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【摘要】 目的 建立血液网织红细胞计数质量控制品。方法 正常人静脉血，煌焦油蓝ACD染液染色，福尔马林固定的质控品，在干燥器内的保存。结果 30张质控品均值和标准差为12.8±1.37‰，CV=10.7‰;半年内网织红细胞检出率（P>0.05）差异无显著性。结论 控制品稳定可靠，符合质控物要求。
关键词 网织红细胞 质量控制 质控品
目前网织红细胞计数常采用手工操作，影响因素较多，极需对网织红细胞计数进行质量控制。由于网织红细胞计数质控物市场难以购买，我们建立了用抗凝HBsAg阴性正常人静脉血，煌焦油蓝ACD染液染色，福尔马林固定的质控物，在干燥器内的保存方法。并对其稳定性，均一性等问题进行了实验和探讨，现报道如下。
1 材料与方法
1.1 肝素抗凝血 取HBsAg阴性的正常人静脉血按常规肝素抗凝，抗凝后半小时内进行染色。
1.2 1%煌焦油蓝染液 取ACD保养液100ml，用1NNaOH溶液调pH至7.5，再加入研细的煌焦油蓝1.0g，溶解后滤纸过滤。
1.3 肝素抗凝血与1%煌焦油蓝ACD溶液等量混合于一瓶内，加塞放37℃水浴箱染色60min，约10min摇动一次。取出后加等量0.5%福尔马林盐水，置室温固定2～4h，低速离心，去除少量上清液，混匀后按常规推片，推片干燥后用干净滤纸包好，放在干燥器内保存。
2 结果
2.1 稳定性 对于干燥法保存的网织红细胞推片质控物，每隔30天计数一次，共6次。每次以10×目镜、10×油镜，共计数1000红细胞中的网织红细胞数。以千分率为单位，每张推片在体部计数两次，取平均值。如2次计数结果的差超过2SD时，必须重新进行计数。结果见表1。
表1 网织红细胞质控物保存时间与检出率的比较略
2.2 均一性
2.2.1 推片的头、体、尾之间网织红细胞计数结果比较 取涂片一张分别在头体尾各计数10次，其ˉx±SD分别为13.0±1.508‰，12.5±0.913‰、13.7±1.52‰，CV分别为11.6%、7.3%、11.1%经χ 2 检验P>0.05，头、体、尾数据之间差异无显著性，但涂片体部CV和SD明显少于头尾部，这与有关报道结果相似。
2.2.2 各涂片间结果比较（片间差异） 取涂片30张，按上法计数，每张涂片计数2次，取平均值，然后统计均值和标准差为12.8±1.37‰，CV=10.7%，计数值在ˉx±SD内占74.2%，在ˉx±2SD内占92.1%。
2.2.3 每次计数之间的结果比较（次间差异） 在同一张推片的体部，按上述方法计数网织红细胞15次，ˉx±SD为12.6±1.2‰，CV=9.5%，计数值在ˉx±SD内占86.7%，在ˉx±2SD内占93.5%。
2.2.4 人间差异 甲乙丙三人在统一计数方法，其他条件基本相同的情况下，同一张推片上，分别计数10次，结果如表2。
表2 甲乙丙三人计数结果略
3 讨论
网织红细胞计数方法有自动血细胞计数仪计数 ［1］ 和手工计数两种。价值上百万的流式细胞仪和网织红细胞计数仪一般医院都不能采用。目前大多数医院实验室采用手工计数方法。手工计数方法有玻片法和试管法 ［2，3］ ，其原理和方法基本相同，都是采用血液与10g/L煌焦油蓝1∶1染色后推片计数。我们选用ACD保养液作为染料溶剂，网织红细胞中网织物染成深蓝色网状或粗颗粒状，推片背景清晰，比用PBS、枸橼酸钠生理盐水溶液和酒精等溶剂较好。质控物保存于室温干燥器内，保存半年后推片镜检后，网织红细胞仍然着色较好易于观察计数，表1证明结果的稳定性。其次把推片保存在干燥器内不会吸湿返潮，避免与空气中的CO 2 接触，血膜由弱碱性变成弱酸性，使网织红细胞褪色，所以能稳定半年之久。
本法制备的网织红细胞质控物，经片间差异、次间差异和人间差异等实验，其变异系数均在1.7%以下 ［4］ ，符合质控物要求。
参考文献
1 黄玉风.影响网织红细胞计数的一些因素.江西医学检验，2001，6:52.
2 王庸晋.现代临床检验学，北京:人民军医出版社，2000，22-23.
3 袁汉克.临床检验诊断学，广州:广东科技出版社，2002，49.
4 黄玉风.影响网织红细胞计数的一些因素.江西医学检验，2001，6:52.
作者单位:226001江苏省南通市城东医院
（收稿日期:2004-09-20） （编辑黄 杰）