点击显示 收起
【摘要】 目的 探讨标本久置对ELISA法检测乙肝表面抗原的影响。 方法 筛选强阳性、弱阳性及阴性标本若干份，用ELISA法对同一标本进行当天和隔日检测。 结果 强阳性及阴性标本放置前后，乙肝表面抗原检测结果相同，无明显差异，而弱阳性标本放置后，出现假阴性。 结论 标本久置会使乙肝表面抗原的免疫活性减弱，从而遗漏乙肝表面抗原弱阳性者。
【关键词】 ELISA；标本久置；乙型肝炎表面抗原
【Abstract】 Objective Inquiring into effect of long-laid samples on detecting HBsAg with ELISA. Methods Classifying the samples -strong positive samples,weak positive samples and negative samples.Then detecting them respectively with ELISA at once and detecting the same samples the next day. Results There are no obvious differences for strong positive and negative samples.But the weak positive sample appears pseudo-negative after being laid. Conclusion HBsAg immune activity can be weakened after the samples are laid long, then doctors may omit the patients with HBsAg weak positive illness.
【Key words】 ELISA；long-laid samples；HBsAg
酶联免疫吸附试验（ELISA）是20世纪70年代发展起 来的一种酶免疫测定技术。因其敏感、特异、操作简便、重复性好等优点，已在疾病诊断、科研等医学领域中得到广泛的应用。目前，各实验室多采用ELISA法检测乙肝表面抗原（HBsAg），其测定过程中受影响的因素较多［1］，主要有标本、试剂及操作等因素，本文旨在探讨标本久置对检测结果的影响。
1 材料与方法
1.1 血清标本 HBsAg强阳性血清标本45例，HBsAg弱阳性血清标本45例，均来自当天门诊及住院患者，30例健康者血清来自大学生自愿者。将每份已分离的血清均分成两份，一份当日测定，一份置于冰箱4℃保存，第2天取出平衡至室温待测。
1.2 试剂及仪器 ELISA法测定HBsAg试剂盒购自珠海丽珠试剂有限公司；ELM-3000酶标仪。
1.3 研究方法 参照《全国临床检验操作规程》ELISA双抗体夹心法，严格按照试剂盒说明书进行操作，用酶标仪单波长（450nm），空白孔校零后，测定各标本OD值。
1.4 统计学处理 采用SPSS 11.5统计软件分析，运用配对设计t检验。
2 结果
30例HBsAg阴性标本和45例HBsAg强阳性标本，当天和隔日血清检测结果（阴性或阳性）全部一致；45例HBsAg弱阳性标本，隔日检测出现2例假阴性，结果见表1。表1 各组当天与隔日标本HBsAg的检测结果比较 30例HBsAg阴性标本和45例HBsAg强阳性标本，当天和隔日血清OD值比较，差异无显著性（P>0.05）。
45例HBsAg弱阳性标本，当天和隔日血清OD值比较，差异有显著性（P<0.05）。
3 讨论
本组实验显示30例HBsAg阴性标本和45例HBsAg强阳性标本，当天和隔日血清检测结果（阴性或阳性）全部一致，当天和隔日血清的HBsAg的OD值差异无显著性；45例HBsAg弱阳性标本，隔日血清检测出现假阴性率为4.4%（2/45），当天和隔日血清的HBsAgOD值差异有显著性。本实验结果表明标本在冰箱中放置时间过长（如1天以上），可使抗原免疫活性减弱，致使OD值明显降低，导致假阴性出现。
HBsAg是诊断和治疗乙型病毒性肝炎的一个重要的指标，在临床实验中，发现影响ELISA试验的因素很多［2］，由于标本放置过久而造成假阴性，不能及时对该病做出早期诊断，从而延误治疗时间，就会给患者带来不必要的痛苦。故在ELISA检测时，标本要做到及时检测，并且每一步操作都要严格按照说明书，严格控制影响因素，保证测定结果准确、可靠，出具一份有价值的检验报告单。
【参考文献】
1 王叶芳，密辉，王霞.ELISA法检测乙肝表面抗原影响因素的探讨.淮海医药，2000，18（4）：290.
2 李俊峰.造成HBsAg假阳性结果分析.山西预防医学，2002，11（11）：318.
作者单位：050700 河北新乐，新乐市人民医院检验科