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【摘要】 目的 用高效液相色谱法测定注射用肌苷的含量。方法 采用Kromasil C18柱（5μm 4.6mm×250mm)，以甲醇-水（10：90）作流动相，在248nm紫外波长检测。结果 肌苷在4.23～63.48μg/ml范围内有良好的线性关系（r=0.9999)。低、中、高3个浓度的平均回收率（n=2）分别为101.4%、101.8%、101.1%，RSD为0.46%。结论 该法简便、快速、准确，可作为测定注射用肌苷中肌苷的含量。
【关键词】 注射用肌苷；高效液相色谱法；含量测定
【Abstract】 Objective A high-performance liquid chromatography (HPLC) was established for the determination of inosine contents in injection. Methods Impurity in the inosine injection could be separated on Kromasil C18 colnmn (5μm 4.6mm×250mm) using methanol-water (10:90) as mobile phase and UV detector at 248nm. Results The linear range was 4.23～63.48μg/ml(r=0.9999).Average recovery in the lower,moderate and higher inosine concentration groups was respectively 101.4%,101.8% and 101.1%(n=2) with RSD of 0.46%. Conclusion The method is simple,rapid and accurate.
【Key words】 inosine injection;HPLC;concentration determination
肌苷为微生物发酵制得的辅酶类药物，有改善机体代谢作用，临床用于各种类型的肝脏疾患、心脏疾患、白细胞和血小板减少症、中心视网膜炎及视神 经萎缩等。有关标准规定 ［1］，注射用肌苷含量测定采用紫外分光光度法，该方法操作复杂、费时且专属性差。为了有效地分离降解产物，准确测定注射用肌苷含量，本文采用高效液相色谱法（HPLC）测定注射用肌苷中肌苷含量，获得满意结果。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪：DIONEX P680 HPLC PUMP泵；DIONEX UVD170U紫外检测仪；Chromeleon Server Monitor工作站。
肌苷对照品（含量99.2%，中国药品生物制品检定所），注射用肌苷分别为山西（规格：0.3g批号20060101；2006126）；海南（规格：0.2g批号20051201）。甲醇为色谱纯，试验用水为重蒸馏水。
2 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18(5μm 4.6mm×250mm);流动相：甲醇-水（10：90）；检测波长为248nm；流速1.0ml/min；柱温为25℃；进样量20μl。
3 线性关系的考察
3.1 对照品储备液的制备 精密称取对照品10.58mg，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。
3.2 标准曲线的绘制 精密吸取对照品储备液1.0、2.0、3.0、5.0、10.0、15.0ml，分别置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，分别进样20μl，依法测定。以各溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制工作标准曲线，肌苷的线性回归方程为Y=0.726X+0.068（r=0.9999,n=6),在4.23～63.48μg/ml浓度范围内呈现良好的线性关系。
4 精密度试验
取含量测定项下肌苷对照品溶液20μl注入液相色谱仪，重复进样5次，测定峰面积，结果肌苷峰面积的RSD为0.14%（n=5)，表明本法精密度良好。
5 重复性试验
按供试品溶液制备方法处理同一批号样品5份，测得肌苷的平均含量为105.5%，RSD为1.3%（n=5)，表明本法重复性良好。
6 回收率试验
精密称取已知含量的样品适量（约相当于肌苷50mg），分别精密加入肌苷对照品约40mg、50mg、60mg,置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取2ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。按样品含量测定相下方法测定并计算回收率，结果见表1。
7 稳定性试验
取含量测定项下肌苷对照品溶液20μl分别于0、2、4、6、8、12、24h测定，测得肌苷HPLC峰面积为0.9%，表明溶液在24h内稳定。 表1 回收率测定结果
8 样品测定
8.1 对照品溶液的制备 取“3.1”项下对照品储备液5ml置25ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。
8.2 供试品溶液的制备 取装量差异项下的内容物，混合均匀，精密称取适量（约相当于肌苷0.1g），置100ml量瓶中，加水约70ml，充分振摇使肌苷溶解，用水稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取2ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。
8.3 含量测定 精密量取“8.2”项下供试品溶液20μl注入液相色谱仪，记录色谱图，同法测定对照品溶液，按外标法以峰面积计算其含量。结果见表2。表2 样品测定结果
9 讨论
9.1 检测波长的选择 由于肌苷在酸性和高温条件下易分解为次黄嘌呤，且次黄嘌呤在249nm的波长处有最大吸收，肌苷的最大吸收波长为248nm［2］，故选择248nm作为检测波长。
9.2 流动相的选择 参考文献［3］，并经过实验，选择了甲醇-水（10：90）为流动相，能将杂质（降解产物）与肌苷分离，且分离效果较好，保留时间合适。
【参考文献】
1 国家食品药品监督管理局.标准（试行）YBH12992004.
2 李金屏.肌苷及制剂质量标准修订起草说明.2005年版药典增修订情况介绍.
3 国家药典委员会.中华人民共和国药典.北京：化学工业出版社，2005，二部：205.
作者单位： 1 442000 湖北十堰，十堰市药品检验所
2 442000 湖北十堰，东风总医院
（编辑：黄 杰)