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【摘要】 目的 建立注射用肌苷细菌内毒素检查法。方法 用两个生产厂的鲎试剂对注射用肌苷进行干扰试验研究。结果 将注射用肌苷稀释至2.0mg/ml以下时无干扰作用，结果准确可靠。结论 注射用肌苷可以用细菌内毒素检查法取代热原检查法。
【关键词】 注射用肌苷；细菌内毒素；鲎试剂
注射用肌苷(inosine ror injection)是市场上新推出的肌苷新剂型，原来的剂型有肌苷片、肌苷注射液、肌苷胶囊等。注射用肌苷现行标准［1］中热原检查采用家兔法，操作繁琐，本研究通过试验探讨以细菌内毒素检查法检测注射用肌苷的可行性。
1 试验材料
1.1 注射用肌苷 为白色块状物，由海南双成药业有限公司生产，规格：0.2g，批号：20051201，20051221，20060109。
1.2 鲎试剂 鲎试剂1 (TAL1)： 湛江安度斯生物有限公司生产，批号0504220 ；鲎试剂2 (TAL2)：湛江博康海洋生物有限公司生产，批号051020 。灵敏度λb ：均为0.5Eu/ml 。试验前两批鲎试剂灵敏度复核均符合规定。
1.3 细菌内毒素工作品 (WSE) 中国药品生物制品检定所制备，批号2003-3，效价150 Eu/Amp 。
1.4 细菌内毒素检查用水 (BET水) 湛江安度斯生物有限公司生产，批号050960 ，5ml/Amp ，内毒素含量＜0.03 Eu/ml。
2 方法与结果［2］
2.1 初筛试验
2.1.1 注射用肌苷细菌内毒素限值(L) 的确定［3］ 每小时人体可以接受的最大内毒素剂量为 ( 5Eu/kg·hr )×60 = 300 Eu/hr ( 人平均体重按60kg 计算 ) ，而注射用肌苷人用每次最大剂量为1.2g ，溶于葡萄糖注射液或氯化钠注射液中，葡萄糖注射液或氯化钠注射液的内毒素限值为0.5 Eu/ml ，按每小时250ml输入人体计算，则葡萄糖注射液或氯化钠注射液带入的内毒素最大量为125 Eu/hr，故注射用肌苷允许带入的内毒素最大量为 300-125=175Eu/hr 。因为注射用肌苷每小时注入人体量为600mg，所以注射用肌苷内毒素限值为 175/600=0.29Eu/mg , 为方便稀释，将其限值 (L) 定为0.25Eu/mg 。
2.1.2 样品最大有效稀释浓度 (CMVD) 以鲎试剂灵敏度0.5Eu/ml为基准， 以CMVD=λ/L=0.5/0.25=2.0mg/ml为样品的基准稀释浓度，用细菌内毒素检查用水以基准稀释浓度为起点往下倍比稀释，得样品的浓度系列溶液，即2.0、1.0、0.5、0.25、0.125mg/ml，记此系列溶液为NPC系列。PPC系列：将样品稀释成与上述NPC系列相同浓度系列，但在稀释过程中每一浓度样品均含有2λb内毒素，采用灵敏度λb =0.5Eu/ml的鲎试剂(TAL1)分别与NPC和PPC两个系列样品反应(37℃，60min)，结果见表1 。结果表明：样品浓度为2.0 mg/ml以下时，不干扰试验进行。表1 初筛试验结果
2.2 干扰试验［2］ 选取灵敏度λb =0.5 Eu/ml 的鲎试剂，将样品用细菌内毒素检查用水稀释至浓度为2.0mg/ml 做干扰试验。干扰试验按中国药典2005年版细菌内毒素检查法的干扰试验进行，试验结果见表2。结果表明：0.5λb <λc <2λb ，故样品浓度为2.0mg/ml时，不干扰试验。表2 注射用肌苷干扰试验结果
2.3 供试品的细菌内毒素检测 取3个批号样品，分别按中国药典2005年版二部附录ⅪE检查法项下进行检测，并与家兔法比较，结果见表3。表3 供试品的细菌内毒素检测结果
3 讨论
本品现行质量标准中，采用家兔法控制热原，由于操作复杂，影响因素多，对试验结果影响大，费时，而采用鲎试剂法，操作简单、迅速且灵敏度高。
将本品稀释成2.0mg/ml的供试液，同两个厂家的鲎试剂和细菌内毒素反应均无干扰作用，故本品可用细菌内毒素方法控制热原。
本方法在确定细菌内毒素限值时考虑到了本品与葡萄糖注射液或氯化钠注射液联合用药时细菌内毒素的加和性，故确定的细菌内毒素限值安全、可靠。
【参考文献】
1 国家食品药品监督管理局.标准(试行) YBH12992004.
2 国家药典委员会.中国药典.2005年版二部，附录85页.
3 黄清泉，夏振民.药品细菌内毒素检查的实验设计.中国药学杂志，1997，32(2)：72.
作者单位： 1 442000 湖北十堰，十堰市药品检验所
2 442000 湖北十堰，太和医院药剂科
(编辑：汪 洋)