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【摘要】 目的 探讨血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor ,VEGF） 在乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义,及其与ER、PR、C-erbB-2及淋巴结转移之间的相关性。方法 应用免疫组织化学S-P 法检测48例乳腺浸润性导管癌组织中VEGF及其他生物学指标的表达情况,并与临床病理因素进行统计分析。结果 48例乳腺浸润性导管癌组织中VEGF 表达总阳性率为81.25%（39/ 48） ,VEGF 的表达与患者的年龄及ER、PR 的表达无关（ P>0. 05） ,而与乳腺浸润性导管癌的淋巴结转移及C-erbB-2密切相关。结论 VEGF 可能与乳腺浸润性导管癌的进展、转移及预后有关，作为独立的指标对判定预后和制订治疗方案具有参考意义,联合检测ER、PR、C-erbB-2有利于乳腺浸润性导管癌预后判断,乳腺癌恶性程度、浸润转移等生物学行为的参考指标。
【关键词】 乳腺肿瘤; 血管内皮生长因子; 免疫组织化学
Expression of VEGF in invasive ductal breast carcinoma and its clinicopathological significances
XIE Yu-yan,WANG Xiao-hong,YI Xian-ping.Department of Pathology, The Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat-sen University,Guangdong 519000,China
【Abstract】 Objective To observe the expression of vascular endothelial growth factor （VEGF） in the invasive ductal breast carcinoma and analyze its correlation with ER, PR,C- erbB-2 and lymph node metastasis. Methods Immunohistochemistry S-P method was used to detect the expression of VEGF and other biological indicators in 48 cases , and statistical analysis with clinical and pathological factors was done.Results The positive rate of VEGF expression in 48 cases of invasive ductal breast carcinoma was 81.25% （39 / 48）.The expression of VEGF has no correlation wih the age , ER and PR expression （P>0.05）, but has a close relation with lymph node metastasis and C-erbB-2 .Conclusion VEGF may be related to the progress, metastasis and prognosis of the breast carcinoma, it is an independent indicator for prognosis assessment and making treatment plan. The joint detection of VEGF, ER, PR and C-erbB-2 is useful to evaluate the prognosis, malignant degree, invasion and metastasis.
【Key words】 breast carcinoma ; vascular endothelial growth factor（VEGF）; Immunohistochemistry
乳腺癌与所有实体肿瘤一样，肿瘤细胞旺盛的代谢、增殖需要充足的血液供应，肿瘤新生血管形成与肿瘤的发生、发展及预后密切相关。促血管形成因子的表达能促进肿瘤新生血管形成，为肿瘤的生长、浸润及转移创造条件。目前认为，血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）与肿瘤新生血管形成密切相关［1］。关于VEGF 的表达与乳腺癌临床病理因素及预后之间的关系虽有报道,但不同学者报道不尽相同,争论颇多。本研究采用常规病理形态和免疫组织化学方法,探讨了VEGF的表达及其与乳腺癌临床病理特征、ER、PR、C-erbB-2的关系,并评估其对预后的价值。
1 材料与方法
1．1 标本来源 收集2006年6月～2008年1月中山大学附属第五医院病理科收到的乳腺癌手术切除标本共48例，术后病理确诊为乳腺浸润性导管癌，均为女性；年龄20～74岁，中位年龄48岁。其中伴乳腺乳头Paget病1例，伴小叶浸润1例，其中43例伴有淋巴结转移。术前均未接受手术、放疗、化疗等抗癌治疗。全部病例常规行胸片，腹部盆腔B超、血常规、生化肝肾功能等检查，并排除第二肿瘤。
