收缩频率、收缩幅度方面均明显差于正常组，从而说明了紧张、焦虑、烦躁等不良情绪是导致非溃疡性消化不良的一个重要因素。
4.2 非溃疡性消化不良与胆碱酯酶 多方面的研究表明，非溃疡性消化不良（NUD）患者胃排空显著延迟，胃电活动减弱，蠕动减慢。本课题亦证实，非溃疡性消化不良大鼠胃机械蠕动波减慢，胃收缩的幅度和频率较正常大鼠低。经过中药情志舒方和西药吗丁啉治疗后，其收缩幅度和收缩频率均得到明显改善。胃肠蠕动受到神经、体液等多因素的调节，胆碱能神经是胃肠道内一种重要的兴奋性神经纤维，其释放的化学递质乙酰胆碱（acetylcholine，ACh）是一种兴奋性的神经递质，可以促进胃肠道平滑肌的收缩蠕动。本研究采用免疫组化方法，测定了模型组动物、空白对照组动物、中西药治疗组动物胃窦壁内AChE的变化情况，了解中药情志舒对胃肠道平滑肌内乙酰胆碱的影响情况。由于没有直接显示ACh的组化方法，而水解ACh的胆碱酯酶（acetylcholinesterase，AChE）与合成ACh的胆碱乙酰化酶（choline acetylase，ChAC），二者是同时存在的，故通常用水解ACh的酶（AChE）来表示胆碱能神经细胞的组织化学特性（Robinson，1971）。AChE特异性较高，能迅速催化水解ACh使其失活，失去神经介质的作用。本课题采用组织化学方法直接检测胃窦壁内AChE的分布情况，以此了解非溃疡性消化不良大鼠胃内ACh的失活情况，以及经中药情志舒治疗后，ACh的含量变化。
结果表明:光学显微镜下，AChE酶组化显示，模型组动物胃窦壁内的AChE明显减少。采用北航多功能彩色病理图像分析系统进行定量分析，两组之间采用检验进行比较，结果显示，模型组动物胃窦壁内的AchE已过度释放，致使ACh被过多地水解失活，从而使胃平滑肌失去正常收缩功能;而经过中药情志舒方和西药吗丁啉治疗后的动物，胃窦壁内的AChE明显增加，说明二者均抑制了AChE的释放，保证了ACh不被过多水解失活，从而保证了ACh促进胃平滑肌收缩的活性。并且经对情志舒组与吗丁啉组的AChE定量分析亦显示出明显差异性，说明二者对于非溃疡性消化不良的促胃动力作用存在差异，而且从形态学上可以看出，情志舒组其胃窦壁内的AChE分布较吗丁啉组更均匀，这可能会使情志舒组胃收缩运动更均匀，在临床上使患者服用后会更舒适，从而对改善非溃疡性消化不良患者自觉症状方面，中药情志舒明显优于吗丁啉。
本研究表明，中药情志舒在非溃疡性消化不良的治疗过程中，有效地抑制了胃窦壁内AChE的释放，因而增强了ACh的活性，使胃的机械活动得以正常进行，保证了胃的正常收缩、蠕动及排空，从而缓解了患者饱胀不适、嗳气反酸等症状。
总之，通过本课题的研究，笔者认为，情志因素是引起非溃疡性消化不良的一个重要因素，中药情志舒采用疏肝和胃、调畅气机的方法治疗肝胃不和型非溃疡性消化不良是行之有效的，其作用机理可能与增强胃肠运动力、增强胃窦乙酰胆碱的活性有关。
【参考文献】
1 Locke GR.The epidemiology of functional gastrointestinal disorders in North America.Gastroenterol Clin North Am，1996，25（1）:1.
2 Champion MC，Drr WC.Evolving concepts in gastrointestinal motility.Oxford:Blackwell Science，1996，148102（4）:1259.
3 Talley NJ.Dyspipsia and dyspepsia subgroups:a populationbased study. Gastroenterology，1992，102（4）:1259
4 侯晓华.消化道运动学.北京:科技出版社，1997，280.
5 李国成，官纯寿.情志舒与多潘立酮治疗非溃疡性消化不良的对照观察.同济医科大学学报，1994，23（4）:295.
6 须惠仁，傅湘琦.肝郁证的动物实验研究.中医杂志，1991，（6）:47.
作者单位:430030湖北武汉，华中科技大学同济医学院 （产家:青岛海洋化工厂）。
（编辑:余 强）