溪黄草提取工艺优化研究

     【摘要】  考察提取时间、加水量、浸泡时间、静置时间对总黄酮含量的影响，对溪黄草的提取工艺进行了优化研究。优化研究结果显示为浸泡6h,提取2次,第一次加10倍量水,第二次加8倍量水,醇沉24h。

    【关键词】  溪黄草；提取工艺；优化；总黄酮

    溪黄草中含有重要的生理活性物质二萜类和黄酮类，能清热利湿、凉血散瘀，有抗炎、抗菌、抗病毒、抗肿瘤及护肝等作用，主要用于急性肝炎、胆囊炎、肠炎、痢疾、跌打瘀肿等［1］，是消炎利胆片、复方胆通片等中成药的主要原料。本文对溪黄草的提取工艺进行了研究并优化，考察提取时间、加水量、浸泡时间、静置时间对总黄酮含量的影响。

    1  仪器及材料

    电子天平（AE100常州梅特勒-托利多）、紫外分光光度计（UV-256日本岛津）、旋转蒸发器（ZFQ85A上海医械专机厂）、架盘药物天平（1000g上海医疗器械八厂）。溪黄草（购自桂林金博医药公司）。

    2  实验方法

    2.1  总黄酮的含量测定

    2.1.1  标准溶液的制备  精密秤取芦丁对照品0.02008g（按干燥品计算），置100ml容量瓶中，加60%乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密吸取25ml置50ml容量瓶中,用水稀释至刻度，摇匀，即得每1ml中含芦丁0.1004mg的溶液［2］。

    2.1.2  供试液的制备  取溪黄草提取物3g，加30%乙醇适量，研磨并移至250ml的量瓶中，加30%乙醇稀释至刻度，振摇，精密量取5ml，置100ml的量瓶中，加30%乙醇稀释至刻度，摇匀。

    2.1.3  测定法  精密量取标准溶液与供试品溶液各4ml，另取30%乙醇4ml（作为空白），分别置10ml的量瓶中，各精密加入亚硝酸钠溶液（1→20）0.3ml，摇匀，放置6min，加入硝酸铝溶液（1→10）0.3ml，摇匀，再放置6min，各加氢氧化钠试液4.0ml，分别用30%乙醇稀释至刻度，摇匀，放置10min。照紫外分光光度法（中国药典2000年版一部附录ⅤA），以空白溶液为参比，在510nm波长处测定吸收度。按两者的比值计算溪黄草提取物中总黄酮含量。

    2.1.4  标准曲线的制备  精密吸取芦丁对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、6.0ml,分别置于25ml容量瓶中,各加50%乙醇至6.0ml,加5%亚硝酸钠溶液1.0ml,摇匀,放置60min后,加10%硝酸铝溶液1.0ml,摇匀,放置60min后,加10%氢氧化钠溶液10ml,再加50%乙醇至刻度，摇匀放置15min后，以空白液为参比，在波长510nm处测吸光度。本品含总黄酮不得少于9mg/ml。

    2.2  因素考察  将影响煎煮提取效果的因素：提取时间、加水量、浸泡时间、静置时间进行单因素考察。

    2.2.1  提取时间对提取效果的影响  秤取溪黄草86.8g,加入10倍水提取，提取时间分别为1h、2h，考察提取时间对提取效果的影响。结果：提取时间为1h的总黄酮含量为350.5mg；提取时间为2h的总黄酮含量为425.8mg。可见提取时间对提取效果有显著影响。

    2.2.2  加水量对提取效果的影响  秤取溪黄草86.8g,提取时间采用1h、提取1次，考察加乙醇量分别为10倍、8倍时的提取效果。结果：加水为10倍量时总黄酮含量为350.5mg；加水为8倍量时总黄酮含量为327.8mg。结果表明：加水量对提取效果有影响。

    2.2.3  浸泡时间对提取效果的影响  秤取溪黄草86.8g,提取时间采用1h、提取1次，浸泡时间分别采用6h、3h，考察浸泡时间对提取效果的影响。结果：浸泡时间为6h、3h的总黄酮含量分别为363.2mg、352.1mg。结果表明：浸泡时间对提取效果有影响。

    2.2.4  静置时间对提取效果的影响  秤取溪黄草86.8g，浸泡6h，煎煮次数2次，煎煮时间为2h，加水量分别为10、8倍，合并煎液，滤过，滤液浓缩至原生药材的1倍，加入70%乙醇5倍量，搅拌，静置24h、12h，考察静置时间对提取效果的影响。结果：静置时间为24h、12h的总黄酮含量分别为501.5mg、491.3mg。结果表明：静置时间对提取效果有影响。

    2.2.5  提取工艺优化  根据单因素考察的结果，秤取溪黄草86.8g，8份，溪黄草组提取次数、加乙醇量按原制法，对提取时间、加水量、浸泡时间、静置时间进行五因素二水平的正交试验，选用L8（2 7）正交表进行试验，因素水平表见表1。 表1  因素水平表（略）依据工艺设计的条件试验，并以总黄酮含量为指标进行工艺优选，每份试验得提取物浓缩液约48ml,其结果见表2。表2  正交试验结果由表4可知：

    K’值比较：

    因素A：K2’＞K1 ’      最佳为A2

    因素B：K1’＞K2’最佳为B1

    因素C：K1’＞K2’最佳为C1

    因素D：K1’＞K2 ’最佳为D1

    因素E：K2’＞K1’最佳为E2

    R值比较：RA＞RB＞RC＞RE＞RD    （R为极差）

    即对总黄酮来说，从正交结果表直观看，本制法各因素所起的作用为 A＞B＞C＞E＞D，最佳方案为A2B1C1D1E2即浸泡6h,提取2次,第一次加10倍量水,第二次8倍量水,醇沉24h。

    3  讨论

    （1）考察加水量对提取效果影响时，笔者考察了加12倍水的影响，虽然其含量有所提高，但只有8～10倍提高量的25%左右，考虑节约能源，选择了10倍。

    （2）考察静置时间对提取效果的影响时发现加入乙醇的浓度和量有一定影响，但到一定浓度和量时这种影响趋于稳定，笔者参考消炎利胆片标准，通过试验选用70% 5倍量。

    【参考文献】

    1  江苏新医学院.中药大辞典（下册）.上海：上海科学出版社，1993，323.

    2  楼小红.溪黄草根茎叶不同部位总黄酮的含量测定.中国医药学报,2004,19(5):316-317.

    作者单位：1 541004 广西桂林,桂林集琦药业股份有限公司

    2 541001 广西桂林,桂林益佰漓江制药有限公司

　　 (编辑：余  强)