应用流式细胞仪对不同病变胃粘膜中DNA含量的分析

  【摘要】 目的 本文应用流式细胞仪分析不同病变胃粘膜中的DNA含量，目的在于为癌前病变及恶性肿瘤提供诊断依据。方法 用流式细胞仪分析了128例不同病变胃粘膜中的DNA含量，其中慢性浅表性胃炎18例，慢性萎缩性胃炎44例，胃溃疡32例，胃癌34例。结果 胃癌组的DNA异倍体阳性率明显高于CSG、CAG组，差异具有十分显著性（P<0.01）;胃癌组的DNA异倍体阳性率与GU组比较差异无显著性（P>0.05）;慢性浅表性胃炎的DNA异倍体阳性率与慢性萎缩性胃炎比较差异无显著性（P>0.05），但慢性萎缩性胃炎有增高趋势。结论 DNA含量的测定有助于对肿瘤的诊断及鉴别诊断。 

　　关键词 流式细胞仪 胃粘膜 病变 DNA     
　　    
　　Flow cytometer analyzed the content of DNA in the different  gastric mucosa lesion
     
　　Qu Zhiwei，Zhu Hongbing，Huang Jianwen，et al.
   
　　Department of Gastroenterology，the Affiliated Hospital Medical College of BeiHua University，Jilin132011.
     
　　【Abstract】 Objective To investigate the diagnostic significance of the analysis of DNA in gastroscopic biopsy tissues from patients with gastric cancer or premalignant lesions.Methods The analysis of DNA of gastric mucosal leˉsions in gastroscopic biopsy tissues was analyzed by flow cytometer.Results DNA heteroploid positive rate GC is sigˉnificantly higher than that of CSA、CAG、GU group（u=2.90，4.08，P<0.01）;the DNA heteroploid positive rate CAG is not significantly than that of GUgroup（u=0.82，P>0.05）;the DNA heteroploid positive rate of CSG is not significantly than that of CAG group（u=0.92，P>0.05），but the CAG group have the tend of increased.Conclusion The DNA analysis of gastric mucosal biopsy samples may be helpful in predicting malignant change of gastric muˉcosa and early diagnosis of gastric cancers.
     
　　Key words flow cytometer gastric mucosa lesion DNA  

　　正常体细胞为2倍体，仅在细胞增殖分裂过程中有所改变，因此正常组织细胞DNA测定表现为:DNA含量相对稳定，DI=1±0.1范围，DNA含量分布集中在2倍体区域，单一的G0/G1峰。恶性肿瘤细胞DNA含量的分布及倍体类型发生变化，癌前病变在癌变过程中常伴有异常倍体的出现。本文应用流式细胞仪分析不同病变胃粘膜中的DNA含量，目的在于为癌前病变及恶性肿瘤提供诊断依据。
   
　　1 材料与方法
   
　　1.1 材料 全部患者来自北华大学附属医院消化内科门诊及病房，经内镜及病理诊断128例，年龄在18～88岁之间不等，平均年龄55.3岁，其中男62例，女66例，其中慢性浅表性胃炎（Chronic Superficial Gastritis CSG）18例，慢性萎缩性胃炎（Chronic Atrophic Gastritis CAG）44例，胃溃疡（Gastric ulˉcer GU）32例，胃癌（Gastric carcinoma GC）34例。内镜活检标本取自胃窦或病变区。流式细胞仪Epics XL型为美国Coulter公司生产。碘化丙啶（PI）购自华美公司，其它试剂均为国产分析纯。
   
　　1.2 方法 标本经常规剪碎，制备单细胞悬液1×10 6 /ml，70%冷酒精5ml中，4℃下固定18h以上;离心去上清，调整细胞浓度为1Ⅹ10 6 /ml;加入PI染液（PBS中含有PI5～20μg/ml，RNA酶50μg/ml），37℃孵育30min即上机测定。DNA倍体的判断标准;DI=1±0.1范围为2倍体，超过此范围即为异倍体。统计学处理为卡方检验。
   
　　2 结果

　　内镜活检胃粘膜标本的组织学诊断和DNA定量分析，见表1。

　　表1 内镜活检胃粘膜标本的组织学诊断和DNA定量分析（略）
     
　　注:与胃癌组比较 **  P<0.01，与胃癌组比较 △ P>0.05，与慢性浅表性胃炎比较 ▲ P>0.05
     
　　由表1所见胃癌组的DNA异倍体阳性率明显高于CSA、CAG组，差异具有非常显著性（P<0.01）;胃癌组的DNA异倍体阳性率与GU组比较差异无显著性（P>0.05）;慢性浅表性胃炎的DNA异倍体阳性率与慢性萎缩性胃炎比较差异无显著性（P>0.05），但慢性萎缩性胃炎有增高趋势。

　　3 讨论

　　人体正常的体细胞均有较恒定的DNA二倍体含量，细胞癌变过程中伴随细胞DNA含量的改变，DNA异倍体是恶性肿瘤的特异性标志，它的出现表示一个从量变到质变的过程，说明已发生了癌变或已具有了癌变的可能性，尽管这时在病理形态学上还不满足诊断的需要 ［1］  。   

　　据我们的研究结果表明，34例胃癌患者的DNA异倍体阳性率为52%，明显高于CSA、CAG组，差异具有非常显著性（P<0.01）;而国内学者何兴祥报道了18例胃癌患者的DNA异倍体阳性率为33.3% ［2］  ，我们的阳性检出率较高;还有国内学者郭玉庆报道了50例胃癌患者的DNA异倍体阳性率为82% ［3］  ，我们的阳性率检出率较低，其原因应进一步观察;此外，我们的研究结果表明胃癌组的DNA异倍体阳性率与GU组比较差异无显著性（P>0.05）;慢性浅表 性胃炎的DNA异倍体阳性率与慢性萎缩性胃炎比较差异无显著性（P>0.05），但慢性萎缩性胃炎有增高趋势。从而进一步证实了胃癌的发生是一个多步骤、多阶段的一个过程，即慢性浅表性胃炎（CSG），慢性萎缩性胃炎（CAG）或胃溃疡（GU），胃癌（GC）等几个不同阶段的病变 ［4］  。

　　参考文献
    
　　1 丛玉隆.当代检验分析技术与临床，北京:中国科学出版社，2002，76.
   
　　2 何兴祥.不同病变胃粘膜的端粒体长度与细胞DNA含量.世界华人消化杂志，2000，8（5）:509-512.
   
　　3 郭玉庆.流式细胞术分析胃癌及癌前病变中细胞凋亡与增殖.世界华人消化杂志，2000，8（9）:983-987.
   
　　4 庄亚华.胃癌细胞DNA含量的流式细胞计和显微分光光度计测定与比较.中华医学杂志，1989，69（7）:365-368.
    

　　作者单位:132011吉林北华大学附属医院消化内科