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【摘要】 目的 建立用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定九头草搽剂中血竭素含量测定方法。方法 采用Discovery C18柱，以乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠（pH=3.05～3.10）（40：:60）为流动相，检测波长448nm，柱温40℃。结果 血竭素在0.029～0.29μg范围与色谱峰面积呈线性关系；回归方程：A＝2305.1C+2.9698 r＝0.9997；平均加样回收率及RSD分别为 98.8%和2.9%。结论 该方法简便、正确、快速、测定结果重复性好，可用于该药品中血竭的定量分析。
【关键词】 高效液相法；九头草搽剂；血竭素；含量测定
【Abstract】 Objective To establish the method for determining the content of Dracohodin in Jiutoucao Chaji by RP-HPLC. Methods Using Discovery C18 column, acetonitrile-0.05mol/L sodium dihydrogen phosohate solution （pH=3.05～3.10）（40：:60） as the mobile phase,detection wavelength as 448nm and column temperture at 40℃.Results The calibration curve was linear at a range of 0.029～0.29μg for the Dracohodin and linear equation was A＝2305.1C+2.9698 r＝0.9997. The average recovery was 98.8% and the related standard deviation(RSD) was 2.9%.Conclusion This method was simple,accurate and quick,which can be adoptable for quantitative analysis of Sanguis draconis in Jiutoucao Chaji ,and the reduplicate of the result was good.
【Key words】 HPLC;jiutoucao chaji; dracohodin; content
本品以九头狮子草为主的中药复方制剂,具有祛瘀抗炎，消肿止痛的功效。因九头狮子草没有明确的有效化学成分,处方中有血竭,系名贵中药,又有明确的成分—血竭素，故而测定血竭中的血竭素作为本品的含量指标。含量测定方法学的研究如下。
1 仪器与试药
UV21000紫外分光光度仪；HP1100系列高效液相色谱仪，包括G1311A四元泵，G1322A脱气机，G1313A自动进样器，G1314A紫外可见检测器，G1316A柱温葙，配备A.06.03HP化学工作站。
乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，甲醇、磷酸二氢钠均为分析纯，血竭素高氯盐（Dracohodin perochlorate批号0811-200102中国药品生物制品检定所提供，供含量测定用。）九龙草搽剂021104,021105,021106, 050618,050619, 050620等六批由浙江某制药厂提供。
2 方法与结果
2.1 色谱条件与系统适用性试验
2.1.1 色谱柱 Discovery C18柱（250×4.6mm×5μm）,加预柱。
2.1.2 流动相 乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钠（40:60）。0.05mol/L磷酸二氢钠应用磷酸调节pH 值为3.05～3.10。
2.1.3 检测波长 448nm是根据血竭素高氯酸盐甲醇溶液在紫外分光光度仪上所测得的吸收波长为448nm，故本品以448nm作为检测波长。
2.1.4 柱温 40℃。
2.1.5 流速 1.0ml/min。
在此色谱条件下，供试品中血竭素与其他组分能达到完全分离，血竭素的理论板数高达3000以上。
2.2 对照品溶液的配制 精密称取减压（五氧化二磷）干燥24h后的血竭素高氯酸盐对照品适量，精密称定,加甲醇制成(每1ml含血竭素15μg)(血竭素重量=血竭素高氯酸盐重量/1.377)的溶液为对照品溶液，进样10μl测定。
2.3 供试品溶液的制备 血竭素在甲醇中溶解度最大，本品又是含有 50%～60%乙醇的液体制剂，用批号为021106的样品采用几种方法来比较其含量。详见表1。表1证明：直接用甲醇稀释溶解,血竭素的含量很低,且峰形不整,基线抬高，造成积分的误差很大；用氯仿提取后，基线平整，积分误差减小，含量提高近一倍多，为此本品采用氯仿提取后测定。血竭素在甲醇和乙醇中溶解度较大，而在氯仿中溶解度较小，考虑到氯仿与甲醇互溶，而利用甲醇的溶解性，在氯仿中适当混合甲醇来提取血竭素。 表1 提取方法比较 供试品溶液的制备：精密量取本品3ml,加50%的乙醇5ml,用氯仿15ml,提取一次，水层再用氯仿-甲醇（8：2）的混合液提取5次，每次10ml，提取液与上次氯仿液混合蒸干，残渣加甲醇溶解于50ml量瓶中用0.45μm滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。
2.4 按本品工艺制备的缺血竭的九龙草搽剂 缺血竭阴性样品按法提取，结果在血竭素相应位置不显相同的峰，证明缺血竭阴性样品无干扰。
2.5 标准曲线的制备 精密量取对照品溶液(0.014684mg/ml)，2、4、6、8、10、15、20μl注入液相色谱仪，以色谱峰面积为纵坐标，以进样量（μg）为横坐标，得线性方程为A＝2305.1C+2.9698 r＝0.9997
本品在0.029～0.29μg之间呈现良好的线性关系。
2.6 精密度试验 取本品按法提取的供试品溶液一份(批号为021106),重复进样6次,每次10μl，结果见表2。表2 九龙草搽剂的精密度试验（略）
2.7 稳定性试验 取供试品溶液1份（批号021106），每隔一定时间测定一次，结果RSD为0.8%,表明在12h内基本稳定,详见表3。
2.8 重复性试验 取精密吸取本品（批号021106）3ml,6份，按法提取,分别测定每份中血竭素的含量，结果平均含量为0.269mg/ml,RSD为2.8%见表4。
2.9 回收率试验 批号为021106的样品，采用加样回收法，精密吸取本品2ml，精密加入对照品溶液(含血竭素0.19666mg/ml)3.0ml，按正文拟定方法测试供试液中血竭素的量计算回收率，结果见表5。
2.10 样品测定结果 按法测定九龙草搽剂中血竭素含量，结果如表6。表3 九龙草搽剂的稳定性试验（略） 表4 九龙草搽剂的重复性试验 表5 九龙草搽剂的回收率试验结果 表6 九龙草搽剂六批样品的血竭素含量 根据六批样品测定的结果，定为每1ml含血竭素（C17H14O3）不得少于0.18mg。
3 讨论
本品是含有50%～60%的乙醇液体制剂，采用直接用甲醇稀释测定，其他成分干扰较大，峰的基部膨大，无法正确积分，经氯仿提取后才解决这一干扰，分离度良好，基线平整。
作者单位： 1 325604 浙江乐清，乐清市太和春药店
2 310004 浙江杭州,浙江省药检所
(编辑：若 木)