RP-HPLC法测定仙黄颗粒中仙茅苷的含量

【摘要】  目的 建立仙黄颗粒中仙茅苷含量的测定方法。方法 RP-HPLC法，采用Alltima ODS-C18柱为分析柱，使用以0.1%磷酸-乙腈为流动相的二元梯度洗脱方法，检测波长为283nm，流速0.8ml/min。结果 线性范围为0.0642～6.42μg/ml，r=0.9999；平均加样回收率为98.88%（n=9）。结论 该测定方法简便、稳定、精密度高、重现性好，适用于仙黄颗粒中仙茅苷的质量控制。

【关键词】  RP-HPLC；仙黄颗粒；仙茅苷

【Abstract】  Objective  To develop a method for the determination of curculigoside in Xianhuang  granules. Methods  ARP-HPLC method was used with Alltima ODS-C18 column（250×4.6mm，5um） and the mobile phase of 0.1% phosphoric acid -acetonitrile（75:25）. The DAD detector was set at 283nm and the flow rate was 0.8ml/min.Results  The linear range was 0.0642～6.42μg/ml,r=0.9999.The average recovery was 98.88% with RSD 0.52% （n=9）.Conclusion  The method is simple,accurate and sensitive, and suitable for the quality control of curculigoside in Xianhuang granules.

    【Key words】  RP-HPLC; Xianhuang granules; Curculigoside

    新药仙黄颗粒源于临床经验方，由仙茅、熟地黄、枸杞子、延胡索、牡蛎等药材组成，经科学加工而成的颗粒，具有滋肝肾、补气血之功效。方中仙茅为君药，仙茅苷为其温肾阳、壮筋骨的主要有效成分〖1〗。本实验采用RP-HPLC法对仙黄颗粒中的仙茅苷进行含量测定，获得满意效果，为该制剂的质量控制提供了快速准确的方法。

    1  仪器与试药

    1.1  仪器  Agilent 1200高效液相色谱仪及其色谱工作站；Mettler AG245电子天平（精度十万分之一）；HP laserJet 1020打印机。

    1.2  试药  仙黄颗粒（公司自制，规格：9g/袋。批号：0706017、0706018、0706019）；仙茅苷对照品购自中国药品生物制品检定所（批号0771-9701，纯度100.0%）；乙腈为色谱纯，购自Sigma；其余试剂均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司；纯化水自制。

    2  方法与结果

    2.1  溶液制备

    2.1.1  对照品溶液  取仙茅苷对照品8.0mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得。

    2.1.2  供试品溶液  取装量差异项下的样品，研细，取2.0g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入热水15ml，水浴加热使溶解，放冷，离心（4500r/min）5min，沉淀加热水5ml使溶解，离心（同法）5min，沉淀再加热水5ml，同法操作，合并3次上清液，加在预先用30ml水淋洗过的中性氧化铝柱（100～200目，15g，内径2cm，干法装柱）上，用水洗脱，收集洗脱液100ml，浓缩约至5ml，转移至10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。

    2.1.3  阴性样品溶液  按样品工艺制备缺仙茅的阴性样品，照“2.1.2”项下操作，制备阴性样品溶液。

    2.2  色谱条件与系统适用性试验  色谱柱：Alltima ODS－C18柱（4.6mm×250mm，5um）；流动相：0.1%磷酸-乙腈溶液（75∶25）；检测波长：283nm，流速：0.8ml/min；柱温：30℃；进样量：10μl。在上述色谱条件下，按仙茅苷峰计算理论板数不低于5500。

    2.3  专属性试验  供试品溶液色谱图中具与仙茅苷对照品溶液保留时间一致的色谱峰，而阴性样品溶液无吸收峰出现，表明样品中其他成分对仙茅苷的测定无干扰（见图1）。经二极管阵列检测器进行紫外光谱扫描，供试品色谱图中仙茅苷色谱峰的紫外光谱与对照品一致，在283nm处有最大吸收。故确定检测波长为283nm（见图2）。图1  仙黄颗粒中仙茅苷的含量测定HPLC图图2  仙黄颗粒中仙茅苷含量测定DAD光谱图2.4  线性关系考察  精密称取仙茅苷对照品适量，加甲醇制成0.03210mg/ml和0.3210mg/ml的对照品溶液（1）、（2）。分别精密吸取对照品溶液（1）2、5、10、20μl，对照品溶液（2）5、10、20μl按上述色谱条件测定仙茅苷峰面积，记录色谱图。以进样量C为横坐标，峰面积A为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程为：A=3.2945C-2.2794，r=0.9999。结果表明仙茅苷在0.0642～6.42μg/ml范围内，峰面积与进样量线性关系良好。

    2.5  精密度试验  精密吸取仙茅苷对照品溶液（浓度0.03210mg/ml），按上述色谱条件重复进样6次，测定仙茅苷峰面积分别为389.65、391.34、390.43、390.26、390.3、389.51，其RSD为0.2%。结果表明本方法精密度良好。

    2.6  重复性试验  取样品（批号：0706019），按“2.1.2”项下操作，平行制备6份供试品溶液，上述色谱条件进样，测定仙茅苷含量分别为1.4496、1.4638、1.4356、1.4603、1.4729、1.4395μg/ml，RSD为1.0%。结表明重复性良好。

    2.7  稳定性试验  取供试品溶液（批号：0706019）于0、4、6、8、12、18、24h进样分析，测定仙茅苷峰面积分别为402.33、393.91、397.34、395.49、386.30、397.02、393.06，其RSD为1.2%。结果表明供试品溶液在24h内基本稳定。

    2.8  加样回收率试验  取样品（批号：0706019）1g，一式9份，精密称定，分别精密加入一定量仙茅苷对照品，照“2.1.2”项制备成加样供试品溶液，按上述色谱条件，测定仙茅苷含量，计算加样回收率。结果见表1。结果表明本方法回收率良好。表1  仙茅苷加样回收率试验（n=9）

    2.9  样品测定  取3批样品（批号：0706017、0706018、0706019），照“2.1.2”项制备成供试品溶液，按上述色谱条件，测定仙茅苷峰面积，按外标法计算仙茅苷含量分别为1.46、1.45、1.47mg/袋。

    3  讨论

　　本实验在选择色谱条件时，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，比较了甲醇-异丙醇-水（20：5：75）和0.1%磷酸-乙腈（75:25）等流动相系统，最终确定本文色谱条件，分离效果较好。本实验采用RP-HPLC法测定仙黄颗粒中仙茅苷的含量，该测定方法简便、稳定、精密度高、重现性好，适用于仙黄颗粒中仙茅苷的质量控制。

【参考文献】
  1 国家药典委员会.中华人民共和国药典，2005年版（一部）.北京:化学工业出版社,2005,120.

（编辑：黄 杰）

作者单位：201318 上海，扬子江药业集团上海海尼药业有限公司