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【摘要】 目的 初步了解β-地中海贫血在中山地区的发病率及基因突变类型。方法 本文采用聚合酶链反应-反向点杂交（PCR-RDB）方法，对2002年11月～2003年10月间的3052例婴儿脐血进行了β-珠蛋白基因的初步分析。结果 中山地区β-地中海贫血的发病率为2.33%，共检出7种基因突变类型，按其发生率高低依次为CD41/42、IVS-nt654、TATA nt-28、CD26、CD17、TATA nt-29和CD71-72。结论 中山地区为β-地中海贫血高发区。
β珠蛋白生成障碍性贫血亦称β-地中海贫血，呈常染色体隐性遗传，在中国华南及西南地区高发。本病重
症型为致死性疾病，在高发区常对人口质量构成严重威胁。由于目前缺乏对重症地中海贫血的有效治疗手段，避免重症地中海贫血患儿的出生是控制本病的可行方法。因此，了解本地区地中海贫血基因的发生频率及其类型，对于开展有关地中海贫血的宣传教育，指导优生优育工作具有重要意义。
1 材料与方法
1.1 材料 2002年11月～2003年10月间在我院出生的活产婴儿，抽取肝素抗凝脐血，常规方法提取DNA。
1.2 方法 试剂盒由中山医科大学达安基因有限公司提供。
1.2.1 聚合酶链反应（PCR） 用两对引物P1/P2和P3/P4分别进行PCR扩增。条件为93℃预变性3min后，93℃1min，55℃2min，72℃1min30s，共35个循环，末次循环后，72℃保温5min。各取5μl扩增产物进行2%琼脂糖电泳。以P1/P2引物扩增的产物出现602bp条带，覆盖β珠蛋白基因的15个突变位点;P3/P4引物出现423bp条带，覆盖IVSnt（654C-T）1个突变位点。
1.2.2 反向点杂交（RDB） 将已结合有多种特异性ASO探针的尼龙膜条浸入杂交液中，加入两管PCR扩增产物并混匀，100℃水浴中变性后，42℃杂交过夜。洗膜，最后将膜条转移到显色液中，室温下暗盒内显色30min，观察结果。
2 结果与讨论
基于方法学限制，本研究仅检测18种β珠蛋白基因突变类型。3052例活产婴儿脐血中，检出β地中海贫血基因（均为杂合子）71例，基因携带率为2.33%。与已报道的广东省地中海贫血基因携带率相近 ［1］ 。检出地中海贫血基因类型7种，分布如表1，最常见的3种地贫基因类型与省内已有报道相同 ［2］ 。
β地中海贫血是一组具有高度遗传异质性的疾病。资料研究表明，β珠蛋白基因突变类型现已超过300种［3］ ，这些突变涉及珠蛋白基因的外显子、内含子、5′非翻译区、3′非翻译区、多聚A信号、启动子、增强子及座位控制区 ［4］ 。突变所造成的后果可以影响珠蛋白基因的转录、转录后加工、翻译，甚至 翻译后产物的稳定性 ［5］ 。国内已报道的基因突变型达28种 ［6］ 。
本文利用PCR-RDB方法对3052例活产婴儿脐血进行了初筛。对具有β地中海贫血表型（血常规表现为小细胞低色素或血红蛋白电泳HbA减低<12%）但未检测出基因突变者将行β珠蛋白基因的全段测序。
表1 71例β地中海贫血杂合子突变类型（略）
参考文献
1 广东省血液病协作组.广东省253267人血红蛋白病调查研究.广东医学，1985，6（1）:4.
2 廖灿.反向点杂交法用于80例β-地中海贫血的快速产前诊断.中华血液学杂志，1996;17（8）:413.
3 Ballas SK，Cai SP，Gabuzda T，et al.Molecular basis of asymptomatic beta-thalassemia major in an African American individual.Am J Med Genet，69（2）:196-199.
4 Huisman THJ，Carver MFH，Baysal E.A syllabus of thalassemia mutations.The Sickle Cell Anemia Foundation in Ausgust.GA USA，1997.
5 Oliver NF.Theβ-thalassemia.N Engl J Med，1999，341（2）:99-109.
6 Ko TM，Xu X.Molecular study and prenatal diagnosis of alpha-and beta-thalassemias in Chinese.J Formos Med Assoc，1998，97（1）:5-15.
（收稿日期:2004-07-05）
作者单位:528403广东省中山市博爱医院生殖遗传医学中心
（编辑若 木）