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替硝唑葡萄糖注射液（Tinidazole and Glucose Injection，TGI）是由葡萄糖和抗菌药物替硝唑组成的大容量注射剂，主要用于治疗由厌氧菌引起的口腔、呼吸道、骨髓、腹膜、胃肠道、女性生殖系统及手术伤口感染，也适用于预防术后厌氧菌感染，临床上被广泛使用;国家药品质量标准采用家兔法控制热原 ［1］ ，笔者对采用鲎试剂检测TGI的细菌内毒素进行了实验研究，实验结果较为满意，初步建立了TGI的细菌内毒素检查方法。
1 实验材料
1.1 TGI 批号021021、021027、040203，规格:100ml:0.4g（替硝唑），为市售品，经热原测定均符合规定。
1.2 细菌内毒素工作标准品（CSE） 批号2003-6，效价160EU/支，购自中国药品生物制品检定所。
1.3 鲎试剂（TAL） 批号0301131、0311102，灵敏度（λ）分别为0.5、0.25EU/ml，灵敏度经复核均符合规定;细菌内毒素检查用水（BET水）:批号040112，规格5ml/支，内毒素含量≤0.003EU/ml。均购自湛江安度斯生物有限公司。
2 实验方法与结果
2.1 TGI细菌内毒素限值（L）的计算 TGI临床用法用量为1.6g，即300ml，静脉滴注，即成人每小时的最大用量为300ml，人均体重按60kg计，即剂量（M）为5ml/kg，人体静脉注射的致热阈值（K）:5.0EU/kg ［2］ ，则TGI的L的计算值为:K/M=1.0EU/ml，考虑到安全因素及参照其它大容量注射液的细菌内毒素限度，将TGI的细菌内毒素限值（L）定为0.5EU/ml较为合适，
2.2 TGI最大稀释倍数的确定 由于TGI的L为0.5EU/ml，对应于市售常用TAL的灵敏度（λ）0.5、0.25、0.125、0.06、0.03EU/ml，按照公式D=L/λ计算，供试品可选择的稀释倍数则分别为1、2、4、8、16倍。
2.3 干扰试验预试验 取1批经热原测定合格的TGI，用BET水将其作1、2、4、8、16倍稀释，并以此溶液来溶解和稀释内毒素，使每个稀释度中内毒素的含量均为2λ，与灵敏度为0.5EU/ml的TAL进行反应（结果见表1）。初步表明供试品对TAL的凝胶化反应可能存在一定的干扰作用（1倍稀释液可能有抑制作用），但当将供试品液作2倍或2倍以上稀释后，这种干扰即可消除。所以正式干扰试验时，可用TGI的2倍稀释液作为供试液，并用灵敏度为0.25EU/ml的TAL进行试验。
表1 TGI的预试验结果 （略）
2.4 干扰试验 取3个批号的TGI，用BET水将其作2倍稀释，分别用此溶液和BET水为溶剂，将细菌内毒素工作标准品溶解并稀释成每1ml中含0.500、0.250、0.125、0.06EU的稀释液，与鲎试剂（λ=0.25EU/ml）进行反应（结果见表2）。表2结果显示，TAL在BET水和3个批号供试品中的灵敏度值（λc）均在0.5～2λ之间（即0.125～0.5EU/ml）范围内，表明TGI对鲎试剂与细菌内毒素的反应未见干扰作用，符合《中国药典》 ［3］ 对细菌内毒素检查有效性的规定。说明将供试品作2倍或2倍以上稀释，选用λ为0.25EU/ml或更高灵敏度的的TAL，进行细菌内毒素检测是可行的。
表2 TGI的干扰试验结果 （略）
2.5 TGI的细菌内毒素检查 根据确定的TGI的L值为0.5EU/ml及干扰试验结果，故TGI样品的细菌内毒素检查方法为:将供试品用BET水作2倍稀释，选用λ为0.25EU/ml的鲎试剂，依法 ［3］ 进行试验（结果见表3）。从表3的结果看，供试品和阴性对照管均呈阴性，供试品阳性管和阳性对照管均呈阳性，实验结果成立，3个批号供试品的细菌内毒素检查均符合规定。
表3 TGI的细菌内毒素检查结果略
3 结论
实验结果显示，TGI对鲎试剂与细菌内毒素的凝胶化反应存在轻微的干扰作用（抑制作用），但这种干扰作用在供试品作2倍或2倍以上稀释时即可有效消除。实验证明利用鲎试剂的细菌内毒素检查法替代家兔热原法，经进一步研究后对TGI的生产过程及成品进行质量控制是可行的。因该法操作简便、省时、实验成本低，故值得研究推广应用。
参考文献
1 国家药品标准.新药转正标准，第36册，1997，149.
2 国家药典委员会.中华人民共和国药典，北京:化学工业出版社，二部，2000，附录204.
3 国家药典委员会.中华人民共和国药典，北京:化学工业出版社，二部，2000，附录86.
作者单位:215002江苏省苏州市药品检验所
（收稿日期:2004-10-22） （编辑青山）