1.2 检测方法 采用免疫组织化学SP法，ER、PR、C-erbB-2、VEGF均需经过高压抗原修复，蛋白阻断液减少非特异性染色；加一抗孵育，4℃过夜；洗涤后加二抗及过氧化物酶标记的链霉菌抗生物素蛋白；按试剂盒说明步骤进行，联苯二胺（DAB）显色，苏木素复染。所有单抗及试剂盒均购自福州迈新公司。组织标本以=10％ 甲醛溶液固定24h，常规石蜡包埋，制备5m厚切片，按免疫组化操作规程进行。用已知阳性标本作为阳性对照，以PBS代替一抗作阴性对照。
1．3 结果判断 按3个高倍视照中，以阳性细胞比例的平均值定义为阳性细胞百分比，阳性结果呈棕黄色或棕褐色颗粒。
VEGF阳性细胞主要为胞浆着色，不着色者为阴性（-）；阳性细胞数<25％为弱阳性（+）；阳性细胞数25％ ～50％为阳性（++）；阳性细胞数>50％ 为强阳性（+++）（见图1）。 ER、PR阳性细胞为细胞核着色，C-erbB-2为细胞胞膜及胞浆着色。其余指标按阳性细胞数年所占比例判断：<10％为阴性（-），10％～25％为弱阳性（+），26％～75％为阳性（++），>75％为强阳性（+++）。
1．4 统计方法 所得数据采用SPSS 13．0软件包进行统计分析，采用χ2检验和Spearman相关分析。
2 结果
2．1 VEGF在乳腺浸润性导管癌组织中表达情况 见表1。表1 VEGF在乳腺浸润性导管癌中的表达（略）
2．2 VEGF表达与乳腺癌临床病理因素及其他生物学指标的关系 乳腺癌组织中的VEGF表达与淋巴结转移数目有相关性，即腋窝淋巴结转移数目越多，VEGF的阳性表达率越高（P<0．05）；而和年龄无关（ P>0.05）。
在乳腺癌组织中VEGF表达强度与C-erbB-2的表达强度（P<0．05）呈正相关，与雌激素受体（estrogenreeeptor，ER）表达强度孕激素受体（pro-gesterone receptor，PR）的表达强度，无相关性（P>0．05）。见表2。表2 乳腺浸润性导管癌组织VEGF表达与临床病理预后因素的关系（略）
3 讨论
VEGF是一种肝素亲和的外分泌二聚体糖蛋白,由2个具有N 端序列且分子量相同的亚单位通过二硫键连接形成,分子量34～42 kD。人类VEGF基因定位于第6 对染色体长臂,对其基因结构的研究显示,VEGF 基因由8 个外显子和7 个内含子组成。它是由多种亚型组成的多家族蛋白质。
VFGF是目前研究较为深入的促血管生成因子，对肿瘤基质血管形成及肿瘤生物学行为均有重要影响。VEGF也称血管渗透因子（VPr），一种特异性促使血管内皮细胞增殖的有丝分裂原，是特异性的血管内皮细胞刺激因子，特异性的作用于血管内皮细胞，促进内皮细胞的有丝分裂，促使新生血管的形成，增强血管通透性，从而使肿瘤生长。它与血管内皮细胞的相应受体结合，刺激血管内皮细胞的增殖，同时还可促进血管内物质的泄露，导致血管形成和新的基质形成，为肿瘤的浸润和转移提供了合适的基础。研究表明，VEGF在许多正常组织中呈低水平表达，但在多种实体的恶性肿瘤中肿瘤细胞可大量分泌VEGF，并在恶性肿瘤的生长、发展和转移过程中起着重要作用［2～4］。
本研究表明VEGF在乳腺浸润性导管癌组织中阳性表达率为81.25％ ，与Howard EM等［5］报道的VEGF在乳腺癌的阳性表达率相接近。本试验结果还表明，VEGF表达与淋巴结转移数目相关，腋窝淋巴结转移数目越多，VEGF的阳性表达率越高（P<0．05），这说明乳腺浸润性导管癌组织中的VEGF表达与肿瘤生长和浸润以及淋巴结转移之间存在着密切相关性，其机制可能是VEGF通过一系列复杂的机制诱导血管的形成，为肿瘤的生长提供充足的营养，从而促进肿瘤体积增大，并使肿瘤边缘部分的癌细胞与淋巴管接触增多，或通过静脉-淋巴管吻合处的血管进入淋巴管，还可以增加微血管通透性，并诱导新生淋巴管的形成，从而促使肿瘤转移［6］，但详细的机制目前尚不十分清楚，有待进一步研究。在乳腺癌治疗中，腋窝前哨淋巴结活检已在临床中较为广泛应用，VEGF表达是否有助于指导和决定乳腺癌腋淋巴结清扫也有待进一步研究。
患者的乳腺癌组织中C-erbB-2的表达是目前临床上判断乳腺癌预后较为肯定的指标。文献报道，C-erbB-2过度表达与乳腺癌肿瘤分化，组织学来源，淋巴结转移及预后有关，一般认为，C-erbB-2过度表达者乳腺癌肿瘤的恶性度大，肿瘤较大，多有淋巴结转移，激素受体水平低，总生存期短，易复发或转移，且对TAM等内分泌治疗及除蒽环类、紫杉类以外的化疗反应差［7］。而且VEGF表达强度与C-erbB-2的表达强度呈正相关（P<0．01），即C-erbB-2表达越强，VEGF表达也越强，这提示在乳腺浸润性导管癌的发生、发展中乳腺癌组织中的VEGF与C-erbB-2之间可能存在着某种关系，同时也意味着VEGF过度表达可能是一个不良预后因素。
本研究因随访时间有限，对于乳腺癌组织中的VEGF表达对于乳腺癌的预后判断以及指导治疗的价值有待进一步研究，但令人鼓舞的是McNamara DA等［8］在体外实验及小鼠的体内实验表明Tamoxifen可直接阻止VEGF对内皮细胞的作用。应用免疫组化技术检测乳腺癌组织中多项生物指标简单、易行，为乳腺癌患者的临床评估提供参考，并为临床个体化治疗提供理论依据。
本组等级相关分析中表2 还显示，ER 与PR 的表达呈正相关，ER、PR 与C-erbB-2 的表达及淋巴结转移呈负相关，结果与以往的文献报道一致。本组研究结果提示VEGF 的表达与乳腺浸润性导管癌的预后有关，联合检测ER、PR 、C-erbB-2及VEGF 有利于乳腺浸润性导管癌的预后判断。
【参考文献】
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作者单位：519000 广东珠海,中山大学附属第五医院病理科