小鼠红细胞天然免疫粘附功能检测方法的建立

    　红细胞作为数量庞大的细胞群，其介导的免疫清除反应以及免疫调节功能［1］，是机体整体功能的具体体现。红细胞天然免疫粘附功能（ＲＮＩＡＦ）的测定，可作为了解机体免疫功能状态的重要参考指标。本文就小鼠红细胞天然免疫粘附功能检测方法的建立，报道如下。

　　1  材料与方法

　　1.1  实验动物 

　　昆明种小鼠20只（天津市劳动卫生研究所动物中心提供），雄性，体重20～24g，常规饲养。

　　1.2  实验材料 

　　Ｓ180细胞株（购自中国医学科学院肿瘤所），瑞吉氏染液。

　　1.3  实验方法 

　　参见王海滨法［2］加以改良，小鼠断颈采血，经枸橼酸钠抗凝，取抗凝全血1ｍｌ，4000ｒ/ｍｉｎ离心5ｍｉｎ，取红细胞压积5μｌ,加入到含有300μｌ小鼠自身血浆的试管中，配制成1.25%红细胞悬液。取50μl1.25%红细胞悬液，与100μｌ新鲜配制的艾氏腹水瘤细胞悬液（1×106/ｍｌ）混匀。37℃，水浴30ｍｉｎ。加100μｌ固定缓冲液，轻轻摇匀后过夜阅片。阅片时取混匀液150μｌ加50μｌ瑞吉氏染液混匀，悬浮涂片（玻片的2/3），分上、中、下、左、中、右9区阅片，每区阅读10～12个肿瘤细胞，结合5个及以上红细胞的肿瘤细胞为一个结合单位，计算粘附率。

　　2  结果与讨论

    检测结果表明，小鼠红细胞天然免疫粘附功能（ＲＮＩＡＦ）的粘附率为52±17（%）。红细胞膜表面表达有数量众多的免疫分子，如ＣＤ35（ＣＲ1）、ＣＤ44、ＣＤ58、ＣＤ59及趋化因子受体等，这些物质在机体整体生理功能的维持上，具有非常重要的作用。正常情况下，红细胞表面ＣＲ1分子（ＣＤ35）能与带有补体的Ｃ3ｂ受体结合，并协助促进吞噬系统对ＣＩＣ的清除，由ＲＢＣ把这些结合物带到肝脾等网状内皮系统进行处理。而红细胞表面ＣＲ1活性的发挥，会直接影响红细胞粘附和清除免疫复合物的能力。因此，检测红细胞天然免疫粘附功能（ＲＮＩＡＦ）具有一定的实际意义。小鼠红细胞天然免疫粘附功能检测方法，操作简单、结果稳定、重复性好、灵敏性高、且成本较低，可作为了解机体天然免疫功能状态以及临床判断疾病病情严重程度的重要参考指标之一。   

　【参考文献】

　　1  王海滨，郭峰，毛远丽，等. 血细胞天然免疫粘附肿瘤细胞的现象及意义. 中华微生物学与免疫学杂志，2001，21（5）: 263-266.

　　2  王海滨，张继万，郭静霞，等. 红细胞天然免疫粘附功能在肝病不同病期的变化及意义. 中华医学杂志，2003，83（6）: 455-458.

　　作者单位： 1 300162 天津，武警医学院免疫教研室

　　　　　　　　2 300162 天津，武警医学院中心实验室

　　（编辑：齐永）